А. Бактериоскопический

Материал: гной из мочеполовых органов, с конъюнктивы глаза

Рис.7 СХЕМА

Контрольные вопросы

По каким признакам определяют патогенность выделенной культуры стафилококка?

Как определяют наличие у стафилококка плазмокоагулазы?

Какие токсины образует стафилококк и как они обнаруживаются?

Каким образом решается вопрос о выборе антибиотиков для лечения заболеваний, вызванных стафилококками?

Как и с какой целью осуществляют фаготипирование стафилококков?

Какова морфология, тинкториальные и культурные свойства гонококков и менингококков?

В чем отличие их биохимических свойств?

Какие заболевания вызывает менингококк, какой материал берется при разных формах менингококковых заболеваний и как он исследуется?

Как осуществляют микроскопическую диагностику гонореи? На основании каких признаков делается заключение об обнаружении гонококков в микропрепарате из гнойного отделяемого?

Как осуществляют бактериологическую и серологическую диагностику гонококковых заболеваний?

Каковы морфология, культуральные и биохимические свойства пневмококков? На основании каких свойств можно отличить пневмококки от стрептококков? Каково антигенное строение пневмококков, как они классифицируются?

Какие заболевания вызывают пневмококки? Какой материал используется для диагностики этих заболеваний и как производится выделение возбудителя?

Как осуществляют выделение пневмококка биологическим методом и в чем

преимущество этого метода?

Какие бактериальные препараты применяют для лечения и профилактики инфекций, вызываемых патогенными кокками?

Каковы принципы приготовления и применения лечебных аутовакцин? При каких заболеваниях они могут быть использованы?

Приложение к занятию 2

Фаготипирование стафилококков

Для типирования патогенных плазмокоагулирующих стафилококков используют международный набор из 23 умеренных бактериофагов. Эти фаги разделены на группы:

1.группа - фаги 29,52,52А,79,80;

2.группа - фаги ЗА,ЗС,55.71;

3.группа - фаги 6, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А, 84, 85;

4.группа - фаги 94 ,95 ,96; и вне групп фаг 81.

Перед работой набор сухих фагов стерильно растворяют в щелочном бульоне (рН-7,6) с 0,4% глюкозы и 0,02% CaCl₂ . В ампулу добав­ляют I мл бульона и получают разведение фага 10^-1. Из этого основно­го разведения готовят два рабочих разведения, соответствующие тест-разведению (ТР) и 100 ТР. Разведение, соответствующее 1 ТР, указано на этикетке фага.

Степень лизиса культуры разными разведениями фага регистрирует­ся по следущей схеме:

++++ сливной, полный лизис,

+++ полусливной лизис (незначительный рост культуры в зоне лизиса),

++ наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага (пятен лизиса),

+ от 20 до 50 колоний фага,

— полное отсутствие лизиса.

Наивысшее разведение, вызвавшее лизис эталонного штамма на +++, называется тест разведением (I TP) фага.. Например, если на этикетке указано, что I ТР данной серии фага 10^-3, то для получения I TP на­до из разведения 10^-1 сделать два последовательных десятикратных раз­ведения, и разведение 10^-3 будет соответствовать I ТР.

Методике фаготипирования

Суточную агаровую культуру стафилококка засевают в 2,5 мл бульо­на Хоттингера, Мартена или МПБ (рН 7,2-7,4) и выращивают 3-4 часа при 37° (до появления заметной мути).

Одновременно готовят чашки с 1,2% агаром, приготовленным на бульоне Хоттингера с добавлением свежей мясной вода (рН 7,6; глюко­зы 0,4%). CaCl₂ добавляют в расплавленный агар непосредственно перед разливом (0,2 мл стерильного 10%-ного раствора CaCl₂ на, 100 мл агара). По 25-30 мл расплавленного агара разливают в чашки Петри и после застывания подсушивают чашку 30-40 минут при 37° . Затем 3-4-часовую испытуемую культуру стафилококка пастеровской пипеткой за­севают газоном, избыток культуры удаляют пипеткой, а чашку подсуши­вают 30-40 минут.

Дно засеянной чашки расчерчивают карандашом на 23 квадрата и в каждый квадрат засеянной среды стандартной петлей (диаметр 2 мм) или тонко оттянутой пипеткой наносят каплю соответствующего фага всегда в одном и том же порядке.

После подсыхания фага чашку переворачивают крышкой вниз и инкубируют 18-20 часов при 30⁰ или 5-6 часов при 37⁰ и оставляют до следующего утра при комнатной температуре.

Фаготипирование начинают рабочим разведением фагов, соответст­вующим I ТР. Шгаммы, с которыми получен отрицательный результат, на следующий день типируют повторно, используя разведения фагов, соответствующие 100 ТР (разведение 1:10) в нашем опыте .

Учет и регистрация результатов Штамм считается типируемым, если хотя бы один фаг вызвал силь­ную реакцию при типировании I ТР или 100 ТР. (Продолжение см.стр.138)

Б. Бактериологический.

Материал: гной из мочеполовых органов, конъюктивы глаза, синовиальная жидкость, кровь.

Рис. 8 СХЕМА

В. Серологический – РСК

Методы микробиологической диагностики менингококковых инфекций.

А. Бактериоскопический

Б. Бактериологический

Материал: спинномозговая жидкость, кровь, экссудат, гной, слизь из зева и носоглотки

Рис. 9 СХЕМА

В. Иммунологический метод диагностики менингококковых заболеваний

Для диагностики менингококковых инфекций помимо классического бактериологического способа используют также различные серологиче­ские реакции, позволяющие обнаружить антигены возбудителя в спинно­мозговой жидкости и в крови. С этой целью применяют реакции коагглютинации, латекс-агглютинации, встречного иммуноэлектрофореза, реакцию пассивной гемагглютинации и эритроиммуноадсорбцию. Последний метод предложен, в частности, для обнаружения полисахаридного антигена серогруппы А (наиболее частого возбудителя менингита). Суть метода за­ключается в том, что луночки полистиролового планшета сенси­билизируют противоменингококковыми антителами, затем в них добав­ляют исследуемый материал, содержащий искомый антиген. Смесь инкубируют при 37⁰ в течение 30-60 мин для связывания антигена антителами. После отмывания в луночки добавляют эритроцитарный диагностикум (эритроциты, несущие антитела к менингококку группы А). В качестве положительного контроля в одну из луночек добавляют полисахарид группы А, отрицательного - эритроциты без антител. Реакцию учитыва­ют через 20 мин седиментации при 22⁰ визуально и оценивают по 4-х крестной системе. В случае положительной реакции комплекс антитело-антиген взаимодействует с сенсибилизированными эритроцитами, в ре­зультате образуется гомогенный слой эритроцитов, фиксированных на стенках луночек. При отрицательной реакции эритроциты скатываются на дно, образуя компактный осадок.

Методы микробиологической диагностики пневмококковых инфекций.

А. Бактериологический

Материал: мокрота, кровь, гной, экссудат, отделяемое носоглотки, спинномозговая жидкость. Рис.10 СХЕМА

Б. Биологический

Рис.11 Схема

Стафилококковые штаммы чаще лизируются не одним, а несколькими фагами, что дает для каждого штамма характерную для него фагомозаику. В зависимости от фагов, входящих в эту мозаику, штамм стафилокок­ка относят к тем или иным фагогруппам.