Подсчет форменных элементов крови

Цель работы:ознакомится с устройством принадлежностей и принципами их использования для подсчета форменных элементов.

Для работы необходимы:микроскоп, счетная камера с сеткой Горяева, смесители для эритроцитов и лейкоцитов, покровные стекла для разбавляющих растворов, фильтровальная бумага, 3% раствор поваренной соли, 3% раствор уксусной кислоты, подкрашенной метилвиолетом, спирт, эфир, йод, вата.

Ход работы.Для подсчета форменных элементов крови необходимо ознакомиться с применяемыми принадлежностями и особенностями методики. Подсчет форменных элементов производится с применением счетной камеры и сетки Горяева. Счетная камера представляет собой утолщенное предметное стекло, на поверхности которого четырьмя желобками образованы три узкие площадки. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм, и при притертом покровном стекле («до колец Ньютона») к двум крайним площадкам образуется просвет высотой 0,1мм. Средняя площадка разделена пополам бороздкой, по обеим сторонам от которой нанесена сетка Горяева, состоящая из 225 больших квадратов, из которых 25 квадратов разделены еще линиями на 16 малых квадратов площадью 1/400 мм. Объем пространства под покровным стеклом над каждым малым квадратом равен 1/4000 мм, который заполняется раствором крови. При подсчете форменных элементов крови пользуются правилом Егорова, согласно которому эритроциты в малых, а лейкоциты в больших квадратах причисляются к данному квадрату только те, которые находятся внутри квадрата и на его верхней и левой разграничительных линиях. Перед использованием необходимо счетную камеру поставить под микроскоп и при малом и большом увеличении разобраться в устройстве сетки, найти большие и малые квадраты, научиться перемещать камеру под микроскопом в нужном направлении для подсчета. До заправки камеры разведенной кровью нужно тщательно протереть камеру салфеткой и аккуратно притереть покровное стекло. С целью подсчета форменных элементов забор и разведение крови производят соответствующими смесителями для эритроцитов и лейкоцитов. Смесители должны быть чистыми и сухими. Смеситель представляет собой капиллярную трубку с ампулообразным расширением, внутри которого имеется бусинка для размешивания крови с разводящей жидкостью. На длинной части капилляра у смесителя для эритроцитов есть метки 0,5 и 1,0, а над ампулообразным расширением – метка 101. У смесителя для лейкоцитов имеются соответственно метки 0,5; 1,0 и11. Кровь набирают до меток 0,5 или 1,0, а разбавляют в смесители для эритроцитов – до метки 101, в смесителе для лейкоцитов – до метки 11. Таким образом, смеситель для эритроцитов позволяет получить разведение в 200 и 100 раз, а смеситель для лейкоцитов – в 20 и 10 раз. Сделать результаты. Выводы.

Опыт № 3

Подсчет эритроцитов

Цель работы:определить количество эритроцитов в 1 мм цельной крови.

Для работы необходимы: все то же, что указано в работе по подсчету форменных элементов крови.

Ход работы. Подготовив счетную камеру и 3% раствор поваренной соли в часовом стекле, обычным способом набирают кровь из пальца в смеситель для эритроцитов до метки 0,5 (или 1,0) путем насасывания ртом через наконечник, надетый на верхнюю часть смесителя. Затем, обтерев кончик смесителя фильтровальной бумагой, быстро, чтобы не свернулась кровь, переносят смеситель на часовое стекло и, не вынимая наконечник изо рта, насасывают 3% раствора поваренной соли до метки 101, т.е. разводят кровь в 200 раз. Переводя смеситель в горизонтальное положение и зажав его концы между пальцами, круговыми движениями равномерно перемешивают содержимое смесителя. Выпускают из смесителя 2-3 капли крови на вату, а следующую каплю вносят в желобки или к краю покровного стекла счетной камеры и следят за тем, чтобы не появились пузырьки воздуха. Заполнив камеру кровью, помещают счетную камеру под микроскоп и под малым и большим увеличением находят сетку и расположенные над ней эритроциты, которые под действием гипертонического раствора слегка сморщиваются и становятся лучше видимыми. Подсчет эритроцитов производят в 5 больших квадратах, разделенных еще на 16 малых квадратов и расположенных в разных участках сетки (часто берут по диагонали). Предварительно на бумаги рисуют пять больших квадратов, разделенных каждый на 16 малых квадратов. Считают по правилу Егорова эритроциты в каждом малом квадрате и полученные результаты заносят в нарисованные квадраты.

Вычислив общее количество эритроцитов в 80 малых квадратах (Э), определяют среднее арифметическое количество эритроцитов в каждом малом квадрате (Э/80). Зная объем одного малого квадрата (1/4000 мм³), степень разведения (в 200 раз), находят общее число эритроцитов (Х) в 1 мм³ цельной крови по формуле: Х= Э·4000·200/80 эритроцитов. Нарисовать большой квадрат, разделенные на малые квадраты, и находящиеся там эритроциты, записать полученное количество эритроцитов, сравнить с нормой и сделать выводы.

Опыт № 4

Подсчёт лейкоцитов

Цель работы: определить количество лейкоцитов в 1 мм³ цельной крови.

Для работы необходимы: все то же, что указано в работе, но подсчету форменных элементов крови.

Ход работы. Подготовив счетную камеру и 3% раствор уксусной -кислоты, подкрашенный метилвиолетом на часовом стекле, обычным способом набирают кровь из пальца в смеси­тель для лейкоцитов до метки 1,0. Обтерев кончик смесителя фильтровальной бумагой, быстро, чтобы не свернулась кровь, с часового стекла набирают разбавитель в смеситель до метки 11, т. е. получают разведение в 10 раз. Содержимое смесителя тщательно перемешивают, делая круговые движения смесите­лем, концы которого зажаты между пальцами. Под влиянием уксусной кислоты эритроциты гемолизируются, а метилвиолет окрашивает ядра лейкоцитов, что облегчает их подсчет. Поря­док подготовки, заправки счетной камеры и правила подсчета лейкоцитов те же, что и при подсчете эритроцитов. Подсчет лейкоцитов производится в 25 больших, не разделенных на ма­лые квадраты (в 400 малых квадратах), под малым увеличени­ем. Подсчитав количество лейкоцитов в 25 больших или в 400 малых квадратах (Л), определяют среднее арифметическое ко­личество лейкоцитов в одном малом квадрате (Л/400). Зная объем одного малого квадрата (1/4000 мм³), степень разведения (в 10 раз), находят общее количество лейкоцитов (X) в 1 мм³ цельной крови по формуле Х= (Л·4000·10)/400 лейкоцитов. Зарисовать один большой квадрат с видимыми в нем лейко­цитами, отметить найденное количество лейкоцитов и сравнить с нормой, сделать выводы.

Опыт № 5