Спектральные характеристики производных пиразолона-5
в УФ-области спектра
К4аксимумы светопоглощения в 0,1 н. серной кислоте: ■ антипирин - 230 нм, амидопирин - 256 нм, анальгин — 258 нм.
VII. Вопросы для самоконтроля
1. Опишите фармакологическое действие производных барбитуровой
кислоты и пиразолона-5.
2. Приведите классификацию производных барбитуровой кислоты по продолжительности действия с указанием представителей группы.
3. Как часто и по каким причинам происходят отравления, каковы пути поступления и виды отравления изучаемыми веществами?
4. -Опишите токсикологическое значение, особенности токсикокинетики и токсикодинамики производных барбитуровой кислоты и пиразолона-5.
5. Перечислите симптомы, возникающие при остром отравлении изучаемыми веществами.
6. Какие методы детоксикации используются при отравлении изучаемыми веществами, что является антидотом при отравлении производными барбитуровой кислоты?
7. Напишите химические структуры и укажите пути метаболизма производных барбитуровой кислоты и пиразолона-5.
8. Какие общие и частные методы используются для выделения изучаемых лекарственных средств из тканей органов и биологических жидкостей?
9. Какие предварительные реакции используются для обнаружения производных барбитуровой кислоты и пиразолона-5? Укажите условия их выполнения.
10.Опишите условия (система растворителей проявители) ТСХ-скрининга веществ кислотного характера (производных барбитуровой кислоты ипиразолона-5).
11.Какие реакции используются для подтверждения наличия производных барбитуровой кислоты? Укажите особенности проведения микрокристал-лоскопических реакций.
12.Объясните сущность снектрофотометричеекого метода исследования производных барбитуровой кислоты.
13.Нарисуйте спектры поглощения производных барбитуровой кислоты в зависимости от рН.
14.Опишите методику дифференциальной спектрофотометрии, используемую в анализе производных барбитуровой кислоты.
15.Напишите формулу расчета количественного содержания производных барбитуровой кислоты, выделенных из биологического материала, и объясните буквенные обозначения.
16.Какие реакции используются для подтверждения наличия производных пиразолона-5?
17.Какие современные методы используются для количественного определения производных барбитуровой кислоты и пиразолона-5?
VIII. Задания, обязательные для выполнения
Составить схему исследования по направлению:
1.Провести судебно-химическое исследование при подозрении на отрав
ление производными барбитуровой кислоты.
2.Провести судебно-химическое исследование при подозрении на отрав
ление производными пиразолона-5.
3.Заполнить таблицу:
МКС-реакции | производных | барбитуровой | кислоты | ||||
Производные | Реактивы | ||||||
барбитуровой | |||||||
кислоты | Фо | эма кристаллов | |||||
1. | 1 1 | ||||||
2. | |||||||
3. | |||||||
4. |
IX. План работы на занятиях
Работа на занятии 1 состоит из этапов:
• обсуждение вопросов токсичности и метаболизма производных барбитуровой кислоты;
• обсуждение методик предварительного и подтверждающего исследова-
ния на производные барбитуровой кислоты химическими методами;
• проведение цветных и МКС реакций на производные барбитуровой ки-
слоты. Работа на занятии 2 состоит из этапов:
• обсуждение методик и проведение определения количественного содержания производных барбитуровой кислоты в изоляте спектрофото-метрическим методом;
• тестовый контроль по вопросам предварительного исследования ве-
ществ кислого характера. Работа на занятии 3 состоит из этапов:
• рассмотрение вопросов токсичности и метаболизма производных пира-золона-5;
• практическая работа по обнаружению производных пиразолона-5;
« тестовый контроль по вопросам предварительного исследования веществ основного характера.
X. Лабораторная работа
Обнаружение производных барбитуровой кислоты Предварительные исследования
1. Реакция с нитратом кобальта.
Бумагу, импрегнированную раствором нитрата кобальта, смачивают исследуемым экстрактом, содержащим производное барбитуровой кислоты, подсушивают, держат над парами аммиака. Бумага окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
2. ТСХ-скрининг.
Система растворителей: хлороформ-ацетон (9:1). Способы детекции:
- 5% раствором сульфата ртути;
- раствором 0,01% дифенилкарбазона в хлороформе.
Подтверждающие исследования
1. Мурексидная проба.
В фарфоровую чашку к сухому остатку, полученному после выпаривания хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта при комнатной температуре, прибавляют 3 капли 3% раствора перекиси водорода и 3 капли реактива, содержащего соль Мора и хлорид аммония. Содержимое чашки выпаривают на электроплитке и сухой остаток нагревают до появления белых паров. После охлаждения прибавляют 3 капли б н. раствора гидроксида аммония. При наличии производных барбитуровой и тиобарбитуровой кислот появляется розовая окраска.
Следует обратить внимание, что кофеин даёт подобную реакцию. *
2. Реакция с концентрированной серной кислотой (МКС).
На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в капле концентрированной серной кислоты, помещенной на предметное стекло. Через 3-5 мин рядом помещают каплю дистиллированной воды и капилляром соединяют их. Через 10-20 мин под микроскопом наблюдают появление кристаллов кислотной формы.
(^ЗуРеакция с хлорцинкйодом (МКС).
На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 каплю раствора хлорцинкйода. Через 10-15 мин под микроскопом наблюдают форму образовавшихся кристаллов.
2?)Реакпия со смесью хлорида железа и йодида калия (МКС).
На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 каплю раствора железойоидного реактива (смесь хлорида железа и йодида калия). Через 10-15 мин под микроскопом наблюдают форму образовавшихся кристаллов.
5. Реакция с дииодокупратом калия в растворе йода (МКС).
На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 каплю дииодокупрата калия в растворе йода. Через 10-15 минут под микроскопом наблюдают форму образовавшихся кристаллов.
6. Поглощение в УФ-области.
Кюветы спектрофотометра заполняют раствором барбитурата (рН=Ю) и буферным раствором (рН=10), снимают спектр поглощения. Максимум поглощения наблюдают в интервале длин волн 235-245 им.
В кюветы спектрофотометра с раствором барбитурата (рН=10) и буферным раствором (рН=10) добавляют по 1-2 капли концентрированной соляной кислоты до рН=2, перемешивают стеклянной палочкой и снимают спектр поглощения, Наблюдают плавное снижение оптической плотности в интервале длин волн 220-260 нм.
В кюветы спектрофотометра с раствором барбитурата (рН=10) и буферным раствором (рН=10) добавляют по 1-2 капли концентрированного (4 н.) раствора натрия гидроксида до рН=13, перемешивают стеклянной палочкой и снимают спектр поглощения. Максимум поглощения наблюдают в интервале длин волн 255-265 нм.
Обнаружение производных пиразолона-5 Предварительные исследования
1. Реакция с хлоридом железа.
На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха, к сухому остатку прибавляют каплю 1% раствора хлорида железа. При наличии амидопирина появляется фиолетовая окраска, исчезающая от избытка реактива; антипирина -оранжево-красная; анальгина— синяя.
2. ТСХ-скрининг.
Система растворителей:
хлороформ-ацетон (9:1), при исследовании экстракта из кислой среды.
Способы детекции:
- 5% раствором хлорида железа,
- реактивом Драгендорфа.
Подтверждающие исследования
1. Реакция с нитратом серебра.
В пробирку или выпарительную чашку вносят 3-5 капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта, выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют каплю воды и 1-2 капли реактива и нагревают на водяной бане в течение 3-5 мин. Появляется фиолетовая (амидопирин) или сине-зелёная (анальгин) окраска раствора.
2. Реакция с нитритом натрия.
В пробирку или выпарительную чашку вносят 3-5 капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта, выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют каплю воды и каплю 10% раствора нитрита натрия. Появляется фиолетовое окрашивание, быстро исчезающее при добавлении избытка реактива (амидопирин) или устойчивая зелёная окраска (антипирин). Анальгин с 1% раствором нитрита натрия даёт синее окрашивание.
3. Реакция с серной и фуксинсернистой кислотами.
В пробирку или выпарительную чашку вносят 3-5 капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта, выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют по капле воды, концентрированной серной и хромотропо-вой кислот. При наличии амидопирина наблюдается красное окрашивание, анальгина - красно-фиолетовое.
4. Лигниновая проба.
Хлороформный раствор исследуемого вещества или экстракт наносят на газетную бумагу в присутствии соляной кислоты. Наблюдают жёлто-оранжевое окрашивание при наличии анальгина.