Микозов, вызываемых плесневыми и дрожжеподобными грибами. биопрепараты

Цель занятия. Ознакомить студентов со свойствами возбудите­лей, методами микологического исследования и этапами лабора­торной диагностики трихофитии, микроспории, аспергиллеза, пенициллиоза, мукоромикоза, кандидамикоза, эпизоотического лимфангита, кокцидиоидомикоза.

Оборудование и материалы. Материал от животных, поражен­ных трихофитией и микроспорией, культуры грибов рода Мисог, Aspergillus, Candida на плотной питательной среде Сабуро или др., препаровальные иглы, микологические крючки, предметные и покровные стекла, смесь воды, спирта, глицерина (поровну), 20%-й раствор гидроксида натрия или гидроксида калия, 50%-й водный раствор глицерина, плакаты, таблицы, биопрепараты.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Микозы — группа болезней животных и человека, вызывае­мых патогенными микроскопическими грибами. Основные ме­тоды лабораторной диагностики этих болезней: микроскопия, выделение и идентификация грибов-возбудителей.

Дерматомикозы. Заболевания кожи и ее производных. Восприимчивы сельскохозяйственные животные всех видов (преимущественно молодняк), пушные и хищные звери. У людей инфицированию более подвержены дети. Важным фактором за­ражения служит мацерация кожи.

Возбудители дерматомикозов — грибы дерматофиты, принад­лежат к высшим, несовершенным (класс Deuteromycetes) грибам, широко распространены в природе. Они паразитируют на ороговевших субстратах, выделяя кератиназу, разлагающую кератин эпидермиса, волос, ногтей. К дерматофитам относят представи­телей трех родов: Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton (более 40 видов). В быту трихофитию и микроспорию называют «стригу­щий лишай».

Трихофития. Инфекционное заболевание. Характеризуется появлением на коже округлых или овальных облысевших очагов с мягкими, иногда сухими корочками в области головы. Поражения могут распространяться по поверхности тела животного (рис. 117, 118).

При поверхностной форме размер повреждений 1...5см в диа­метре, иногда развиваются более обширные очаги. Корки легко отделяются вместе со склеенными волосами, под ними на слегка влажной поверхности кожи торчат обломавшиеся волосы, кое-где встречаются папулы и пузырьки.

При глубокой форме болезни наблюдают несколько очагов поражения с ярко выраженными экссудативными и воспалитель­ными процессами, инфильтрацию, большое количество фолликулярных пустул. Встречаются множественные экссудативные поражения. Все очаги покрыты засохшим серозно-гнойным экс­судатом. При удалении корок обнаруживают эрозии. Часто отме­чают осложнения секундарной инфекцией.

Основные возбудители трихофитии: у крупного рогатого ско­та, буйволов, зебу, оленей — Т. verrucosum (син. Т. faviforme), реже Т. mentagrophytes; у лошадей — Т. equinum и Т. mentagrophytes; у овец и коз — Т. verrucosum, Т. mentagrophytes; у свиней — Т. mentagrophytes; у верблюдов — Т. verrucosum, Т. sarkisovi; у собак и кошек — Т. mentagrophytes (кошки редко болеют трихофитией); у пушных зверей и кроликов — Т. mentagrophytes, редко Т. verrucosum; у лабораторных животных (мыши, крысы, хомяки, морские свинки) — Т. mentagrophytes; у птиц — Т. gallinae. Этот возбудитель известен давно как возбудитель парши (фавуса) пре­имущественно у рода куриных. Раньше болезнь называли «белый гребень».

Микроспория. Инфекционное заболевание кожи и ее произ­водных. Появление очагов поражения сопровождается воспали­тельным процессом, обламыванием и выпадением волос, иногда наблюдают поражение когтей.

Основные возбудители микроспории: у кошек и собак — М. canis (син. М. lanosum); у лошадей — М. equinum, редко М. distorum и М. gypseum; у свиней — М. canis; у пушных зверей, кроликов — М. canis; у лабораторных животных — М. canis; у крупного рогатого скота и овец — М. canis и М. gypseum. Микро­спорией болеют дикие звери, а также животные зоопарков и цир­ков.

Лабораторная диагностика трихофитии и микроспории основа­на на результатах микологического исследования.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии и люминесцентного анализа, выделение чистой культуры посевом на специальные питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют соскобы с пораженных частей тела животного вместе с корочками и чешуйками, пораженные волосы с участков, граничащих со здоровой кожей.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Чаще готовят неокрашенные (нативные) препараты. Исследуемый материал помещают в чашки Петри, измельчают ножницами и расщепля­ют с помощью скальпеля. Затем кусочки волос, чешуек, корочек переносят на предметное стекло, наносят каплю 20%-го раствора гидроксида натрия или гидроксида калия и слегка подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. После этого добав­ляют каплю 50%-го водного раствора глицерина. На приготов­ленный препарат накладывают покровное стекло и просматрива­ют сначала под малым увеличением сухого объектива (х 8), затем с объективом х 40 или с помощью иммерсионной системы.

С целью дифференциации грибов рода Trichophyton и Microsporum учитывают характер расположения спор в поражен­ном волосе (рис. 119, 120) (цепочками или мозаичное), пользуясь следующими критериями:

Люминесцентный анализ заключается в следующем. Исследу­емый материал помещают в чашки Петри на расстоянии 20 см от ртутно-кварцевой лампы ПРК-2 или ПРК-4 с фильтром Вуда и просматривают под ультрафиолетовыми лучами в затемненном помещении. Пораженные возбудителем микроспории волосы дают яркое зеленоватое свечение. Корочки, чешуйки не светятся. Кроме того, с помощью люминесцентного анализа проводят ран­нюю диагностику атипичных и скрытых форм микроспории.

Обнаружение мицелия гриба и различных спор в материале — до­статочное основание для постановки диагноза на дерматомикозы.

Выделение и идентификация культур возбудителей трихофитии и микроспории. Культуры выделяют в сомнительных случаях для подтверждения диагноза. Для получения чистой культуры грибов отдельные волосы или фрагменты кожи, корочки высевают на специальные питательные среды — агар Сабуро, сусло-агар, МПА, содержащий 2 % глюкозы, агар Чапека и некоторые дру­гие. Чтобы освободить исследуемый материал от сопутствующей микрофлоры, перед посевом на питательные среды его обраба­тывают 60%-м этанолом в течение 5...7 мин, а затем дважды от­мывают дистиллированной водой и подсушивают в термостате при 37 °С, или же в питательные среды добавляют антибиотики (пенициллин, стрептомицин и др.) из расчета 100...200 ЕД/мл. Посевы инкубируют при температуре 26...28 °С 20...30сут и бо­лее. У выросших культур грибов изучают культуральные и мор­фологические свойства. Готовят препараты «раздавленная капля» (см. тему 5) и микроскопируют. При идентификации видов гри­бов руководствуются признаками, изложенными в таблице 35.

Биопрепараты. Препарат ТФ-130 (ВИЭВ) и сухая вакцина ЛТФ-130 (ВИЭВ) против трихофитии крупного рогатого скота содержат аттенуированный штамм Trichophyton verrucosum (faviforme).

Вакцина СП-I против трихофитии лошадей из штамма Trichophyton equinum.

Вакцина Триховис (ВИЭВ) сухая против трихофитии овец из штамма Trichophyton verrucosum (вариант автотрофикум).

Вакцину МЕНТАВАК против трихофитии пушных зверей и кроликов готовят из культуры Trichophyton mentagrophytes.

Вакцина Камелвак-ТС против трихофитии верблюдов содер­жит аттенуированный штамм гриба Trichophyton sarkisovi.

Вакцина МИКОЛАМ против трихофитии и микроспории плотоядных животных, нутрий и кроликов.

Поливак-ТМ — инактивированная вакцина против дермато-фитозов собак, включая 8 видов и разновидностей грибов рода Trichophyton и Microsporum.

Вакцина ВАКДЕРМ против дерматофитозов животных пред­назначена для борьбы с микроспорией и трихофитией собак, ко­шек, пушных зверей и кроликов. Готовят из высокоиммуногенных штаммов Microsporum canis, Microsporum gypseum и Trichophyton mentagrophytes.

Аспергиллез.Заболевание домашних и диких птиц, пчел, редко млекопитающих (крупный рогатый скот, овцы, козы, свиньи, ло­шади); восприимчив человек. Характеризуется гранулематозным поражением органов дыхания, в основном легких, нередко абор­тами. В легких при размножении возбудителя формируется аспергиллома. Аспергиллома (аспергиллезная мицетома) — шаро­образная масса мицелия диаметром до 2 см (обычно Aspergillus fumigatus) и клеточного детрита, заполняющая полости легкого, образовавшиеся вследствие разрушения ткани. В отечественной практике этим термином обозначают любую инфекционную гра­нулему, вызванную видами Aspergillus.

Возбудители аспергиллеза принадлежат к высшим несовер­шенным грибам класса Deuteromycetes, рода Aspergillus, группе го­ловчатых плесеней. Основные возбудители аспергиллеза живот­ных — A. fumigatus, A.flavus, A. niger.

Лабораторная диагностика аспергиллеза основана на результа­тах микологического исследования.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культу-рально-морфологическим и патогенным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют свежие трупы мелких животных, наложения, узелки, пораженные орга­ны или их кусочки, мокроту, яйца.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Непосред­ственное обнаружение гриба в неокрашенном или окрашенном препарате имеет значение лишь для предварительного диагноза. При этом выявление характерных для аспергиллов органов пло­доношения особенно ценно и значительно ускоряет лаборатор­ную диагностику. Исследуемый материал помещают в смесь этанола с глицерином и водой поровну или в физиологичес­кий раствор. Препараты микроскопируют, как описано в теме 5, ориентируясь на обнаружение органов плодоношения (рис. 121) — головка, стеригмы со спорами (см. тему 5).

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Для посева используют агар Чапека, Сабуро, кровяной, мозговой, кукуруз­ный агары, МПА (рН 5,5...6,5). Гранулематозную ткань обжигают над пламенем, вырезают стерильно кусочки из середины и рас­кладывают их на плотную среду в чашки Петри, а экссудат засе­вают в пробирки со средой, инкубируют при 25 и 37 °С. На 3...5-е сутки на плотных средах образуются характерные для аспергилл колонии (рис. 122... 124).

A.fumigatus на агаре Чапека образует разрастающиеся коло­нии — ровные или шероховатые. Развитый воздушный мицелий придает им войлочный вид белого цвета или, позднее, зеленого. Зрелые культуры в стадии спороношения черного цвета. С обрат­ной стороны колонии бесцветны или желтовато-коричневого цвета. Межвидовая дифференциальная диагностика основана на различиях в строении стеригм и конидий.

В препаратах из культуры можно обнаружить гладкие, корот­кие, зеленого цвета конидиеносцы. Воздушные гифы бывают септированы и без перегородок. Колбообразные вздутия, содер­жащие споры, находятся только в верхней части гифов. У стеригм одноярусное строение. Конидии темно-зеленого цвета, ок­руглые, шиповатые или полушаровидной формы.

A.flavus, A. niger на агаре Чапека формируют широко разраста­ющиеся колонии с обильным спороношением. Цвет колонии за­висит от массы конидий, развивающихся на конидиеносцах. При микроскопии культур обнаруживают бесцветный или светлоок­рашенный септированный мицелий. Часто образуются склероции шаровидной формы, представленные толстостенными клет­ками.

Биопроба. Метод применяют для подтверждения патогенности выделенных культур аспергилл. Кроликам, морским свинкам или белым мышам вводят внутривенно суспензию спор грибов (0,5... 1) • 10⁶, что вызывает развитие генерализованного процесса с типичным поражением органов дыхания, почек, сердца. При вскрытии в этих органах обнаруживают множество мелких узел­ков с интенсивным развитием гриба.

Птице скармливают корм, зараженный спорами аспергилла, или проводят ингаляцию спор в дыхательный аппарат.

С помощью микологических исследований дифференцируют аспергиллез от микозов, Вызванных другими плесневыми гриба­ми.

Пенициллиомикоз. Заболевание многих видов животных, воз­никающее на фоне снижения общей резистентности организма и характеризующееся поражением кожи, слизистых оболочек.

Основные возбудители пенициллиомикоза — грибы рода Penicillium: P. crustosum, P. glaucum, P. mycetomagenum.

Лабораторная диагностика пенициллиомикоза основана на ре­зультатах микологического исследования. Диагностика данного микоза затруднена в связи с тем, что грибы рода Penicillium часто выделяют из легких и других тканей при туберкулезе и других инфекциях. Важным признаком для подтверждения диагноза служит обнаружение в очаге поражения элементов гриба, фаго­цитированных макрофагами.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и патогенным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют пора­женные участки кожи, слизистых оболочек, пораженные органы и ткани от трупов.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Препараты «раздавленная капля» исследуют под микроскопом в окрашен­ном (по методам Грама, Циля—Нильсена и др.) и неокрашенном виде.

Важным диагностическим признаком служит обнаружение в нативных препаратах септированного мицелия и конидиеносцев, ветвящихся на вершине один или несколько раз в виде кисточки.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Материал высевают на сусло-агар, агары Чапека, Сабуро и др. и культиви­руют так же, как и возбудителей аспергиллеза и мукоромикоза. У выделенных культур грибов изучают морфологию колоний и внутреннюю структуру (табл. 36).

Биопроба. Заражают кроликов, морских свинок, крыс, белых мышей подкожно. На месте введения культуры грибов-возбуди­телей развивается абсцесс и формируется грануляционная ткань. При внутрибрюшинном и внутривенном введении развивается генерализованный процесс.

Мукоромикозы (мукорозы). Хронические заболевания, вызыва­емые плесневыми грибами. Характеризуются развитием гранулематозного процесса, сходного с туберкулезом, в лимфатических узлах и в легких, реже в других органах и тканях (кожа, ногти, слизистые покровы, пищеварительный тракт, центральная не­рвная система, мозг). К возбудителю мукороза восприимчивы свиньи, лошади, крупный рогатый скот, овцы, пушные звери; из лабораторных животных — морские свинки, мыши; болеют обе­зьяны, тюлени. Мукорозы людей встречаются в виде спорадичес­ких случаев.

Основные возбудители мукоромикоза — грибы видов Мисог mucedo, М. racemosus, Rhisopus nigricans и др.

Лабораторная диагностика мукоромикоза основана на резуль­татах микологического исследования.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбуди­теля по культурально-морфологическим и патоген­ным свойствам.

Материал для исследо­вания. Объектом исследо­вания служат некротизированные ткани, гной, экс­судат, гранулематозные ткани и др.

Микроскопия препара­тов из исходного материа­ла. В препаратах из иссле­дуемого материала в поло­жительных случаях обна­руживают несептированный мицелий. В круглых спорангиях на спорангиеносце видны эндоспоры (рис. 125). Для старого мицелия характерно присутствие хламидоспор.

Рис. 125. Четырехдневная культура Мисог racemosus на агаре Чапека:

1 — мицелий;

2— спорангия;

3— спорангиоспоры внутри спорангии и вне ее;

4— спорангиеносец

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Гранулематозную ткань обжигают над пламенем горелки и стерильно выре­зают из середины кусочки, которые раскладывают на поверхнос­ти среды Чапека (в чашках Петри) или других сред. Посевы ин­кубируют при 25...30ºС. Культуры грибов довольно крупные, ак­тивно развиваются на искусственных питательных средах. На третьи сутки приобретают вид войлочных клочковатых серовато-белых колоний (рис. 126), в последующем цвет может изменяться до коричневого или бурого.

Рис. 126. Войлочно-клочковатая серо­вато-белая колония двухдневной куль­туры М. racemosus на агаре Чапека

Биопроба. Метод применяют для изучения патогенности выде­ленных из исходного материала культур гриба. Кроликам, морс­ким свинкам и белым мышам вводят внутривенно, внутримышечно или внутрибрюшинно смыв спор и мицелия чистых куль­тур. Гриб развивается во всех внутренних органах и тканях. Кро­лики погибают через 15...20 дней после внутривенного заражения, мыши — через 5... 15 дней. Чаще поражаются почки, реже печень, сердце, селезенка (абсцессы, некроз эпителия ка­нальцев, разрастание грануляционной ткани).

Кандидамикоз (кандидоз, молочница и др.). Заболева­ние животных и человека. Характеризуется поверхно­стным поражением кожи, слизистых оболочек рото­вой полости, наружных мо­чеполовых органов. Возбу­дитель также вызывает вис­церальный микоз с поражением дыхательных пу­тей, желудочно-кишечного тракта, мочеполовой систе­мы, молочной железы, мы­шечной, костной и сердеч­но-сосудистой систем, ор­ганов зрения. При генера­лизации кандидамикозного процесса могут поражаться многие органы одновре­менно (рис. 127). Следстви­ем кандидамикоза у коров могут быть маститы, эндометриты и аборты.

Рис. 127. Серовато-белые мелкие узелки на слизистой зоба цесаренка, павшего от кандидамикоза

Основные возбудители кандидамикоза — С. albicans и С. tropicalis, реже С. krusei, род Candida, класс Deuteromycetes. Они широко распространены в природе. Наиболее часто их выделяют с поверхности различных фруктов, ягод, овощей. Candida albicans и др. входят в состав нормальной микрофлоры организма челове­ка и животных. Любые наруше­ния функций иммунокомпетентных клеток или нормаль­ного микробного ценоза при­водят к возникновению заболе­вания. С. albicans в основном поражает птиц, кур, гусей, уток, цесарок, индеек, голубей, фазанов и др. Более тяжело боле­ют поросята, телята, ягнята, щенки.

Лабораторная диагностика кандидамикоза основана на резуль­татах микологического исследования.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культу-рально-морфологическим и ферментативным свойствам.

Материал для исследования. Объектом исследования служат пленки, наложения, соскобы со слизистой оболочки, содержи­мое язв и эрозий, кусочки внутренних органов.

Микроскопия препаратов из исходного материала. В тканях жи­вотных С. albicans может образовывать дрожжевые клетки и гифы, обнаружение которых имеет диагностическое значение (рис. 128). Клеточная стенка мицелия в этом случае состоит из трех слоев и значительно уступает по толщине пяти-семислойной структуре дрожжевых клеток.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Материал (кроме внутренних органов) берут стерильной бактериологичес­кой петлей и тщательно растирают петлей или стеклянным шпа­телем по поверхности среды. Кусочки печени, селезенки или по­чек погружают в спирт, обжигают над пламенем спиртовки, а затем из глубины органов вырезают кусочек ткани и проводят им по поверхности плотной среды. Кровь из сердца, содержимое желудка и кишечника, почечной лоханки высевают на агар Сабуро в чашки Петри. Посевы инкубируют при 37° С 24...48 ч до появ­ления на питательной среде колоний (рис. 129, 130).

Идентификацию культур грибов проводят в два этапа.

На первом этапе изучают культурально-морфологические признаки выделенной культуры в первичном посеве на плотной питательной среде (агар Сабуро, МПА с глюкозой) (табл. 37).

На втором этапе для окончательной идентификации грибов рода Candida выделенную культуру высевают на жидкие пита­тельные среды (бульон Сабуро, картофельный, кукурузный агары или на аналогичные жидкие среды — кукурузный или картофель­ный отвар) и определяют культуральные признаки и цитоморфологические особенности. Посев на картофельный и кукурузный агары делают штрихом в толщу среды, разрезая петлей поверх­ность агара. При микроскопии учитывают наличие псевдомицелия, тип роста на этих средах; при­сутствие хламидоспор на кукуруз­ном агаре в чашках Петри исследу­ют при малом увеличении (рис. 131).

Рис. 131. Пятидневная культура С. albicans на кукурузном агаре:

1 — шаровидные хламидоспоры; 2— контурная оболочка хламидоспоры

На жидких питательных средах грибы С. albicans через 24...48 ч вы­зывают помутнение среды и обра­зование рыхлого осадка на дне пробирки. Для грибов С. tropicalis и С. krusei характерны глубинный рост и образование пленки и при­стеночного кольца.

Для дифференциации видов грибов рода Candida определяют ферментативную активность на жидких средах Гисса, содержащих 3 % различных углеводов и инди­катор Андреде. Посевы наблюдают в течение 10... 15 дней, учитывают кислото- и газообразование. Фер­ментативные свойства приведены в таблице 38.

Эпизоотический лимфангит (бластомикоз, африканский сап). Хроническое заболевание животных. Характеризуется пораже­нием лимфатических узлов, лимфатических сосудов и подкож­ной клетчатки с образованием язв, абсцессов и узелков. В отли­чие от дерматомикозов поражены более глубокие слои кожи. Бо­леют однокопытные животные: лошади, мулы, ослы, зарегистри­рованы случаи заболевания этим микозом парнокопытных — верблюдов и КРС (рис. 132).

Возбудитель эпизоотического лимфангита — Histoplasma farciminosus (син. Criptococcus farciminosus). Классификация криптококка неясна: одни исследователи причисляют его к бластомицетам, другие на основании некоторых биологических данных — к несовершенным грибам.

Лабораторная диагностика эпизоотического лимфангита осно­вана на результатах микологического и серологического исследо­ваний.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя при микроскопии препаратов-от­печатков из исходного материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и серологическим свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют содер­жимое абсцессов, гнойный экссудат язв.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Готовят пре­парат «раздавленная капля». Чаще микроскопируют неокрашен­ный препарат или красят по Граму или Романовскому—Гимзе. Благодаря окраске гранулы в цитоплазме хорошо различимы. Возбудителя эпизоотического лимфангита относят к дрожжеподобным грибам. В исследуемом материале обнаруживают криптококки — клетки яйцевидной или ли монообразной формы с четко выраженной двухконтурной оболочкой, клетки заострены на одном или обоих концах. Размеры криптококков З...5мкм в длину и 2...3,5 мкм в ширину. В гное находят по 2...3 криптококка, соединенных своими полюсами и иногда образующих цепоч­ки (рис. 133). Часть криптококков можно найти в лейкоцитах (нейтрофилах и макрофагах). Центральная часть криптококков представляет собой гомогенное, полужидкое вещество, содержа­щее одно или несколько (2...4) блестящих зернышек, которые находятся в беспрерывном и оживленном движении.

Необходимо учитывать, что для Н. farciminosus характерен ди­морфизм, т. е. морфология гриба в патологическом материале и в культуре различна.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. В сомни­тельных случаях микроскопии материал высевают на питатель­ные среды. Первичное выделение гриба затруднительно, но вы­деленную культуру удается поддерживать сравнительно легко. Гриб выращивают на МППА, глюкозно-глицериновом МПА (со­держание углеводов 2...2,5 %), агаре Сабуро при температуре 25...30°С.

Через 10... 12 дней на плотных питательных средах образуются колонии, сначала мелкие, в последующем более крупные, возвы­шающиеся над поверхностью среды. Колонии складчатые, сухие, кремового, а позднее коричневого цвета. В мазках из культуры дрожжевые клетки не обнаруживают. Вне живого организма гриб развивается в мицелиальной форме. Мицелий септированный, ветвящийся, многоклеточный.

Серологическая диагностика основана на ре­зультатах РСК с сапным антигеном.

Аллергическая диагностика. Для аллергической диагностики лимфангита используют гистоплазмин (Королевой) — фильтрат 3...4-месячной культуры криптококка. При сомнительном ре­зультате лабораторного исследования применяют дифференци­альную диагностику лимфангита и сапа, используя глазную про­бу с маллеином и подкожную пробу с гистоплазмином.

Кокцидиоидомикоз (ревматизм пустыни, долинная лихорадка и др.). Хроническое заболевание животных и человека, характери­зуется гранулематозным поражением лимфатических узлов, иногда легких у крупного рогатого скота и диссеминированной формой процесса со злокачественным течением у собак.

К заболеванию восприимчивы крупный рогатый скот, лоша­ди, ослы, овцы, свиньи, грызуны (мыши, крысы и др.). Описаны заболевания койотов, лам, кенгуру, обезьян, тигров и других животных. Птицы не болеют. Кокцидиоидомикоз человека относят к группе особо опасных микозов.

Возбудитель кокцидиоидомикоза — дрожжевидный почвен­ный гриб Coccidioides immitis.

Лабораторная диагностика кокцидиоидомикоза основана на ре­зультатах микологического и серологического исследований.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методами световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и патогенным свойствам.

Материал для исследования. Объектом исследования служат гной, кровь, содержимое очагов поражения и кусочки поражен­ных органов.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Из материала готовят препараты «раздавленная капля». При работе с такими препаратами нужно соблюдать предельную осторожность, так как грибы остаются живыми. Можно микроскопировать препа­раты в 10%-м растворе щелочи при подогревании: в этом случае гриб погибает быстро, но происходит деформация сферул. Чтобы избежать заражения исследователя грибом С. immitis, перед мик­роскопией патологический материал рекомендуют залить 10%-м раствором формалина на 10...15 мин. Такая обработка убивает гриб, но не влияет на его морфологические признаки. Положи­тельным результатом считают обнаружение сферул (например, в гное и мокроте) мицелия (рис. 134, 135). Сферулы — образования правильной круглой формы с двухконтурной оболочкой и с мно­гочисленными эндоспорами. Протоплазма зернистая. Диаметр сферулы от 20 до 120 мкм. Эндоспоры мелкие. Иногда обнаружи­вают сферулы с разорванной оболочкой и освобождающимися эндоспорами. Прорастание сферул в мицелий можно наблюдать непосредственно в патологическом материале. Для этого на предметное стекло наносят несколько капель в смеси с физиоло­гическим раствором, покрывают покровным стеклом и для пре­дохранения от высыхания заклеивают парафином по краям. От­сутствие сферул в препаратах при микроскопическом исследова­нии не дает оснований отрицать кокцидиоидомикоз.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Для посева исследуемый материал предварительно обрабатывают антибио­тиками в течение 30...60 мин для подавления бактериального ро­ста. Пенициллин добавляют из расчета 20 ЕД/мл среды, стрепто­мицин — 40 ЕД/мл. Для получения мицелиальной формы гриба в качестве питательной среды используют агар Литмана, агар Са­буро, сусло-агар; для получения дрожжевидной формы — кровя­ной агар, печеночный агар с глюкозой, мартеновский бульон (табл. 39). Культивируют при 25...27 и 35...37 °С.

Биопроба. Заражают нативным материалом и солевой суспензией из чистой культуры гриба. К кокцидиоидомикозу восприимчивы мыши, морские свинки, кролики, собаки, куриные эмбрионы. При развитии патологического процесса в зависимости от метода введе­ния исследуемого материала отмечают различные поражения.

При внутривенном введении культуры гриба развиваются абс­цессы во внутренних органах, гибель животных наступает через 20...30 дней.

При интратрахеальном заражении обнаруживают поражение легких и трахеобронхиальных лимфатических узлов.

При внутрибрюшинном заражении через 7... 10 дней процесс распространяется по брюшине с поражением внутренних органов.

При подкожном и интрацеребральном методах заражения возникает местный процесс с поражением лимфатических узлов.

При интратестикулярном — развивается гнойный орхит. В гное обнаруживают сферулы различных размеров и на разных этапах созревания, реже мицелий.

Двух-трехдневные куриные эмбрионы погибают через 3...6 дней после заражения. Использованные в работе материалы и инструменты подлежат немедленной стерилизации в автоклаве.

Серологическая диагностика основана на ре­зультатах следующих реакций: РА с антигеном из убитой культу­ры, РСК с кокцидиоидином, РП с полисахаридным антигеном.

При работе с С. immitis необходимо соблюдать правила техники безопасности, в частности надевать марлевые маски. Посевы про­водить лучше в пробирки со средой Литмана, мясо-пептонный бу­льон или другие жидкие среды, так как их удобнее использовать для микроскопических работ и заражения животных. На этих сре­дах гриб образует более компактные, непылящие колонии. Пере­сев с твердых сред рекомендуют делать до начала спороношения.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Приготовить и промикроскопировать препараты из матери­ала от животных, больных дерматомикозом.

2. Изучить культуральные свойства возбудителей трихофитии и микроспории.

3. Изучить культурально-морфологические характеристики грибов родов Mucor, Aspergillus, Candida.

4. Ознакомиться с биопрепаратами.

Контрольные вопросы

1. Какие микроорганизмы вызывают дерматомикозы?

2. Какова схема лабораторного исследования на дерматомикозы?

3. По каким критериям дифференцируют грибы родов Microsporum и
Trichophyton?

4. Какие плесневые и дрожжеподобные грибы вызывают микозы?

5. Какие вакцины применяют против дерматомикозов сельскохозяйственных
животных?

Тема 38

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОТОКСИКОЗОВ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ГРИБАМИ РОДОВ ASPERGILLUS, PENICILLIUM, FUSARIUM, STACHYBOTRYS, DENDRODOCHIUM

Цель занятий. Ознакомить студентов с характеристикой мико-токсинов, вызывающих микотоксикозы, грибами-продуцентами этих токсинов и методами исследований для постановки диагно­за на микотоксикозы.

Оборудование и материалы. Культуры грибов родов Aspergillus, PeniciUium, Fusarium, Stachybothrys и др. на агаре Чапека или дру­гих средах в чашках Петри (в больших пробирках), препароваль­ные иглы или микологические крючки, предметные и покровные стекла, микроскопы, таблицы и плакаты по данной теме.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Микотоксикозы. Болезни животных и человека; харак­теризуются отравлением, которое возникает при поедании кор­мов (пищи), содержащих токсические продукты жизнедеятель­ности микроскопических грибов-плесеней — микотоксины (от греч. mykes — гриб и toxinum — яд). Известно около 250 видов раз­личных микроскопических грибов, продуцирующих 100 токсических метаболитов. Природными субстратами грибов-проду­центов микотоксинов служат разнообразные сельскохозяйствен­ные культуры. К микотоксинам чувствительны почти все виды домашних, диких животных, птицы и рыбы. Наименование микотоксикоза происходит от названия токсина или гриба-проду­цента. При диагностике микотоксикоза наибольшее внимание уделяют обнаружению токсина, поскольку гриб-продуцент в ряде случаев к моменту исследования погибает и, кроме того, один и тот же микотоксин могут синтезировать различные виды грибов.

Лабораторная диагностика микотоксикозов основана на ре­зультатах токсико-биологических, органолептических, микологи­ческих и физико-химических исследований.

Материал для исследования. В лабораторию направляют пробы всех кормов, входивших в суточный рацион животного в течение одного месяца до проявления болезни, а также остатки кормов из кормушек, содержимое желудочно-кишечного тракта павших животных и др. Отбор средних проб корма проводят ветеринар­ные и зооинженерные специалисты с представителями предпри­ятий. Отобранную среднюю пробу делят на две части, упаковы­вают в чистые сухие стеклянные банки объемом 2...3 л, гермети­чески закрывают и пломбируют. Одну часть отправляют в лабо­раторию, другую хранят в хозяйстве в течение одного месяца в условиях, предотвращающих порчу или вторичное загрязнение. В документе указывают цель исследования, вид кормового сред­ства, назначение, массу всей партии, место отбора пробы, основ­ные клинические признаки у больных животных. Прилагают ко­пию акта вскрытия трупов (при гибели животных), копию экс­пертиз ветеринарной лаборатории об исключении инфекционных болезней и отравлений животных химическими или растительными ядами (если такие исследования были проделаны лабораторией).

Органолептическое исследование. Определяют внешний вид, цвет, запах корма, выявляют признаки, отличающие дефектный корм от доброкачественного (изменение цвета; затхлый, плесне­велый или гнилостный запах; наличие на поверхности корма ми­целия гриба и др.). О санитарном качестве зерна можно косвенно судить по цвету и состоянию зерновых оболочек.

Токсикологическое исследование. Проводят на различных био­логических моделях: кроликах, аквариумных рыбках гуппи поро­ды Винер, белых мышах или сельскохозяйственных животных.