Данные к построению калибровочного графика для оценки активности холинэстеразы

Номер пробирок	0,1 н раствор уксусной кислоты, мл	Дистилли­- рованная вода, мл	Содержание СНзСООН в стандартной пробе (мкмоль), т.е. в объеме 0,2 мл, используемых для построения калибровочной кривой	Содержание СНзСООН в пересчете на 1 л сыворотки и 1 ч инкубации при 37°С, ммоль
	0,2	0,8
	0,4	0,6
	0,6	0,4
	0,8	0,2
	0,9	0,1

Контрольные пробы ставят так же, как опытные, но вместо стандартных рас­творов используют дистиллированную воду. Из данных абсорбции контроль­ной пробы вычитают величину абсорбции стандартной. Полученную разницу откладывают на оси ординат, количество ммоль уксусной кислоты в пересчете на 1 л сыворотки и время инкубации в течение 1 ч при 37°С — на оси абсцисс.

Активность холинэстеразы в сыворотке крови практически здоровых взрослых людей составляет 160—340 ммоль/(ч • л).

Пояснение к таблице: 0,1 н раствор СНзСООН соответствует децимоляр-ной концентрации (0,1 моль/л); в 0,2 мл его содержится 0,02 ммоль, а с уче­том 5-кратного разбавления — 0,004 ммоль, т.е. 4 мкмоль. Это количество СНзСООН соответствует 0,1 мл анализируемой биологической жидкости. Для отнесения к 1 л — умножают на 10 000 (4-10 000 = 40 000 мкмоль/л, или 40 ммоль/л). Поскольку время инкубации составляет 30 мин, для отнесения к 1 ч полученную величину (40 ммоль) умножают на 2, получая 80 ммоль.

Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови экспресс-методом с применением индикаторной тест-полоски

Экспресс-метод определения активности холинэстеразы выполняется с ис­пользованием специальных тест-полосок. В них имеется зона, пропитанная раствором ацетилхолина и индикатора, меняющая цвет в зависимости от рН среды. После контакта исследуемой сыворотки с индикаторной тест-полоской под влиянием холинэстеразы наступает гидролиз ацетилхолина и освобождает­ся уксусная кислота, которая изменяет рН и цвет индикатора. Реакция должна длиться до тех пор, пока рН достигнет определенного уровня, а соответствую­щий этому цвет индикаторной полоски не сравняется с цветом эталона.

Мерой активности холинэстеразы является время (мин), на протяжении которого под влиянием исследуемой сыворотки произойдет изменение цвета индикаторной бумаги вплоть до совпадения с цветом эталона.

Ход определения изложен в прилагаемых инструкциях к наборам тест-по­лосок.

Клинико-диагностическое значение исследования активности холинэстеразы сыворотки крови

В связи с тем, что синтез холинэстеразы (так же как и альбумина) происхо­дит в печеночных клетках, гипохолинэстераземия, как правило, сопровождает заболевания печени. Поэтому исследование активности холинэстеразы рас­сматривается как важный лабораторно-диагностический тест, отражающий, прежде всего, функциональное состояние печени. Степень снижения актив­ности фермента в плазме (сыворотке) крови соответствует тяжести и распространенности поражения печеночных клеток (гепатоцитов). Однако и острые гепатиты, в том числе и болезнь Боткина, а также хронические заболевания печени, застойные явления в ней характеризуются уменьшением активности фермента.

Исследование холинэстеразной активности крови все более широко ис­пользуется в хирургической практике. Достаточно отметить, что благодаря своевременному обнаружению сниженной активности фермента в сыворотке крови удается предотвратить грозное осложнение процесса применения миорелаксантов - возникновение весьма длительной миорелаксации под дейст­вием дитилина (сукцинилхолина), способной провоцировать апноэ.

При об­наружении низкой активности холинэстеразы крови противопоказано приме­нение миорелаксантов.

Активность холинэстеразы снижается в послеоперационном периоде, при опухолевой кахексии, карциноме различной локализации, лимфогранулема­тозе, острой парабластной анемии, плазмоцитоме, миеломной болезни, холе­цистите, холангите, желчнокаменной болезни, холецистопатии, обтурационной желтухе (у больных механической желтухой снижение активности ХЭ «го­ворит» о вовлечении в процесс паренхимы печени; то же наблюдается при за­купорке желчного протока вследствие развития злокачественной опухоли), некоторых злокачественных новообразованиях других локализаций, травме черепа, рахите, недостаточности околощитовидных желез, коллагенозах, рев­матизме, эмболии легочной артерии, дерматомиозите, мышечной дистрофии, хронических болезнях почек, поздних сроках беременности физиологическое уменьшение активности фермента наступает во второй половине беременности, состояниях, связанных со сниженным уровнем альбумина в плазме (холинэстераза синтезируется в клетках печени с альбуминовой фракцией), и при содержании в ней атипичных генетических вариантов энзима (эссенциальная гопохолинэстераземия, дисхолинэстераземия).

При механической (обтурационной) желтухе, не сопровождающейся пора­жением печени, активность ХЭ не изменяется.

Активность фермента подавляется при отравлении фосфорорганическими соединениями, которые широко применяются в сельском хозяйстве в качестве инсектицидов (органические тиофосфат-инсектициды).