Обнаружение и определение производных 1,4-бензодиазепина

Из числа транквилизаторов производные 1,4-бензодиазепина остаются непревзойдёнными по активности и спектру терапевтического действия. Более того, с каждым годом спектр бензодиазепинов, обладающих физиологической активностью, непрерывно расширяется как в ряду производных 1,4-бензо­диазепина, так и за счет синтеза и внедрения в клиническую практику произ­водных 1,5- и 2,3-бензодиазепина.

В виду лабильности производных 1,4-бензодиазепина, объекты, направ­ляемые на судебно-химическую экспертизу, необходимо хранить в заморожен­ном виде или предварительно подвергать обработке соединениями фтора и ща­велевой кислотой. В настоящее время можно выделить два основных направле­ния в анализе объектов на производные 1,4-бензодиазепина:

а) по продуктам гидролиза — производным аминобензофенона,

б) по нативным соединениям и метаболитам.

Первое направление

Предусматривает кислотный гидролиз производных 1,4-бензодиазепина до соответствующих аминобензофенонов; экстракцию, и последующий анализ экстрактов с использованием хроматографических и спектральных методов. Основным преимуществом исследования производных 1,4-бензодиазепина по производным аминобензофенона, особенно при их получении в процессе дест­рукции ткани, состоит в том, что данный способ позволяет суммарно опреде­лять нативное соединение и ряд его метаболитов, При правильном проведении анализа в данном направлении ему придается отрицательное судебно-химическое значение. При положительном результате необходимо продолжать исследование по второму направлению, что позволит более точно установить природу яда.

Для кислотного гидролиза объекты заливают 12 н. соляной кислотой, на­гревают при температуре 140-145°С в течение 60 мин (кровь, моча, растворы лекарственных препаратов, гомогенаты тканей печени, почек или вытяжки из них) или 80-90 мин (стенки желудка и кишечника - гомогенаты или вытяжки из них).

Аминобензофеноны из гидролизатов экстрагируются хлороформом при рН=8. При дальнейшем исследовании применяют хроматографию в тонких сло­ях сорбента. В качестве подвижной фазы используется бензол, а также смесь хлороформ—ацетон (9:1). Метод предусматривает не только разделение ами-нобензофенонов, но и их обнаружение по собственной окраске, флуоресценции в УФ-области спектра, образованию азокрасителей с N-1-нафтилэтилен-диамином (реакция Браттона-Маршала).

Аминобензофеноны из зон, не обработанных реагентами элюируют эти­ловым спиртом или ацетоном. Полученные элюаты используют для снятия электронных спектров и газохроматографического исследования. Основные по­лосы поглощения аминобензофенонов в этиловом спирте наблюдаются в облас­ти 230-240 и 390-410 нм. Фотометрический метод основан на измерении при 535—550 нм оптической плотности окрашенных растворов полученных по ре­акции Браттона—Маршала. Второе направление

Исследование по нативным соединениям и основным метаболитам. Объек­тами являются кровь, плазма, сыворотка, моча (не менее 10 мл), ткань печени, почек (не менее 290 г), желудок и тонкий кишечник с содержимым (не менее 200 г). Изъятые объекты должны быть быстро заморожены и отправлены на су-дебно-химическую экспертизу. Консервирование этиловым спиртом не реко­мендуется. Судебно-химическую экспертизу биологических объектов на произ­водные 1,4-бензодиазепина желательно выполнять незамедлительно. Изолиро­вание нативных соединений и ряда гидрофобных метаболитов проводят под­кисленной водой с последующим концентрированием и очисткой экстракцией или сорбцией.

При «направленном» анализе на производные 1,4-бензодиазепина и их метаболиты в ТСХ скрининге целесообразно применять системы толуол-ацетон-25% аммиак (50:50:10), бензол-диоксан-25% аммиак (60:35:5), этилаце-тат-метанол-25% аммиак (80:10:5), этилацетат - абсолютный этанол (90:10). Система этилацетат - абсолютный этанол (90:10) эффективна при разделении хлозепида и его метаболитов, а толуол-ацетон-25% аммиак (50:50:10) — нитра-зепама и его метаболитов.

Способы обнаружения производных 1,4-бензодиазепина и их метаболитов на хроматограмме.

1. Взаимодействие с модифицированным реактивом Драгендорфа. Предел обнаружения от 2,5 до 10 мкг в пятне, который можно снизить в пять раз при последующей обработке 20% раствором серной кислоты.

2. Флюоресценция в УФ-области спектра (254 нм) производных 1,4-бензодиазепина и их метаболитов.

3. Собственная желтая окраска аминобензофенонов - естественных мета­болитов производных 1,4-бензодиазепина.

Проведение солянокислого гидролиза непосредственно на хроматографи-ческой пластинке (опрыскивание концентрированной соляной кислотой и тер-мосгатирование закрытой пластинки при 130-140°С в течение 30-40 мин) с по­следующим обнаружением аминобензофенонов в УФ-области спектра и по ре­акции образования азокрасителя с р-нафтолом или N-1-нафтилэтилендиамином (пластинку последовательно опрыскивают 2 н. соляной кислотой, 0,1% раство­ром нитрита натрия и, через две минуты, насыщенным раствором мочевины и 0,1% раствором N-1-нафтилэтилендиамина или (3-нафтола). Предел обнаруже­ния 0,1-0.5 мкг вещества в пятне.

Элюаты производных 1,4-бензодиазепина и их метаболитов из необрабо­танных реагентами зон используют для получения электронных спектров по­глощения в нейтральных, кислых и щелочных растворах. После концентриро­вания элюаты могут быть исследованы методом газожидкостной хроматогра­фии.

Заключение о нахождении того или иного производного 1,4-бензо-диазепина и их метаболитов можно сделать только по совокупности данных, полученных различными аналитическими методами, основываясь на знаниях метаболизма нативных соединений.

Количественное определение производных 1,4-бензодиазепина и их мета­болитов, выделенных из ткани органов, проводят, главным образом, фотомет­рическим методом, используя реакцию Браттона-Маршала.

Определение аминазина в драже и ампулированных растворахПри химико-токсикологическом исследовании драже взвешивают, а объ­ем содержимого ампулы измеряют, количественно переносят в делительную воронку, растворяют (или разбавляют) в 15 мл дистиллированной воды, подще­лачивают 50% раствором едкого натра до рН=13 и проводят экстракцию эфи­ром 3-4 раза порциями по 10 мл. Эфирные извлечения объединяют, реэкстраги-руют 0,5 н. раствором серной кислоты и водную фракцию исследуют на нали­чие аминазина.

Обнаружение кокаина

Для обнаружения кокаина проводят микрокристаллоскопические реак­ции.

1. Реакция с перманганатом калия (МКС). После удаления хлороформа сухой остаток на предметном стекле растворяют в капле 10%-го раствора соля­ной кислоты и жидкость испаряют при комнатной температуре. Затем к сухому остатку прибавляют каплю 1%-го раствора перманганата калия. Под микроскопом наблюдают кристаллы розово-фиолетового цвета в виде прямоугольных пластинок и сростков из них.

Реакция с платинохлористоводородной кислотой (МКС). Сухой остаток на предметном стекле после удаления хлороформа растворяют в капле 0,1 н. раствора соляной кислоты и добавляют каплю 10% раствора платинохлористо­ водородной кислоты. Под микроскопом наблюдают сростки кристаллов в виде перистых депдритов светло-желтого цвета.