Возбудители бактериальных кишечных инфекций

Возбудители кишечных инфекций представлены большим числом микроорганизмов, принадлежащих к неродственным группам (табл. 13.1).

Микроорганизмы Заболевания СЕМЕЙСТВО Enterobacteriaceae РОД Escherichia E.coli Эшерихиоз РОД Shigella Шигеллез (бактериальная ди-S.dysenteriae зентерия) S.flexneri S.boydi S.sonnei РОД Salmonella S.enterica подвид enterica биовар typhi Брюшной тиф биовар paratyphi А Паратиф А биовар paratyphi С Паратиф С биовар schottmulleri Паратиф В биовар typhimurium Сальмонеллезы биовар enteritidis и др. РОД Edwardsiella E.tarda Гастроэнтероколит РОД Yersinia Y.enterocolitica Кишечный иерсиниоз СЕМЕЙСТВО Spirillaceae РОД Campylobacter Кампилобактериоз C.jejuni C.laridis РОД Helicobacter Геликобактериоз H.pylori СЕМЕЙСТВО Vibrionaceae РОД Vibrio V.cholerae 01 биовар asiatici Холера биовар el-tor » V.cholerae 0 139 » V.cholerae не Ol (O4.O6 и др.) Гастроэнтериты V.parahaemolyticus V.mimicus V.fluvialis V.furnissii V.hollisae и др. РОД Aeromonas A.hydrophila » A.sobria A.cavia

Микроорганизмы Заболевания РОД Plesiomonas P.shigeloides Гастроэнтерит СЕМЕЙСТВО ВасШасеае РОД Bacillus B.cereus Пищевая интоксикация B.licheniformis B.subtilis РОД Clostridium C.difflcile Псевдомембранозный колит C.perfringens группа А Пищевая интоксикация группа С Некротизирующий энтерит C.botulinum Ботулизм СЕМЕЙСТВО Micrococcaceae РОД Staphylococcm S.aureus Пищевая интоксикация S.cohnii S.xylosus

генность, экология, особенности инфекции и эпиде­миология вызываемых заболеваний.

Микробиологическая диагностика.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

а Демонстрация

Мазки из чистых культур возбудителей кишечных ин­фекций: Escherichia coli, Shigella sonnei, Campylobacter jejuni. Окраска по методу Грама.

Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

а Задание студентам

Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

Бактериологическая диагностика кишечных инфек­ций.

2.1. Бактериологическая диагностика эшерихиозов:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посева исследуе­мого материала на среду Эндо. Описать и за­рисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

в) провести серологическую идентификацию чис­той культуры, полученной из подозрительных колоний, в ориентировочной реакции агглюти­нации на стекле с агглютинирующими ОВ-коли-сыворотками (серотипирование). Сделать вывод и наметить план дальнейшего анализа.

2.2. Бактериологическая диагностика дизентерии:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посева исследуе­мого материала на среду Эндо. Описать и за­рисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний длядальнейшего исследования;

в) учесть результаты пересева подозрительных ко­лоний на среду Ресселя;

г) провести идентификацию чистой культуры:

4 по биохимическим свойствам,

4 по антигенным свойствам в ориентировоч­ной реакции агглютинации на стекле с аг­глютинирующими сыворотками для иденти­фикации шигелл. Сделать вывод и наметить план дополнительных исследований.

3. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препаратами.

Энтеротоксиген- Энтеропатоген- Энтероинвазив- Энтерогеморраги-ные E.coli ные E.coli ные Е.со! ческие E.coli 06, 08, О15, Класс I: 055, 028ас, 029, О157:Н7, О20, О25, 027, Olll, O119, 0124,0136, О126:Н11, О63, О78, О80, О125-О128, О143, О144, О111:Н-085, О115, 0142 0152, О164, О128ас, О139, Класс II: О18, О167 0148, О153, 044,0112, О159, О168 О114

полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

• Микробиологическая диагностика дизентерии

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование (схема 13.1.2). Фекалии больного засевают на дифференциально-диагностические сре­ды (агар Эндо, Плоскирева и др.). При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков их выбирают петлей, промывают в изотоническом растворе хло­рида натрия и наносят на поверхность питательной среды, после чего растирают шпателем. На 2-й день лактозоотрицательные (прозрачные бесцветные) колонии пересевают на среду Ресселя или на короткий "пестрый ряд" с лактозой и глюкозой.

Среда Ресселя: питательный агар, 1 % раствор лактозы, 0,1 % раствор глюкозы и индикатор бромтимоловый синий. Среду готовят таким образом, чтобы внизу она была в виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую культуру засевают уко­лом в столбик и на поверхность среды. При ферментации углеводов происходит изменение цвета среды (желтая окраска); разрывы стол­бика свидетельствуют о газообразовании. Изменение цвета во всем объеме среды наблюдается при ферментации лактозы, только столби­ка — при ферментации глюкозы, так как содержание ее в среде в 10 раз меньше, чем лактозы. Вместо среды Ресселя можно использо­вать трехсахарную среду (в ее состав входят глюкоза, лактоза, сахаро­за, мочевина, некоторые соли и индикатор феноловый красный) или другие дифференциально-диагностические среды, позволяющие раз­личать бактерии по способности ферментировать лактозу и глюкозу.

Оставшуюся часть колоний используют для постановки ори­ентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью ди­зентерийных сывороток и смесью сывороток против сальмо­нелл (для исключения брюшного тифа или сальмонеллеза). Окончательное заключение дают на 4-й день по результатам ферментативных тестов (табл. 13.1.2) и реакции агглютинации. Выделенную чистую культуру используют для определения чув­ствительности возбудителя к антимикробным препаратам.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследова­ния. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Группа Ферментация Образо- Декар- 1 1 1 1 вание бокси- глкжозы лакто- ман- дуль- кси- индола лирова- с газооб- зы нита цита лозы ние ор- разова- нитина нием S.dysenteriae — — — — — в — S.flexneri — — + — — в — S.boydii — — + — в в — S.sonnei — [+] + [+] в — +

ческих признаков, чувствительности к антимикробным пре­паратам.

Типирование штаммов возбудителей для эпидемиологическо­го анализа проводят методом рестрикционного анализа ДНК.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования: биохими­ческие исследования. Выявление бактериального фермен­та уреазы.

4 Определение уреазной активности в биоптате. Биоптат помещают в бульон, содержащий мочевину и индикатор. В положительных случаях происходит изменение цвета индикатора в результате защелачивания среды при гид­ролизе мочевины с образованием аммиака.

4 Дыхательный тест на уреазу. После перорального приема мочевины, меченной радиоактивным изотопом ¹⁴С, оп­ределяют присутствие меченой двуокиси углерода ¹⁴СО₂ в выдыхаемом воздухе. Появление ¹⁴СО₂ свидетельствует об активности уреазы (результат гидролиза меченой мо­чевины), что является косвенным признаком присутст­вия в желудке или двенадцатиперстной кишке H.pylori. Тест используют преимущественно для предварительной диагностики и контроля результатов лечения.

Молекулярно-биологические исследования. Ис­следуемый материал, полученный из очага инфекции, исполь­зуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Диагностическое значение имеет обнару­жение антител к поверхностным антигенам возбудителя и уреа-зе. Используют методы: ИФА, РИА и РИГА.

• Микробиологическая диагностика кампилобактериозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, рек­тальные мазки, при генерализованной форме инфекции — кровь, спинномозговая жидкость. При необходимости хране­ния материал помещают в транспортную среду (буферный со­левой раствор с добавлением нейтрального угля и метиленово-го синего или тиогликолевый бульон) при температуре 4 °С, что позволяет микробам сохранять жизнеспособность до 4 сут.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическая диагностика. Производят посев на спе­циальные плотные среды, обогащенные аминокислотами с до­бавлением гемолизированной крови или нейтрального угля (для удаления токсичных метаболитов кислорода) и 3—5 анти­биотиков для подавления роста сопутствующей микрофлоры (обычно используют ванкомицин, полимиксин, триметоприм,

амфотерицин В и др.). Инкубация посевов осуществляется при 42 °С в микроаэрофильных условиях — в атмосфере, содержа­щей не более 5 % С>2 и 10 % СО₂. Рост колоний наблюдается через 48—72 ч. Идентификация чистой культуры осуществля­ется на основании морфологии: мелкие грамотрицательные S-образно или спиралевидно (2—3 завитка) изогнутые микро­организмы, моно- или амфитрихи; используют темнопольный и фазово-контрастный методы исследования для выявления характерной подвижности — штопорообразные движения, куль-туральных, биохимических признаков, чувствительности к антимикробным препаратам. Разработаны также биохимичес­кие (хемоидентификация) и молекулярно-биологические мето­ды идентификации (см. главу 3).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, ис­пользуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Применяют преимущественно для ретро­спективной диагностики — антитела определяют в парных сы­воротках в реакциях РСК, РИГА и др.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Агглютинирующие ОВ-сыворотки против патогенных кишеч­ных палочек: ОВ-коли-сыворотка О26:В6, ОВ-коли-сыворотка О111: В₄, ОВ-коли-сыворотка О55:В5 и др. Получают путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующего серовара и применяют в реакции агглютинации для идентифи­кации патогенных эшерихий.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентифи­кации шигелл. Различают групповые и моновалентные сыво­ротки. Получают путем иммунизации кроликов определенны­ми видами и сероварами S.dysenteriae, S.flexnery, S.sonnei и S.boydi с последующей адсорбцией межгрупповых и других лишних антител.

Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики и лечения.

Дизентерийная вакцина спиртовая, сухая. Содержит шигеллы Флекснера и Зонне. Применяют для лечения хронических форм дизентерии.

Препараты эубиотиков — коли-бактерин, бифидумбактерин, бификол, лактобактерин. Применяют с лечебно-профилакти­ческими целями (см. тему 13.2).

Антибиотики: полусинтетические пенициллины, цефалоспо-рины 2—4-го поколений, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолины, сульфаниламиды, полимиксин и др.