Дифференциация желтух по наличию желчных пигментов

Уробилин в моче здоровых животных содержится в виде сле­дов. При гемолизе образуется избыток непрямого билирубина, холсбилирубина и уробилирубина.

Для обнаружения желчных пигментов в моче применяют обыч­но качественные пробы, основанные на свойстве билирубина окисляться в биливердин в присутствии окислителей (йод, азотис­тая, трихлоруксусная кислоты и др.).

Проба Разина. К 4—5 мл исследуемой мочи наслаивают люголевский раствор (1 г йода и 2 г йодистого калия на 300 мл дистил­лированной воды) или 1%-ный спиртовой раствор йода. При на­личии в моче билирубина на границе двух сред образуется зеленое кольцо.

Экспресс-метод Гаррисона. Для постановки анализа готовят по­лоски фильтрованной бумаги, пропитанные насыщенным раствором бария хлористого. Полоску опускают на 1 мин в исследуемую мочу, просушивают и наносят на нее 3 капли реактива Фуше, со­стоящего из 10мл 10%-ного раствора хлористого железа (FеС1з), 25%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. При наличии били­рубина получается зеленое окрашивание. Можно использовать пропитанные дихлорфенолиндофенолом индикаторные бумажки. При нанесении на них по одной капле исследуемой мочи, если в ней имеется билирубин, возникает зеленое окрашивание.

Проба Фуше. К 10—12мл мочи добавляют половину объема 15%-ного раствора бария хлорида, перемешивают. Бария хлорид осаждает билирубин. Содержимое пробирки фильтруют. На из­влеченный из пробирки фильтрат (предварительно его расправля­ют на сухой фильтровальной бумаге) вносят 2—3 капли реактива Фуше, состоящего из 100 мл 25%-ного раствора трихлоруксус­ной кислоты и 10%-ного раствора полуторахлористого железа. При наличии в моче билирубина на фильтре появляется зелено-синее или голубоватое окрашивание. Эта проба является одной из наиболее чувствительных и применяется в случаях, когда по­лучены неясные или сомнительные результаты с другими реак­тивами.

Количественное определение билирубина. Проводят его по методу Йендрашека-Гофта в модификации Вита. Принцип метода состоит в том, что билирубин, извлекае­мый из осадка (фосфорнокислого кальция) спиртом и диазосме-сью, образует азобилирубин.

Уробилиновые тела (уробилиноген и уробилин).Уробилиновые тела являются дериватами билирубина. Уробилин — нормальное включение мочи, образующееся в кишечнике при восстановле­нии билирубина. Будучи нестойким соединением, он легко окисляется в уробилин, содержание которого в моче достигает 0,5—1,5мг%. Увеличение его концентрации в моче — признак нарушения печеночной функции (цирроз, отравление), что бы­вает при эклампсии, отравлениях мышьяковистыми препарата­ми, фосфором, фенилгидразином, четыреххлористым углеродом, при всех механических желтухах, острых и хронических инфек­циях, абсцессе легких, пневмонии, туберкулезе легких (плохой прогностический признак), пернициозной анемии, во время рас­сасывания внутренних кровоизлияний. Отсутствие уробилина в моче при наличии желчных пигментов — показатель нарушения секреции желчи в кишечнике при механической (обтурационной) желтухе.

Уробилинурия связана с увеличением распада эритроцитов ге­моглобина (гемолиз, кровоизлияния, сердечно-сосудистые забо­левания, застой крови в печени и т. д.). Содержание стеркобилина при этом также возрастает. Уробилинурия отмечается также при энтероколитах, завороте кишок, их инвагинации и обтурации. Усиление образования уробилиногена связано с резким нараста­нием гнилостных процессов и повышением резорбции из кишеч­ника в кровь стеркобидиногена.

Для определения уробилиновых тел в моче из нее предвари­тельно удаляют билирубин и гемоглобин (при их наличии), для чего к 8 мл исследуемой мочи добавляют 2 мл 10%-ного раствора кальция хлористого (или бария хлористого) и несколько капель крепкого раствора аммиака до щелочной реакции. Полученную смесь фильтруют и в фильтрате определяют уробилин методами Флоренса, Богомолова, Шлезингера.

Длительное отсутствие уробилина в моче при одновременном увеличении билирубинемии свидетельствует о неблагоприятном течении болезни (переход хронического гепатита в цирроз, обтурационные желтухи вследствие злокачественных новообразова­ний). Появление уробилина в моче при механической желтухе — хороший прогностический признак.

Кровь и кровяные пигменты.В моче здоровых животных встре­чаются лишь единичные эритроциты (0—5 эритроцитов в 1 мм³), которые могут быть обнаружены спектроскопическими, микро­скопическими и химическими методами. Гематурия, или эритро-цитоурия (эритрурия), и гемоглобинурия чаще всего наблюдаются при патологическом состоянии (истинная гематурия) или могут быть ложными.

Истинные гематурии бывают ренальными (почечными), пост-рснальными (внепочечными) и смешанными. Отмечаются при за­стое крови в почках, нефритах, нефрозах, причем наличие белка в моче свыше 1 % и эритроцитов подтверждает ренальное их проис­хождение. Они бывают при сепсисе, инфаркте почек, тромбозе почечных вен и в других случаях. Функциональные почечные ге­матурии — следствие увеличения проницаемости почечного филь­тра (перегревание, сотрясение, токсикоинфекции, рахит, брон­хопневмония, лекарственная гематурия). Постренальные гемату­рии возникают при воспалении и травмах мочеотводящих путей (пиелит, пиелоцистит, мочекаменная болезнь, опухоли). Смешан­ные гематурии возникают при геморрагических диатезах (гипо- и ниитаминоз С, анемия, врожденные дефекты). Ложные гемату­рии — результат примеси крови из половых органов.

Гемоглобинурия бывает первичной (идиопатической) и вто­ричной (симптоматической). Она может возникнуть при гемолизе эритроцитов. Моча, содержащая гемоглобин, имеет темно-крас­ный цвет, а в ее осадке эритроцитов нет. Идеопатическая гемоглобинурия отмечается при переохлаждении, перенапряжении (пара­литическая миоглобинурия лошадей), перегреваниях.

Гемосидеринурия обычно является следствием хронических ге­молитических анемий, эритробластозов, гемахроматозов. Если ге­матурия определяется макроскопически, то специальные исследования на гематурию проводить не обязательно, а при подозрении на гематурию проводят химический анализ и микроскопию моче­вого центрифугата.

Все химические пробы на гематурию сводятся к обнаружению кровяного пигмента путем гемолиза эритроцитов и освобождения из них гемоглобина, который способен отнимать водород от пира­мидона, гваяковой смолы, бензидина и других органических со­единений и переносить его на пероксид водорода с образованием окрашенных соединений. Чувствительность качественных проб возрастает после извлечения кровяного пигмента из мочи эфиром. Для приготовления эфирной вытяжки к 10—15 мл нативной пере­мешанной мочи добавляют 2 мл ледяной уксусной кислоты, 8 мл этилового эфира и 1 каплю этилового спирта, взбалтывают и дают постоять.

Проба с гваяковой смолой. К 2 мл эфирной вытяжки мочи добав­ляют 6 капель спиртового свежеприготовленного насыщенного раствора гваяковой смолы и 8 капель свежего пероксида водорода. При положительной реакции через 5—8 мин появляется синее ок­рашивание.

Проба с пирамидоном. К 2 мл эфирной вытяжки добавляют 8 ка­пель 5%-ного спиртового раствора пирамидона и 8 капель свежего пероксида водорода. Положительная реакция отмечается по фио­летовому окрашиванию жидкости.

Проба с бензидином. К 2 мл эфирной вытяжки мочи прибавляют 5 капель 5%-ного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте и 8—10 капель пероксида водорода. При наличии крови в моче появляется зеленое окрашивание раствора. Однако эта реакция не является специфичной только для гематурии.

Количественные методы определения крови в моче практичес­кого значения не имеют.

Проба на миоглобин. К 5 мл исследуемой мочи добавляют 2,8 г кристаллического аммония сульфата и фильтруют. Если фильтрат имеет красно-коричневый цвет, то в моче содержится миоглобин (миоглобинурия); если цвет фильтрата нормальный, то в моче присутствовал гемоглобин, около 80 % которого осаждается реак­тивом. Повышение содержания миоглобина в моче характерно для паралитической миоглобинурии лошадей, отмечается при электротравмах, физических травмах мышц, а также тяжелых мио­зитах.

Желчные кислоты. В моче они появляются только при патоло­гических состояниях, указывая не на гемолитический, а на пече­ночный генез желтухи (механической, обтурационной желтухи, дегенерации печеночных клеток), при нарушении гемоциркуляции — на сердечную декомпенсацию.

Проба Гай—Крафта. Желчные кислоты снижают поверхност­ное натяжение жидкостей. Кислую мочу нейтрализуют щелочью. На поверхность мочи в пробирке (2—3 мл) насыпают на кончике скальпеля порошок серого цвета. Если порошок быстро опускает­ся на дно пробирки, это означает, что в моче более 0,01 % желч­ных кислот, если он не тонет, это значит, что в моче нет желчных кислот.

Индикан. Он представляет собой калиевую или натриевую соль ипдоксилсерной кислоты и является постоянной составной час­тью нормальной мочи. Образуется в тонком кишечнике при гние­нии белков, содержащих триптофан (индоламинопропионовую кислоту). Продукты этого расщепления (индол и скатол) ядовиты и окисляются в печени, образуя эфир индоксила и индикан. Оп­ределение индикана основано на превращении его в индоксил мосле гидролиза эфирной связи минеральной кислотой и последу­ющего окисления индоксила железом хлорным или калием перманганатом до синего или красного индиго. В моче здоровых животных индикан обычными качественными реакциями не обнару­живается. Индиканурию отмечают при усилении гнилостных про­цессов в кишечнике, длительных запорах, диспепсиях, наличии гнойных очагов в организме (абсцессы, эмпиемы, гнилостные бронхиты, опухоли), хронической почечной недостаточности. В моче лошадей содержание эфиросерных кислот (индиканы, фено­лы) может достигать 220 мг/л, крупного рогатого скота —30, ко­шек, кроликов, собак —5—20 мг/л. Фенола в моче лошадей и крупного рогатого скота может быть 0,9—1,2 г/л.

Исследование мочи на индикан проводят по методам Яффе и Обермейра.

Цветная осадочная реакция Кимбаровского (ЦОРК). В три пробирки заливают по 1 мл свежей мочи и вносят 5%-ный водный растор серебра нитрата: в первую пробирку — 1 мл, во вторую — 0,75, а в третью — 0,5 мл. Каждую пробирку нагревают до кипе­ния, постоянно взбалтывая. В течение 12 мин остужают. Положи­тельная реакция проявляется цветной реакцией, интенсивность которой пропорциональна тяжести заболевания. Выделяют чер­ный, грифельный, темно-серый и коричневый цвета реактива. Ре­акция не является специфичной и дает положительный результат мри различных болезнях. Имеет значение для оценки тяжести па­тологии и эффективности лечения.

Реактив серебра нитрата нестоек, должен храниться недлитель­но и холодильнике в темной посуде.

Общий азот мочи и его фракции. Аминокислоты, не использо-иапные для синтеза белка и образовавшиеся в результате его рас­щепления в организме, подвергаются распаду с образованием ам­миака, оксида углерода и воды. Часть аммиака выделяется с мо­чой в виде солей аммония. Основная часть его идет на синтез моменины в печени, являющейся основным конечным продуктом обмена простых белков. Конечным продуктом распада сложных белков — нуклеопротеидов — наряду с мочевиной является моче­вая кислота.

Под общим азотом понимают сумму азотосодержащих веществ мочи (азот мочевины, мочевой кислоты, креатина, креатинина, аммонийных солей и др.). Известно, что 100 г белка содержат 16 г азота. Зная количество азота в моче, можно рассчитать содержа­ние распавшегося в организме белка. 80—90 % азота, выделяемого с мочой из организма, составляет азот мочевины. Изменения в ко­личественном и качественном составе азота мочи позволяют су­дить о белковом обмене в организме, функции печени, почек, где образуются и выделяются азотистые вещества мочи. Около 9/10 азота корма из организма животных выделяется с мочой, 1/10 — с калом, остальная часть — с потом. При этом на долю азота прихо­дится около 85 % азота, мочевой кислоты — 16, азота креатина — 2—6, азота аммиака — 5, азота гуриновых оснований — 0,2 и азота гиппуровой кислоты — 0,5 %. В норме количество азота в моче за­висит от живой массы животного, содержания протеина в рационе и потребления воды. При патологических условиях повышенное выделение азота с мочой отмечается при рассасывании экссудатов и транссудатов, лихорадке, диабете, хроническом отравлении фос­фором в связи с увеличением распада белка, при перегрузке глау­беровой солью, бурой, натрия салицилатом. Уменьшение азота в моче отмечают при образовании экссудатов и транссудатов, диа­реях, после обильного потения, при остром нефрите, а также при атрофии печени, гангрене, бронхоэктазии и абсцессах в легких.

Количественное определение мочевины в моче. В норме содержание мочевины в моче меняется в зави­симости от состава и количества кормов. При безбелковой диете оно снижается. Повышение выделения мочевины бывает при уси­ленном распаде тканевых белков (лихорадке), тяжелом диабете, физическом напряжении. Патологическое снижение выделения мочевины может быть при циррозе, раке печени, жировом ее пе­рерождении, отравлениях, при нефритах, приводя в тяжелых слу­чаях к азотемической коме (уремии). Считается, что если концен­трация мочевины в моче достигает 2 %, можно с достоверностью исключить возможность развития истинной уремии. Отдельные порции мочи отличаются по содержанию мочевины, поэтому и определение надо проводить в средней пробе.

Метод Бородина. Принцип метода состоит в разложении моче­вины бромноватистой щелочью и изменении объема выделяюще­гося при этом свободного азота.

Определение аммиака в моче диффузионным методом (по Конвею—Байрну). Аммиак образуется при распаде белка и в печени синтезируется в мочевину. Он участвует также в нейтрализации образующихся в организме кислот. Количество аммиака в моче составляет 3—5 % всего азота мочи. Аммиачный коэффициент (отношение азота аммиака к азоту мочи) в норме колеблется от 3 до 5,5. Увеличение аммиака в моче отмечается при циррозе пече­ни, некоторых нарушениях обмена (сахарный диабет, кетоз, рво­та, эксикоз, гипокалиемия, гипонатриемия и др.), а уменьше­ние — при избыточном поступлении щелочей, нефритах.

Принцип метода состоит в том, что свободный аммиак мочи иытесняется из нее щелочью и улавливается отмеренным количе­ством титрованной кислоты.

Креатин и креатинин.Креатин и креатинин в моче — нормальные продукты азотистого обмена. Азот креатина составляет 5—6 % всего азота мочи. Выделение креатина и креатинина не связано между собой. Появление избыточного их количества связано с на­рушением обмена веществ и ацидозом. Отмечается при напряжен­ной мышечной работе, на основе чего для оценки ее интенсивно­сти определяют креатиновый коэффициент, т. е. выясняют коли­чество креатина и креатинина (в мг) в суточной моче, приходя­щееся на 1 кг массы тела. Для лошадей он равен 6,8—7,5, для собак — 8,4, для птиц — 3,4 и увеличивается после тяжелых физи­ческих нагрузок. Креатина в моче мало, но при беременности, у растущих животных, при понижении температуры тела, мясной дне те, голодании его количество в моче возрастает.

При астении, миозитах, миотониях количество креатина уве-ничивается, а креатинина — снижается. Углеводное голодание гикжс приводит к креатинурии. Среднее содержание креатинина в моче лошадей составляет 0,0035%, крупного рогатого скота — 0,009, свиней — 0,01, собак — 0,0087 %. Креатинин исследуют ка­мее тненными пробами Ваттля, Яффе, а количественное определе­ние проводят колориметрическим методом Фолина.

⃰⃰⃰ ⃰ ⃰

Мочевая кислота является конечным продуктом обмена пури-пппмх оснований; ее содержание в моче не превышает 1—3 % всего количества азота мочи и не зависит от интенсивности обмена пуклеопротеидов, диеты и активности ксантиноксидазы печени. При усилении распада нуклеопротеидов (лейкопения) содержа-нне ее в моче увеличивается. Повышение выделения мочевой кислоты отмечают при крупозной пневмонии, лейкемии, эпилепсии, хорее, после дачи внутрь натрия салицилового, атофана, а сниже­ние иыделения ее с мочой — при атрофии мышц, отравлении пре­паратами свинца, даче внутрь калия йодистого, атропина, хинина, н^-ксаметилентетрамина (уротропина) и др.

Определение мочевой кислоты в моче имеет интерес при диаг­ностике подагры. Этой реакцией пользуются при определении на­личия мочевой кислоты в мочевых камнях (уролитиазис).

Активность диастазы в моче.Определяют ее по Волъгемуту. В нормальной моче активность диастазы составляет 16—55 ед. По­вышение ее активности до 100 ед. и более бывает при панкреатите, некрозе поджелудочной железы, поражении желчных путей. При обтурации протока поджелудочной железы активность энзима па­дает, а при почечной недостаточности в моче не обнаруживается. Для исследования используют свежую мочу (не позднее чем через 45 мин после мочеиспускания), так как диастаза быстро разруша­ется.

Витамин С в моче.У здоровых животных, если кровь и ткани содержат нормальное количество ее (депо витаминов насыщен­но), почти вся введенная в организм аскорбиновая кислота (вита­мин С) выводится из организма. Если депо не насыщено, дается нагрузка аскорбиновой кислотой в течение нескольких дней в те­рапевтической дозе, 50 % ее выводится из организма через 12 ч после введения. Насыщение организма наступает через 1—4сут, когда основная часть выделяется с мочой.