Возбудители бруцеллеза
Морфологические и кулътуральные свойства бруцелл. Источники бруцеллеза в природе. Патогенность различных видов бруцелл и их эпидемиологическое значение.
Классификация бруцелл. Виды и биотипы. Дифференциация видов бруцелл: режим роста, выделение сероводорода, редуцирующая способность бруцелл в отношении анилиновых красителей (основной фуксин, тионин, сафранин), уреазная активность бруцелл, чувствительность их к тбилисскому фагу, способность агглютинироваться гомологичными сыворотками, метаболические тесты.
Особенности антигенного строения бруцелл.
Резистентность бруцелл во внешней среде и в продуктах.
Значение различных способов заражения при бруцеллезе. Роль профессионального фактора. Особенности патогенеза бруцеллеза (механизмы внедрения возбудителя в организм, локализация возбудителя в организме больного, значение незавершенного фагоцитоза для течения заболевания, аллергизация больного).
Иммунитет при бруцеллезе, его формирование, специфичность, природа.
Методы микробиологической диагностики бруцеллеза (бактериологический, серологический, аллергический, биологический). Их значение. Зависимость между сроком болезни, температурной реакцией больного и высеваемостью возбудителя из крови.
Применение серологических реакций для обнаружения антител к возбудителю (реакции Райта, Кумбса, Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза, РПГА, ИФМ, РСК, ОФР).
Использование серологических реакций для обнаружения антигена возбудителя (реакции агрегат-гемагглютинации, коагглютинации, РПГА, ИФМ). Реакция Бюрне, ее сущность и значение.
Проблема ликвидации заболеваемости людей бруцеллезом. Основные мероприятия в очагах овечьего бруцеллеза (среди животных и среди людей). Специфическая профилактика бруцеллеза. Сроки вакцинации и ревакцинации. Контингенты людей, подлежащих вакцинации, отбор с помощью аллергической пробы Бюрне.
Лекция 5.
Тема: СЕМЕЙСТВО КИШЕЧНЫХ БАКТЕРИЙ.
КИШЕЧНАЯ ПАЛОЧКА.
Общая характеристика семейства кишечных бактерий. Признаки, по которым бактерии объединяются в это семейство: место обитания (кишечный и дыхательный тракт), единство морфологии (грамотрицательные короткие палочки с закругленными концами, не образуют спор, перитрихи или неподвижные, не образуют или образуют капсулы), ферментация глюкозы и других углеводов с образованием кислоты и газа или только кислоты, отсутствие протеолитических свойств, факультативные анаэробы или аэробы, хорошо растут на обычных средах, отсутствие оксидазы, восстанавливают нитраты в нитриты, каталазопозитивны, хемоорганотрофы, сумма Г + Ц = 39-59 молей %, заражение в основном фекально-оральным путем (в некоторых случаях - воздушно-капельным).
Нормальная микрофлора толстого кишечника, ее формирование, состав и значение (см. лекцию "Учение об инфекции").
Классификация семейства кишечных бактерий - 26 родов, более 100 видов (1988г.)
Принципы деления бактерий на роды и виды. Основные биохимические тесты, используемые для деления на роды, виды, группы.
Использование дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина, Плоскирева, сред "пестрого ряда") для диагностических целей.
Принципы серологической классификации бактерий внутри отдельных родов (шигеллы, сальмонеллы и др.).
Род эшерихий (6 видов – основной - Escherichia coli). Ключевые признаки: подвижны или неподвижы, ферментируют лактозу с образованием кислоты и газа (некоторые варианты лактозонегативны), отрицательные цитратная проба и проба Фогес-Плоскауэра, положительная проба с метиловым красным, нет уреазы, фенилаланиндезаминазы, образуют индол, нет оксидазы, не растут на среде с KCN, содержание Г + Ц = 50-51 молей %.
Значение кишечной палочки - является обязательным компонентом нормальной микрофлоры толстого кишечника; используется в качестве показателя степени фекального загрязнения, особенно питьевой воды (определение коли-титра и коли-индекса); играет важную роль в патологии человека.
Кишечная палочка - одна из наиболее частых (после кокков) возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний и септицемии.
Диареегенные кишечные палочки - возбудители кишечных эшерихиозов. Особенности антигенного строения кишечной палочки: О-, Н-, К-антигены, факторные антигены.
Принципы серологической классификации: деление на серогруппы по О-антигену (01 - 0171) и серовары по Н-антигену (H1 - Н57), значение факторных антигенов. Принадлежность диареегенных кишечных палочек к определенным серогруппам и сероварам.
Основные факторы патогенности кишечной палочки. Эндотоксин (ЛПС) определяет не только токсичность, но и специфичность О-антигенов. О- и К-антигены угнетают фагоцитоз.
Факторы, определяющие адгезию и колонизацию, факторы инвазии. Способность диареегенных кишечных палочек вырабатывать два типа экзотоксинов: цитотонины и цитотоксины. Особенность генетического контроля синтеза факторов патогенности (роль хромосомных и плазмидных генов, а также генов умеренных конвертирующих фагов).
Факторы адгезии и колонизации у кишечных палочек, их типы: CFA/I-CFA/IV и др. фимбриальной структуры; EAF – обеспечивают адгезию к клеткам Нер - 2 (белки наружной мембраны); фактор адгезии к клеткам Henle-407. Синтез всех указанных факторов адгезии и колонизации контролируется плазмидами. Факторы инвазии - плазмида 140 МД (контролирует синтез белков наружной мембраны) и др.
Экзотоксины:
А. Цитотонины:
термолабильные (LT) - два типа,
термостабильные (ST) - два типа, их структура (фрагменты А и В, их роль), механизм действия (активация аденилатциклазы, накопление цАМФ и цГМФ). Патогенез брюшного тифа. Цикличность в развитии брюшнотифозного процесса. Иммунитет после перенесенного брюшного тифа, его природа.
Методы микробиологической диагностики брюшного тифа. Бактериологический диагноз брюшного тифа. Выделение гемокулътуры и ее идентификация. Миело- и розеолокультуры. Выделение возбудителя брюшного тифа из испражнений больного и бактерионосителя, идентификация выделенной культуры.
Использование иммунофлуоресцентного метода для ускоренного обнаружения возбудителя брюшного тифа и паратифов. Прямой и непрямой методы иммунофлуоресцентного исследования.
В связи с тем, что при брюшном тифе наблюдается персистирование антигенов возбудителя в составе циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови (ЦИК), для их обнаружения может быть использована реакция коагглютинации. Обнаружение ЦИК с помощью этой реакции имеет значение для подтверждения диагноза заболевания уже в ранние сроки его.
Динамика образования антител при брюшном тифе. Значение О- и Н-антител для серологического диагноза брюшного тифа. Реакция Видаля. Необходимость использования О-, Н-диагностикумов в этой реакции.
Использование для серологической диагностики брюшного тифа и паратифов реакции пассивной гемагглютинации с применением Ви-эритроцитарного диагностикума как более специфической по сравнению с реакцией Видаля.
Перспективы применения иммуноферментного метода для серологической диагностики брюшного тифа.
Факторы, способствующие формированию брюшнотифозного бактерионосительства. Бактериологическая диагностика брюшнотифозного бактерионосительства. Материал для бактериологического исследования. Значение реакции Ви-гемагглютинации и пробы с Ви-тифином для диагностики брюшнотифозного бактерионосительства. Определение ВИ-, О-, Н -антител одновременно.
Специфическая профилактика брюшного тифа и паратифов.
Лекция 7.
Тема: ВОЗБУДИТЕЛИ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ. САЛЬМОНЕЛЛЕЗЫ.
Возбудители пищевых токсикоинфекций относятся к следующим семействам бактерий: Enterobacteriaceae, Vibrionaceae, Pseudomonadaceae, Bacillaceae. Возбудителями интоксикаций являются Staphylococcus aureus и Fusarium sporotrichiella. Наиболее частыми возбудителями пищевых токсикоинфекций являются сальмонеллы. Рост заболеваемости сальмонеллезом за последние десятилетия во всем мире. Общая характеристика сальмонелл: грамотрицательные, как правило, подвижные, не образующие спор и капсул бактерии, ферментирующие глюкозу с образованием кислоты и газа, или только кислоты; как правило, не ферментирующие лактозы (кроме S.arizonae и S.diarizonae) и салицина (кроме S.houtenae), не образуют индола, не имеют уpeaзы, дают отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра, но положительную с метиловым красным, растут на цитратной среде, образуют Н²S (кроме s.paratyphi А и некоторых других), не имеют фенилаланиндезаминазы, не растут на среде с KCN (кроме S.houtenae). Почти все чувствительны к сальмонеллезному фагу 0-1. Сумма Г+Ц=50-53 мол. %.
Таксономическая классификация сальмонелл. Род сальмонелл представлен одним видом S.choleraesuis c 6 подвидами (S.choleraesuis, S.salamae, S.arizonae, S.diarizonae, S.houtenae, S.bonhori), различающимися по ряду биохимических тестов.
Принципы серологической классификации:
- по O-антигену все сальмонеллы подразделяются на 50 групп (А-Z, 51-65).
- по Н-антигенам (I иII фазы) делятся более чем на 2000 сероваров.
Принципы определения серогруппы (О-сыворотки) и сероваров (по Н-антигенам). Фаготипы (125) и биовары (20) сальмонеллы тифимуриум.
Заболевания, вызываемые сальмонеллами: брюшной тиф и сальмонеллезы. Резервуары сальмонелл в природе. Первичные и вторичные салъмонеллезы животных, их особенности. Значение животных и продуктов животного происхождения как источников заражения для человека. Роль домашней птицы, яиц, яичных продуктов и синантропных грызунов как источников заражения для человека.
Человек как источник заражения сальмонеллами.
Особенность современных сальмонеллезов - активизация пищевого пути передачи возбудителей с преобладанием роли птицы и птицепродуктов, увеличение числа групповых заболеваний, рост заболеваемости среди детей старшего возраста и взрослых, увеличение числа сероваров, вызывающих заболевание (в нашей стране более 240 сероваров).
Особенности пищевых токсикоинфекций: короткий инкубационный период, групповой характер заболевания, острое непродолжительное течение.
Основная причина - массивность обсеменения пищевого продукта возбудителями.
Гипотезы:
1) в пище накапливается в большом количестве возбудитель и его токсины;
2) действие токсаминов, накапливающихся в пищевом продукте в результате жизнедеятельности бактерий;
3) сочетание действия токсинов, токсаминов и накопление в большом количестве возбудителя (распад бактерий, всасывание эндотоксина и интоксикация).
Особенности патогенеза сальмонеллезов обусловлены наличием у сальмонелл различных факторов патогенности, к числу которых относятся эндотоксины, факторы адгезии, инвазии, энтеротоксины (типа st ), факторы проницаемости, способность некоторых сальмонелл продуцировать SLТ (шигаподобные токсины). Наличие у сальмонелл плазмид вирулентности и лекарственной устойчивости. Особенность патогенеза сальмонеллезов. Сальмонеллы после прикрепления к гликокаликсу внедряются между ворсинками и прикрепляются к плазмолемме энтероцитов и,размножаясь на них, вызывают повреждение энтероцитов и умеренное воспаление слизистой. Они не размножаются в энтероцитах; а транспортируются в подлежащие ткани слизистой оболочки, в лимфу и в кровь.
Причины роста заболеваемости сальмонеллезом, появление эпидемических клонов сальмонелл, инфицирование сальмонеллами кормов для животных и птиц (последнее, возможно, одна из главных причин).
Особенности патогенеза стафилококковых интоксикаций. Бактериологическая диагностика пищевых токсикоинфекций. Материалы для бактериологического исследования при пищевых отравлениях. Обогатительные среды для сальмонелл. Серологическая идентификация сальмонелл. Определение серологических групп и серотипов сальмонелл. Наборы диагностических агглютинирующих сывороток для сальмонелл. Использование О-сальмонеллезного фага для идентификации сальмонелл. Фаготипирование сальмонелл тифимуриум и паратифа В.
Применение реакции иммунофлуоресценции как экспресс-метода для обнаружения сальмонелл (прямой и непрямой методы с соответствующими сыворотками), использование РПГА с О-эритроцитарным диагностикумом для определения антител и реакции Кумбса для обнаружения неполных .антител.
Особенности бактериологической диагностики пищевых токсикоинфекций, вызванных условно-патогенными бактериями кишечной группы.
Особенности диагностики стафилококковых интоксикаций. Биологическая проба на кошках для обнаружения стафилококкового энтеротоксина. Значение серологического метода в диагностике пищевых токсикоинфекций. Основные меры предупреждения пищевых токсикоинфекций и интоксикаций.
Лекция 8.
Тема: МИКРОБИОЛОГИЯ ДИЗЕНТЕРИИ.
Определение болезни. История открытия возбудителей. Открытие Лешем амебы. Амебиаз и бактериальная дизентерия. Открытие ее возбудителей (Шантмесс и Видаль, Григорьев и Шига, Флекснер, Зонне, Штуцер и Шмитц, Бойд, Лардж, Сакс).
Характеристика рода шигелл. Неподвижные грамотрицательные палочки, не образуют спор и капсул; хорошо растут на обычных питательных средах, не растут на среде с цитратом или малонатом в качестве единственного источника углерода; не образуют H²S, не имеют уреазы; реакция Фогес-Проскауэра отрицательна, с метиловым красным - положительна; глюкозу и другие углеводы ферментируют с образованием кислоты без газа (кроме некоторых представителей вида Флекснера); как правило, не ферментируют лактозу (кроме вида Зонне), адонит, инозит и салицин.
Принципы классификации бактерий рода Shigella. Использование биохимических признаков - отношение к манниту и лактозе, и особенностей антигенного строения.
Современная классификация шигелл - 4 вида (подгруппы): Shigella dysenteriae (подгруппа А), не ферментируют маннит, 12 сероваров; S.flexneri (подгруппа В), ферментируют маннит, особенности антигенного строения (наличие типовых и групповых антигенов, деление на серовары и подсеровары, антигенная формула), s.boydii (подгруппа С), ферментируют маннит, 18 сероваров; s.sonnei (подгруппа Д), медленно ферментируют лактозу, наличие колоний двух фаз (I фаза и II фаза). Зависимость типа колоний и вирулентности от наличия плазмиды 120МД. Колонии I фазы (мелкие круглые) имеют плазмиду, вирулентны. Колонии II фазы (крупные плоские) не имеют плазмиды, не вирулентны.
Биохимические варианты шигелл Зонне в зависимости от отношения к мальтозе, рамнозе и ксилозе -14 биоваров. Фаготипирование шигелл Зонне. Значение определения биоваров и фаговаров для эпидемиологии.
Особенности эпидемиологии дизентерии.
Изменение видового состава, биоваров и сероваров шигелл и причины этого явления.
Исчезновение с исторической арены S.dysenteriae I (палочки Шига) в 40-х годах и возвращение ее в 60-80-х годах, образование трех гиперэндемических районов (Центральная Америка; Африка; Индия, Пакистан, Бангладеш). Возможная причина - наличие плазмид, определяющих лекарственную устойчивость и вирулентность s.dysenteriae I.
Источник инфекции - только человек.
Способ заражения - фекально-оральный. Пути передачи - водный (преобладающий для вида Флекснера), пищевой (преобладающий для вида Зонне), особенно важная роль молока и молочных продуктов; контактно-бытовой (особенно для подгруппы А).
Факторы патогенности шигелл: ЛПС (эндотоксин); наличие в клеточной стенке антигенов, угнетающих фагоцитоз (антигены 3,4); синтез факторов иммуносупрессивности (подавляют вторичный иммунный ответ) ;наличие факторов адгезии и колонизации. Важнейшее биологическое свойство шигелл - способность их проникать в энтероциты, размножаться в них и вызывать их гибель (наличие факторов инвазии). Для обнаружения этого важнейшего свойства используют керато-конъюнктивальную пробу на морских свинках (гнойный керато-конъюнктивит); заражение куриных эмбрионов (их гибель); интраназальное заражение белых мышей (пневмония); заражение культур клеток (цитотоксическое действие).
Генетический контроль адгезии, инвазии и цитотокситеского действия (наличие в хромосоме генов, контролирующих синтез антигенов 3,4 (около локуса his), обеспечивающих устойчивость к макрофагам; гена КорА (около локуса lac), ответственного за развитие керато-конъюнктивита; гена cytt , ответственного за гибель энтероцитов и макрофагов.
Наличие у шигелл плазмид вирулентности: у шигелл Зонне 120 МД, у шигелл Флекснера и Бойда 140 МД (родственна плазмиде энтероинвазивных кишечных палочек), контролирующих синтез белков наружной мембраны, опосредующих инвазивные свойства. Наличие плазмид у шигелл Флекснера и Зонне, контролирующих синтез энтеротоксинов типа LT.
Способность S.dysenteriae I (палочка Шига) синтезировать и секретировать цитотоксины (SLT-I и SLT-II), вызывающие сильный цитотоксический эффект.
Способность синтезировать цитотоксины обусловлена умеренными конвертирующими tox-фагами.
Особенности патогенеза дизентерии: адгезия, колонизация, внедрение в энтероциты, размножение и цитотоксическое действие осуществляются циклами. Интенсивность циклов прямо пропорциональна концентрации возбудителя в пристеночном слое слизистой оболочки. Все это приводит к разрушению эпителиальных клеток, воспалению, образованию язвы. Соединяясь, язвы увеличивают обнажение кишечной стенки, вследствие чего в стуле появляется слизь, кровь, полиморфноядерные лейкоциты.
Особенности иммунитета при дизентерии - типоспецифический, значение макрофагов, Т-лимфоцитов (гиперчувствительность замедленного типа), антител. Значение местного иммунитета, опосредуемого антителами IgAs.
Методы микробиологической диагностики дизентерии.
Основной метод - бактериологический. Схема выделения возбудителя: посев испражнений на дифференциально-диагностические среды (среду обогащения), выделение изолированных колоний, пересев для получения чистой культуры, изучение биохимических свойств и с учетом их идентификация с помощью вначале основной поливалентной сыворотки, содержащей антитела к шигеллам Флекснера (1-6 групп) и шигеллам Зонне, затем поливалентными Флекснера и Зонне, затем определяют серовар и подсеровар Флекснера или фазы Зонне.
В случае если выделенные бактерии не агглютинируются основной поливалентной сывороткой, применяют поливалентные и сероваро-специфические сыворотки других видов. Для обнаружения антигенов в крови, моче и испражнениях могут быть использованы следующие методы: РПГА, РСК, реакция коагглютинации (в моче и испражнениях), ИФМ, РАГА (в. сыворотке крови). Эти методы высокочувствительны, специфичны и пригодны для раннего распознавания болезни. Диагностическое значение имеет также аллергическая проба Цуверкалова с дизентерином.
Для быстрой идентификации шигелл рекомендуется следующий метод: подозрительную колонию (лактозонегативная на среде Эндо) пересевают на среду с трехсахарным агаром и железом: агар с глюкозой, сахарозой и лактозой + сернокислое железо (для выявления Н2S) и среду Христенсена, содержащую мочевину, или на среду Олькеницкого (глюкоза, лактоза, сахароза, мочевина + железо).
Любой микроорганизм, который продуцирует уреазу через 4-6 часов инкубирования, вероятнее всего относится к роду Proteus и может быть исключен.
Любой микроорганизм, который продуцирует после инкубации в течение ночи Н2S, или имеет уреазу, или образует кислоту на косячке о трисахарным агаром (ферментирует лактозу или сахарозу), может быть исключен, хотя штаммы, продуцирующие H2S, должны быть исследованы как возможные представители рода Salmonella. Во всех других случаях выросшая на этой среде культура должна быть исследована, и, если имеется образование кислоты, указывающее на ферментацию глюкозы (изменение цвета столбика), выделена в чистом виде. Одновременно она может быть исследована в реакции агглютинации на стекле с соответствующими антисыворотками к роду Shigella. В связи с наличием групповых антигенов у представителей семейства Enterobacteriaceae (положительная реакция агглютинации) для подтверждения принадлежности к роду шигелл используют другие биохимические тесты (цитратная среда, глюкоза, лактоза, маннит, оксидаза, глюконат, а также подвижность).
Проблема специфической профилактики дизентерии.
Лекция 9.
Тема: МИКРОБИОЛОГИЯ ХОЛЕРЫ.
Определение болезни. Особенности ее, которые делают холеру особо опасной болезнью. Эпидемиологические особенности холеры, основные периоды в истории холерных эпидемий. Основной эпидемический очаг холеры на Земле и причины его существования в течение длительного времени.
Холерные пандемии, пути распространения холеры из Индии во время пандемий. Седьмая пандемия холеры, ее особенности.
Возбудитель холеры, история его открытия. Определение рода V.cholerae, ключевые признаки этого рода вибрионов: грамотрицательные, прямые или слегка изогнутые палочки, подвижные (монотрихи), спор и капсул не образуют, факультативные анаэробы, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты (нитрозо-индоловая реакция), оксидазоположительные, ферментируют глюкозу по пути Эмбден-Мейергофа, разжижают желатину, уреазы и H2S не образуют, имеют лизин- и орнитин-декарбоксилазы, не имеют аргининдигидролазы, содержание Г+Ц=40-50 мол. Определение болезни. Особенности ее, которые делают холеру осо-бо опасной болезнью. Эпидемиологические особенности холеры, основные периоды в истории холерных эпидемий. Основной эпидемический очаг холеры на Земле и причины его существования в течение длительного времени.
Холерные пандемии, пути расдространения холеры из Индии во время пандемий. Седьмая пандемия холеры, ее особенности.
Возбудитель холеры, история его открытия. Определение рода v.choierae , ключевые признаки этого рода вибрионов: грамотрица-тельЕые, прямые или слегка изогнутые палочки, подвижные (монотрихи), спор и капсул не образуют, факультативные анаэробы, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты (нитрозо-индоловая реакция), океи-дазоположительные, ферментируют глюкозу по пути Эмбден-Мейергофа, разжижают желатину, уреазы и ЧгЗ не образуют, имеют лизин- и орнитин-декарбоксилазы, не имеют аргининдигидролазы, содержание Г+Ц=40-50 мол. % (У холерного вибриона 47 мол.%).
Признаки, по которым вибрионы отличаются от семейства кишечных бактерий (оксидазоотрицательные) и псевдомонад (окисляют глюкозу); признаки, отличающие вибрионы от рода Aeromonas (имеют аргининдигидролазу) и Рlesiomonas (имеют лизин-, орнитин-декарбоксилазы и аргининдигидролазу).
Морфологические, культуральные и биохимические свойства возбудителя холеры.
Отношение холерного вибриона к сахарозе, маннозе, арабинозе. Классификация вибрионов по Хейбергу. Вибрион Эль-Тор, дискуссия о его природе. Современная оценка вибриона Эль-Тор - истинный возбудитель холеры по всем своим свойствам, включая антигенное строение, подобен холерному вибриону (имеющиеся различия не влияют на его природу). Состав вида v.cholerae: холерный и холероподобные вибрионы. Распространение холероподобных вибрионов в природе. Основные различия между холерным и холероподобными (НАГ) вибрионами. Особенности антигенного строения холерного вибриона (01-серогруппа; серотипы Огава, Инаба и Гикошима); холероподобные вибрионы - вибрионы, не относящиеся к 01-серогруппе, их серовары, эпидемиологическое значение. Галофильные вибрионы, их характеристика.
Роль парагемолитических вибрионов в этиологии кишечных заболеваний человека, отличие их от других галофильных вибрионов.
Резистентность холерных вибрионов во внешней среде, чувствительность их к дезинфицирующим веществам и к хлору.
Питательные среды, применяемые для выращивания холерных вибрионов: 1% ПВ, щелочной МПА. Особенность роста на них холерного вибриона. Среда ТЦБС, ее состав и преимущества. Источники холеры в природе. Пути и способы заражения холерой. Водный путь распространения играл и играет решающую роль в эпидемиологии холеры. Основные факторы патогенности холерного вибриона: хемотаксис, подвижность, ферменты патогенности (муциназа, нейраминидаза, лецитиназа, протеаза), их значение, факторы адгезии, эндотоксин (ЛПС), экзотоксины (шигаподобные, термолабильные, отличающиеся от холерного), фактор проницаемости.
Главный фактор патогенности - холерный экзотоксин (холероген, обусловливающий патогенез болезни (понос, обезвоживание, потеря электролитов). Структура токсина. Белок с м.в. 84 кДа, молекула имеет форму кольца и состоит из двух фрагментов A (A1, A2) и В (5-6 одинаковых субъединиц) =А2В5.
Функции В-фрагмента: взаимодействие с рецептором (GmI) и образование внутримембранного канала для прохождения A1 в клетку, субъединица А2 соединяет A1 с В-фрагментом. A1 - собственно токсин. Он активирует аденилатциклазу, нарушая ее структуру (образующаяся при гидролизе NAD аденозиндифосфат-рибоза переносится на аденилатциклазу, последняя вызывает гидролиз АТФ, который приводит к накоплению цАМФ, вызывающего сильный цитотонический эффект: потеря жидкости, а с ней NaCl, NaHCO3, КСl - главная причина холерного алгида и смерти больного (потеря жидкости в количестве более 10% веса тела).
Особенность генетического контроля токсинообразования: оперон ctxB или vcTАВ, контролируемый двумя генами регуляторами (toxR - позитивный регулятор, мутации этого гена уменьшают продукцию токсина в 1000 раз; ген htx - негативный регулятор, мутации в этом гене повышают продукцию токсина в 3-7 раз). Во время эпидемий выделяются холерогенные, слабохолерогенные и нехолерогенные вибрионы. Косвенные и прямые доказательства холерогенности или ее отсутствия у холерного вибриона. Косвенные признаки отсутствия холерогенности у вибриона: наличие гемолитической активности, отсутствие больных холерой и отрицательные пробы с холерными диагностическими фагами (ХДФ-3, ХДФ-4, ХДФ-5).
Прямые доказательства холерогенности. Методы обнаружения холерогена:
1. стимуляция клеточной аденилатциклазы в культурах клеток;
2. биологические пробы;
3. реакция пассивного иммунного гемолиза (холероген взаимодействует с ганглиозидом эритроцитов, добавление антитоксинов и комплемента приводит к гемолизу);
4. иммуноферментный метод;
5. иммунофлуоресцентный метод;
6. использование метода ДНК-зонда для обнаружения гена токсичности.
Основные клинические формы холеры по классификации ВОЗ.
Принципы патогенетического лечения холеры - восстановление водно-солевого обмена и применение противомикробных препаратов. Оральные регидратационные солевые растворы (ОРС):
3,5 г NaCl
2,5 г NaHCO3
1,5 г KCl
20,0 г глюкозы на 1 л питьевой воды.
Своевременное применение ОРС позволяет свести летальность при холере до нуля. Иммунитет при холере, его особенность (значение антитоксинов и вибриоцидных антител).
Особенности микробиологической диагностики холеры. Основной метод - бактериологический. Схема бактериологического исследования. Методы дифференциации холерных вибрионов от грамотрицательных палочек, относящихся к семействам Enterobacteriaсeae, Pseudomonadaceae , а также от других родов семейства vibrionaceae и от холероподобных (НАГ) вибрионов. Использование специфических агглютинирующих сывороток и монофагов для типирования холерных вибрионов. Использование иммунофлуоресцентного метода для ускоренной диагностики холеры. Применение антительного эритроцитарного диагностикума для обнаружения холерного вибриона в выделениях больных. Серологические реакции (имеют второстепенное значение): реакции агглютинации, обнаружения вибриоцидных антител, иммунофлуоресценции и иммуноферментный метод обнаружения антитоксинов.
Специфическая профилактика холеры. Основные противоэпидемические мероприятия в очаге холеры.
Лекция 10.
Тема: ПАТОГЕННЫЕ АНАЭРОБЫ.