Методы микробиологической диагностики бешенства
А. Вирусоскопический
Материал:ткань аммонова рога, мозжечка, продолговатого мозга. Рис.7
Микроскопия мазков-отпечатков или мазков, приготовленных из эмульсии мозга и окрашенных по Манну (Туревичу), на наличие телец Негри (малинового цвета). При наличии флуоресцирующих антител применяют метод люминесцентной микроскопии.
Б. Биологический
Материал: мозговая ткань, слюна животных.
Внутримозговое заражение белых мышей. При наличии вируса бешенства мышь через 7-9 дней заболевают и гибнут. При микроскопии мазков из мозговой ткани обнаруживают внутриклеточные включения Негри.
Контрольные вопросы
Какие вирусы вызывают острые респираторные заболевания?
Какие вирусы относятся к группе ортомиксовирусов?
Дайте общую характеристику ортомиксовируоов?
Какую структуру имеет вирион гриппа?
Какие микробиологические методы применяются для диагностики вирусных респираторных инфекций?
В чем особенность серологических методов диагностики вирусных респираторных инфекций?
Как производится выделение вируса гриппа?
Как обнаруживается вирус гриппа в курином эмбрионе?
Как производится выделение и идентификация аденовирусов?
В чем сущность РТГА? Каковы особенности ее постановки и учета результатов при обнаружении противогриппозных антител?
В чем заключается сущность иммунофлуоресцентного метода диагностики гриппа?
Какова классификация пикорнавирусов?
Дайте общую характеристику группы энтеровирусов.
Какие микробиологические методы применяют для диагностики полиомиелита и других энтеровирусных заболеваний?
Каков патогенез полиомиелита?
Как выделяют вирус полиомиелита от больных?
Какие серологические методы диагностики могут быть использованы при полиомиелите?
Какие заболевания вызывают вирусы Коксаки и ЕСНО?
Какие способы применяются для обнаружения и выделения вирусов Коксаки?
Как обнаруживают и идентифицируют вирусы Коксаки А и В?
В чем сущность реакции преципитации в агаре?
С какой целью используется реакция препитации в агаре в вирусологии?
Как определяется гемагглютинирующий титр вируса гриппа?
Как определяется цитопатическое действие вируса полиомиелита?
Какие микробиологические методы применяются для диагностики бешенства?
Чем отличаются фиксированный и уличный вирусы бешенства?
Каковы основные свойства вируса клещевого энцефалита?
Какие микробиологические методы применяются для диагностики клещевого энцефалита?
Каковы пути заражения А-,В-,дельта-гепатитами?
Что такое вирусный В - гепатит? С- и Е-гепатиты?
Какие биохимические тесты применяются для диагностики вирусного гепатита?
Что такое интерферон?
Приложение к занятию 3
А. Возбудители острых респираторных заболеваний (ОРЗ).
Возбудителями ОРЗ (кроме бактерий) являются следующие вирусы:
РНК-содержащие
1.Ортомиксовирусы (вирусы гриппа А, В и С).
2.Парамиксовирусы парагриппозные вирусы, вирус эпидемического паротита, вирус ньюкаслской болезни, вирус кори, респираторно-синцитиальный вирус).
3.Пикорнавирусы (более 110 серотипов риновирусов, а также некоторые серотипы вирусов Коксаки (А и В) и ECHO).
4.Реовирусы (3-й серотип).
5.Коронавирусы.
ДНК-содержащие вирусы
6. Аденовирусы (41 серотип, из них 8 являются возбудителями ОРЗ).
По частоте - риновирусы - коронавирусы - респираторносинцитиальный вирус - парагриппозные вирусы - аденовирусы - вирусы гриппа. Однако основную роль играет вирус гриппа, вызывающий частые пандемии.
Вирусы гриппа обозначают по однородной кодированной системе. Указывают тип рибонуклеопротеида (род вируса) - А,В,С, географическое место выделения штамма; порадковый номер; год; в круглых скобка - подтип гемагглютинина (Н1-Н13) и нейрамидазы (N I - N 10). Например, А(Сингапур). 1,57 (Н2 N2), А (Гонконг), 1,68 (НЗ N 2).
Для диагностики ОРЗ применяются следующие методы:
1.Вирусологические - заражение культур клеток и эмбрионов.
2.Иммунофлуоресцентный (метод ускоренной диагностики).
3.Серологические реакции - РТГА, РСК, ИМФ.
4.Использование РНК- зонда,
Б. Возбудителями острых кишечных заболеваний (ОКЗ), кроме бактерий, являются следующие вирусы:
1.Полиовирусы (три серотипа).
2.Вирусы ECHO - 34 серотипа.
3.Вирусы Коксаки А - 23 серотипа
4.Вирусы Коксаки В - 6 серотипов.
5.Энтеровирусы - серотипы 68-71.
6.Вирус гепатита А ( 72-й серотип).
7.Ротавирусы - 4 ееротипа.
8.Калицивирусы - вирус Норвольк и др.
9.Астровирусы.
10.Корокавирусы - 3-й серотип.
11.Аденовирусы - некоторые серотипы.
Основные признаки энтеровирусов, по которым они объединяются в один род
1. Вирусологические:
а)размер - 22-30 нм;
б)геном - однонитчатая нефрагментированная позитивная
в)устойчивость к эфиру;
г) повышение терморезистентности в присутствии ионов Mg++ и Ca++
д) устойчивость к желчи, кислотам, щелочам (в диапазоне рН 3,0 - 10,0);
е)способность размножаться в определенных культурах клеток;
ж)число капсомеров (60);
э) устойчивость во внешней среде.
2. Эпидемиологические:
а)выраженная сезонность заболеваний (лето, осень);
б)фекально-оральный путь распространения;
в)выделение вируса из - кишечника, носоглотки, ликвора, крови,
г)обнаружение в сточных водах;
д) преимущественное поражение детей до 12 лет;
е)широкое носительетво среди здоровых людей,
Для диагностики ОКЗ вирусной этиологии могут быть использованы следующие методы:
1.Иммуноэлектронной микроскопии.
2.Иммунологические реакции: коагтлютинации, преципитации в геле (различные варианты), РСК, иммунофлуоресцентный метод, иммуноферментный метод, радиоиммунный метод.
3.Биологические методы.
4.Использование РНК-зондов.
Рис.8 В. Схема строения вирионов вируса группа А.
1-спираль РНП; 2-белок РВ1; РВ2 и РА; 3-гемагглютинин; 4-липидный слой; 5-нейраминидаза; 6-мембранный белок; 7,8-мономер и триммер гемагглютинина; 9,10-мономер и тетрамер нейраминидазы.
Г. Особенности генома вируса гриппа А
Геном вируса гриппа представлен однонитчато фрагментированной негативной РНК с м.м. 5 мегадальтон. Всего фрагментов 8, генов 10. Фрагменты 7 и 8 несут по две рамки считывания.
| Фрагмент | Белок | Молекулярная масса | Функция |
| P3(PB2) | 85 кДа | Эндонуклеаза | |
| P1(PB1) | 96 кДа | Транскриптаза | |
| P2(PA) | 87 кДа | Репликаза | |
| 4 (1768 н.о.)* | Гемагглютинин HA | Мономер 75 кДа HAI-50 кДа HA2-25 кДа | Взаимодействует с рецептором клетки |
| 5 (1517 н.о.) | Нуклеопротеид NP | 60 кДа | Структурная и регуляторная |
| 6 (1413 н.о.) | Нейраминидаза NA | Мономер 50-60 кДа Тетрамер 200-250 кДа | Обеспечивает диссеминацию вируса, отщепляя нейраминовую кислоту |
| 7 (1027 н.о.) | Матриксный белок: М1 М2 | 25 кДа 11 кДа | Регуляторная роль в морфогенезе вириона |
| 8 (890 н.о.) | Неструктурные белки:N1 N2 | 23 кДа 11кДа | Регуляторные белки |
* - нуклеотидных остатков