Работа студента на практическом занятии

1. Учет посевов предыдущего занятия (см. занятие 14).

2. Изучите феномен бактериофагии в жидкой питательной среде и на плотной питательной среде. Отметьте проявления этого феномена и объясните, чем они обусловлены.

3. Изучите результат опыта, фаготипирования стафилококков. Сделайте вывод - к какому фаготипу относится данная культура стафилококка?

4. Изучите препараты бактериофагов - лечебно-профилактические и диагностические.

5. Опыт по выявлению спонтанных мутаций у бактерий.

Цель опыта: определить, имеются ли мутанты, устойчивые к стрептомицину, в культуре бактерий, которая не соприкасалась со стрептомицином.

Методика: на чашке с МПА производится рассев культуры бактерий с целью получения изолированных колоний. После суточного инкубирования в термостате выросшие колонии с помощью игольчатого штампа-репликатора переносятся на чашку с МПА, содержащим стрептомицин, и контрольную чашку. После суточного инкубирования в термостате учитывают результат.

Результат: зарисовать чашки с колониями.

Вывод: сформулировать.

6. Опыт бактериоциногении.

Цель: определить, какие из испытуемых культур кишечной палочки способны продуцировать колицины.

Методика: испытуемые культуры засеяны бляшками на чашке с МПА. После двухсуточной инкубации в термостате выросшие культуры убиты парами хлороформа. На поверхность посева наливается растопленный МПА, содержащий колицинчувствительную культуру. После инкубации в термостате учитывается результат по зонам отсутствия роста вокруг колоний колициногенных культур.

Результат: зарисовать.

Вывод: сформулировать (указать колициногенные культуры).

7. Диссоциация бактерий. Посмотреть с помощью бинокулярной лупы колонии эпидермального стафилококка: гладкие (S) и шероховатые (R).

ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВАЖНЕЙШИХ
ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И
КЛИНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

Методические указания к самостоятельной работе студента
при подготовке к практическим занятиям по частной микробиологии

Те разделы микробиологии, которые вы уже изучили (общая микробиология, учение об инфекции и иммунитете), являются необходимым этапом для формирования врачебного мышления при освоении курса частной (клинической) микробиологии, к которому вы приступаете. На практических занятиях по общей микробиологии и иммунологии вы овладели основными микроскопическими, микробиологическими и иммунологическими методами исследования. Полученные вами теоретические знания и практические навыки создали необходимую базу для успешной работы на практических занятиях по частной микробиологии, где вам предстоит, используя полученные знания и умения, самостоятельно ставить микробиологический диагноз инфекционных заболеваний, то есть выполнять врачебную функцию.

В процессе изучения этого итогового раздела медицинской микробиологии вам необходимо будет усвоить лабораторную диагностику бактериальных, вирусных и грибковых инфекций. Особенностью лабораторной микробиологической и иммунологической диагностики инфекционных заболеваний является то, что по результатам лабораторных исследований не устанавливается конкретная нозологическая форма, то есть название заболевания (это функция лечащего врача), а определяется этиологическая и патогенетическая роль выделенных из организма больных микробов. Лабораторными методами определяют также иммунологические сдвиги и аллергическое состояние организма, что даёт возможность выбора для врача в конкретной клинической обстановке эффективных иммунологических препаратов. Кроме того, изучение свойств выделенного возбудителя, в частности чувствительности его к химиотерапевтическим препаратам, даёт ориентировку лечащему врачу в выборе эффективных антимикробных препаратов для успешного лечения больного.

Таким образом, частная медицинская микробиология имеет прямое отношение к клинике и поэтому данный раздел называют еще клинической микробиологией.

Основной целью клинической микробиологии является определение этиологической роли микроба - возбудителя инфекционного заболевания и (или) иммунологических сдвигов в организме больного. Следовательно, основными задачами клинической микробиологии будут:

1) установить этиологическую и патогенетическую роль выделенных возбудителей;

2) определить характер и уровень иммунологических и аллергических сдвигов в организме больного;

3) обеспечить возможность выбора эффективных химиотерапевтических и иммунологических препаратов для лечения больного.

Решение этих задач обеспечивает возможность:

а) для врача-стоматолога: постановку окончательного диагноза инфекционного заболевания и назначение наиболее эффективной, рациональной антимикробной терапии и иммунотерапии;

б) для врача-эпидемиолога: проведение эпидемиологического анализа с целью установления источника, путей передачи инфекции, выявления бактерионосителей, для предупреждения распространения инфекции, а также принятия решения о проведении специфической профилактики в определённых коллективах людей.

Успешная лабораторная диагностика инфекционных заболеваний возможна только при тесном взаимодействии и взаимопонимании лечащего врача и врача–микробиолога. Особенно большое значение имеет правильный выбор материала для исследования и условий транспортировки его в лабораторию, обеспечивающих сохранность живого возбудителя. Выбор материала определяется предварительным клиническим диагнозом заболевания и его стадией, а условия транспортировки – особенностями свойств возбудителя.

При взятии материала для лабораторного исследования от больных или бактерионосителей необходимо соблюдать определенные правила:

1) материал следует брать до применения антибиотиков или других химиотерапевтических препаратов;

2) забор материала производить с учётом стадии заболевания, патогенеза инфекционного процесса и наиболее вероятной локализации возбудителя;

3) материал нужно брать в достаточном количестве, соблюдая правила асептики, чтобы предупредить возможность загрязнения его микроорганизмами окружающей среды и нормальной микрофлоры организма человека;

4) исследуемый материал нужно доставить в лабораторию в возможно короткие сроки в стерильной посуде или в специальных контейнерах при соблюдении первоначальной температуры или в замороженном виде (в зависимости от свойств предполагаемого возбудителя);

5) любой материал, направляемый в лабораторию, должен сопровождаться направлением, в котором лечащий врач указывает фамилию, имя, отчество больного, вид материала, дату его взятия, предварительный клинический диагноз.

На практических занятиях по частной (клинической) микробиологии вы должны будете освоить основные функции врача-микробиолога и иммунолога, то есть самостоятельно провести все необходимые исследования для того, чтобы в зависимости от предварительного клинического диагноза, поступившего материала и запроса лечащего врача установить вид возбудителя или наличие в организме специфических антигенов, антител, наличие аллергической перестройки, определить иммунный статус больного и т.д.

Для выполнения этой работы вы будете пользоваться микробиологическими и иммунологическими методами исследования, усвоенными на предыдущих занятиях. Сюда относятся методы:

1) микроскопические (бактериоскопические, вирусоскопические);

2) микробиологические (бактериологические, микологические, вирусологические);

3) биологические или биопробы;

4) иммунологические (серологические, кожно-аллергические пробы, тесты для оценки иммунного статуса организма).

При подготовке к практическому занятию по частной микробиологии прежде всего необходимо изучить и запомнить характеристики возбудителей заболеваний. Студенты часто жалуются на то, что запомнить характеристики возбудителей трудно и на экзаменах они «путаются». Для того чтобы этого не произошло, рекомендуем вам усвоить общую схему (алгоритм) характеристики возбудителя. Сначала необходимо запомнить и потренироваться в правильном написании названия возбудителя по–латыни. Затем нужно дать характеристику его свойств по следующей схеме:

1) морфология: форма, взаимное расположение клеток в мазке, наличие спор, жгутиков, капсул, включений и других морфологических особенностей;

2) тинкториальные свойства, т.е. способность окрашиваться анилиновыми красителями, отношение к окраске по Граму, специальные способы окраски;

3) культуральные свойства: требовательность к питательным средам, наиболее употребительные питательные среды, температура выращивания, способ биологического окисления, характер роста на плотных и жидких питательных средах, внешний вид колоний и др.;

4) устойчивость во внешней среде: отношение к температуре, высушиванию, длительность сохранения в воде, почве, воздухе, другие особенности;

5) ферментативные свойства: способность расщеплять углеводы, белки, наличие биоваров;

6) антигенные свойства: соматические (О-антигены), жгутиковые (Н), поверхностные антигены и их характеристика, деление на серовары;

7) свойства патогенности: ферменты патогенности, капсула, адгезины, экзо- и эндотоксины и др.

В дальнейшем при изучении отдельных групп возбудителей, нужно найти и выделить общие свойства для каждой группы, с тем чтобы при характеристике отдельных возбудителей добавить в эту общую схему особенности данного возбудителя. Например: все энтеробактерии, возбудители кишечных инфекций, являются палочками средних размеров, в мазке располагаются беспорядочно, перитрихи (за исключением шигелл), грамотрицательны, но отличаются по ферментативным и антигенным свойствам. Все возбудители клостридиальных анаэробных инфекций – крупные грамположительные палочки, спорообразующие, перитрихи (за исключением Clostridium perfringens), не образуют капсул (за исключением Clostridium perfringens), анаэробы. Они отличаются по расположению спор, морфологии глубинных колоний и, что наиболее важно, по антигенной структуре токсинов и их действию на организм. Составление таких схем, где обобщаются свойства целых групп возбудителей, облегчает усвоение их свойств и ускоряет процесс самоподготовки. Если вы усвоите эту общую схему, вам останется только прибавить к ней особенности, касающиеся возбудителей конкретных заболеваний. Следует отметить, что изложенные здесь рекомендации можно использовать при характеристике возбудителей бактериальных инфекций. Остальные группы микроорганизмов (грибы, риккетсии, вирусы, простейшие) имеют свои особенности, которые будут изложены в соответствующих разделах. Изучив характеристику возбудителя, приступайте к составлению схемы исследования с учётом всех необходимых направлений и методов исследования для постановки микробиологического диагноза. На практическом занятии вы получите материал от больного и направление из лечебного учреждения, где сообщаются сведения о больном и предполагаемый диагноз. Учитывая полученный материал и сведения из направления, составьте схему исследования этого конкретного материала и приступайте к её осуществлению. Данные из направления и характеристику материала перепишите в «Журнал микробиологических исследований», схема которого приведена ниже. Сюда же вы будете вносить все полученные по ходу исследования результаты по дням, так как в большинстве случаев исследование материала будет продолжаться в течение нескольких занятий. После завершения исследования обобщите и проанализируйте все полученные данные и в соответствующей графе сформулируйте окончательный результат. Если вы проводите исследование по сокращённой схеме – внесите дополнения в графу «Примечания». При необходимости попросите консультацию преподавателя.

Кроме характеристики возбудителя, схемы микробиологических исследований материалов от больных на практических занятиях будут обсуждаться вопросы эпидемиологии, лечения и специфической профилактики всех изучаемых инфекционных заболеваний. Это вам необходимо иметь в виду при самостоятельной подготовке к практическому занятию, а на самом занятии пересмотреть и охарактеризовать препараты для диагностики, лечения и профилактики обсуждаемых инфекционных заболеваний (химиотерапевтические препараты, антибиотики, диагностические сыворотки, вакцины, аллергены, лечебные и профилактические сыворотки и др.).

Вы овладеете так необходимым для врача материалом по частной микробиологии, если будете выполнять практическую работу сознательно, то есть предварительно подготовившись дома по всем имеющимся источникам (лекции, учебники и т.д.), не надеясь выучить всё в последний день перед итоговым занятием или экзаменом. Настоящие, прочные знания можно получить только при последовательном систематическом изучении материала, когда теоретическая подготовка подкрепляется практической работой на занятиях.

Занятие 16