Подсчет количества лейкоцитов в исследуемой крови.

Для подсчета количества лейкоцитов используется счетная камера Горяева. Она представляет собой толстое стекло, в средней части которого имеется 4 желобка. Между ними образуются 3 узкие пластинки. Средняя пластинка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от желобка расположены сетки Горяева. Так как высота боковых пластинок на 0,1 мм больше средней, то при наложении на них покровного стекла над сеткой образуется камера глубиной в 0,1 мм. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов. Каждый третий квадрат разделен дополнительно поперечными и продольными линиями на 16 маленьких квадратиков. Таких больших квадратов, разделенных на малые, в сетке 25. Подсчет лейкоцитов производится в больших квадратах. Сторона такого квадрата равна 1/5 мм, а объем жидкости над каждым квадратом в камере равен 1/250мм³.

Для подсчета лейкоцитов кровь разводят в 20 раз 6% раствором уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Для разведения крови используют особый лейкоцитарный меланжер (смеситель). Уксусная кислота разрушает оболочки эритроцитов, благодаря чему последние не мешают подсчету лейкоцитов, а окраска ядер лейкоцитов метиленовой синью улучшает их видимость.

Считают число лейкоцитов в 25 больших квадратах. Поскольку лейкоциты располагаются в беспорядке и некоторые из них лежат на границах квадратов, для получения точного результата принято считать лейкоциты, лежащие внутри квадрата и на верхней и левой границах и не учитывать те, которые лежат на правой и нижней границах. Вычисляют среднее количество лейкоцитов в одном квадрате. Определяют количество лейкоцитов в 1 куб. мм. неразведенной крови и в 1 литре (по СИ).

Расчет проводят по формуле: Х = А х 250 х 20

где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови

А – количество лейкоцитов, найденных в 25 квадратах

20 – разведение крови

250 - 1/250 мкл объем камеры над большим квадратом

25 – число просмотренных квадратов.

В выводе обсудить полученный результат и причины возможных отклонений изучаемого показателя.

Работа № 2.

Морфофункциональная характеристика лейкоцитов крови человека

Производится микроскопирование мазка крови человека (окрашенного по Романовскому-Гимза) с зарисовкой различных видов лейкоцитов и заполнением таблицы по морфофункциональной характеристике лейкоцитов.

Занятие № 8

Тема занятия: Иммунобиологические свойства крови: группы крови, резус-фактор. Система регуляции агрегатного состояния крови (РАСК).

Цель занятия: Освоить методы определения групп крови, по системе АВО и резус-фактора, времени свертывания крови. Изучить правила переливания крови с учетом групповой принадлежности крови и резус-фактора. Изучить физиологические механизмы свертывающей и антисвертывающей систем крови

Рекомендуемая литература:

1. Лекционный материал.

2. Логинов А.В. Физиология с основами анатомии человека. – М, 1983. – С. 120-129.

3. Алипов Н.Н. Основы медицинской физиологии. – М., 2008. – 149-161.

4. Физиология человека. Под ред. Г.И.Косицкого. – М., 1985. – С. 217-229.

Дополнительная информация:

Переливание крови (гемотрансфузию) следует рассматривать как операцию трансплантации чужеродной ткани. На мембране эритроцитов фиксировано множество антигенов – гликолипидов и гликопротеидов. В настоящее время их выявлено более 400. Все эти антигены способны индуцировать в организме человека, получившего переливание крови (реципиента), иммунные реакции на кровь донора.

Наибольшее клиническое значение имеют антигены системы АВО. Антигены этой системы находятся на мембране эритроцитов. Выделяют 3 типа антигенов: Н, А, В. Люди с группой крови I(0) имеют на эритроцитах антиген Н. Однако, к этому агглютиногену нет агглютинина, поэтому он не учитывается.

К агглютиногенам А и В есть агглютинины α и β. Между соответствующими агглютиногенами и агглютининами возможна иммуннная реакция. Агглютинины α и β являются природными антителами, т.е. они есть у каждого человека (в соответствии с его группой крови) независимо от его трансфузионного анамнеза. Плазма крови новорожденного ребенка еще не содержит агглютининов. После рождения они постепенно появляются к тому агглютиногену, которого нет на эритроцитах ребенка. Эти антитела относятся к Ig М.

Другие системы антигенов эритроцитов имеют меньшее клиническое значение, поскольку к ним в организме человека нет антител в обычных условиях. Однако, такие антитела могут появиться, если в организме уже произошла сенсибилизация (т.е. встреча) этим антигеном. Иммунный конфликт тогда может развиться при повторных переливаниях крови.

Основные правила переливания крови:

1. переливать можно только одногруппную кровь по системе АВ0;

2. нельзя переливать резус-положительную кровь резус-отрицательному реципиенту;

3. перед переливанием крови проводится:

а) определение группы крови по системе АВ0 и резус-фактору крови как донора, так и реципиента;

б) проба на совместимость – в 2-3 капли сыворотки реципиента добавляют маленькую каплю донорской крови – агглютинация должна отсутствовать;

в) биологическая проба – реципиенту вливают 5-10 мл донорской крови и в течение 3 мин убеждаются в отсутствии реакции, такую процедуру проводят 3 раза и только после этого выполняют гемотрансфузию полностью.

Вопросы для самостоятельной внеаудиторной работы студентов:

1. Назовите основные группы крови по системе АВО.

2. Дайте характеристику агглютиногенов и агглютининов крови.

З. В чем заключается реакция гемагглютинации ?

4. Что такое резус-фактор ?

5. В чем заключается резус-конфликт при переливании крови ?

6. Правила переливания крови с учетом групп крови и резус-фактора.

7. В чем заключается правило разведения (правило Оттенберга) ?

8. Основные компоненты системы регуляции агрегатного состояния крови.

9. Характеристика плазменных факторов свертывания крови.

10.Первичный (сосудисто-тромбоцитарный) гемостаз:

1. Роль сосудистой стенки в остановке кровотечения.