Тема: КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ МИКРООРГАНИЗМОВ

Вопросы для рассмотрения:

1. Подсчет клеток в счетных камерах.

2. Подсчет клеток в капиллярах Перфильева.

3. Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках (метод Виноградского-Брида).

4. Подсчет клеток на мембранных фильтрах.

5. Определение количества клеток высевом на плотные питательные среды (чашечный метод Кока).

6. Определение количества клеток высевом в жидкие среды (метод предельных разведений).

7. Определение биомассы взвешиванием.

8. Определение количества клеток и биомассы нефелометрическим методом.

Студент должен знать:методы и приемы работы со счетными камерами, капиллярами Перфильева, мембранными фильтрами; методику приготовления и подсчет клеток микроорганизмов по методу Виноградского-Брида, суть чашечного метода Коха и приемы подсчета, пользоваться таблицей Мак-Креди, устройства и принцип работы нефелометра.

Студент должен уметь:произвести подсчет клеток микроорганизмов выше перечисленными методами.

Задания для выполнения лабораторной работы:

Задание 1. Определите количество клеток микроорганизмов чашечным методом Коха, находящихся в 1 мл и 1 л воды. Сделать выводы о качестве питьевой воды или указать степень сапробности природных вод.

Расчет количества клеток провести согласно формуле:

, где

Х — количество клеток в 1 мл

а — среднее число колоний при высеве разведения

V — объем суспензии взятый для посева

10 ⁿ— коэффициент разведения

Х =

Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________

___________________________________________________________

Задание 2. Определите количество клеток микроорганизмов чашечным методом Коха, находящихся в 1 г сырой и 1 г абсолютно сухой почвы. По полученным результатам (количество клеток в 1 г абсолютно сухой почвы) сравнить плодородность различных почв.

Расчет количества клеток провести согласно формулам:

а) в 1 г сырой почвы:

, (при условии, что V=0,05 мл)

Х=

б) в 1 г абсолютно сухой почвы:

,где

0,75 — при влажности почвы 25% 1 г сырой почвы содержит 0,75 г абсолютно сухой почвы

20 — коэффициент перевода 0,05 мл в 1 мл (0,05 х 20 = 1)

10ⁿ — разведение, взятое для посева

а — число колоний, выросших на чашках

V — объем суспензии, взятой для посева (в мл)

Х =

Вывод: _________________________________________________

________________________________________________________

________________________________________________________

Задание 3. Определите количество клеток микроорганизмов седиментационным методом, находящихся в 1 м³ воздуха. Сделать вывод о степени загрязнённости воздуха и при необходимости предложить меры по снижению численности микроорганизмов в воздухе.

Расчет количества клеток провести согласно формуле:

Х — число клеток микроорганизмов в 1 м³ воздуха

а — число колоний, выросших на чашках

S — площадь чашки Петри (S == Пr², 3,14 х 25 = 78,5 )

Примечание 1. Установлено, что на 100 см² (b) падает примерно столько микробных зародышей, сколько их находится в 10 л воздуха (0,01 см³ ); чтобы узнать, сколько клеток находится в 1 м³ воздуха, количество микробных зародышей умножается на 100 (с).

Х =

Примечание 2. Общая обсемененность воздуха и определение степени чистоты воздуха может быть рассчитано по суммарному числу колоний, выросших на двух параллельных чашках:

менее 250 колоний — воздух чистый

250-500 колоний — загрязнен в средней степени

более 500 колоний — загрязнен

Вывод: _________________________________________________

________________________________________________________

________________________________________________________

Задание 4. Выполните схемы окулярных сеток, применяемым для прямого подсчета клеток микроорганизмов

а)________________ б)_________________ в)_________________

________________ _________________ ________________

Рис. 8.1 Схемы окулярных сеток

Задание 5. Подсчитайте количество клеток микроорганизмов прямым методом в 1 мл суспензии с применением камеры Горяева-Тома. Расчет количества клеток провести согласно формуле:

,где

Х — число клеток в 1мл суспензии

а— среднее число клеток в квадрате сетки

h — высота камеры в мм

S — площадь квадрата сетки в мм²

10³ — коэффициент перевода см³ в мм³

n — разведение исследуемой суспензии

Х =

Вывод: _________________________________________________

________________________________________________________

________________________________________________________

Задание 6. Подсчитайте количество клеток микроорганизмов, содержащихся в 1 мл суспензии, прямым методом на фиксированных окрашенных мазках по Виноградскому-Бриду. Вычислить количество клеток микроорганизмов,

Расчет количества клеток провести согласно формуле:

,где

Х — число клеток в 1 мл исследуемого субстрата

а —среднее число клеток в квадрате окулярной сетки

(поля зрения), мкм²

V — объем нанесенной на стекло суспензии в мл

S — площадь приготовленного мазка в мкм²

s--- площадь квадрата окулярной сетки поля зрения), мкм²

n— разведение исследуемого субстрата

Х =

Вывод: ___________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________

Ответьте на контрольные вопросы:

1. Методы количественного учёта микроорганизмов разделяются на:

а)______________________________________________________

б)______________________________________________________

2. Перечислите этапы определения биомассы клеток:

а)______________________________________________________

б)______________________________________________________

в)______________________________________________________

г)______________________________________________________

3. При работе с камерой Горяева для количественного учёта необходимо соблюдать условия:

а)______________________________________________________

б)______________________________________________________

в)______________________________________________________

г)______________________________________________________

4. Укажите особенности подсчёта в капиллярах Перфильева:

а)______________________________________________________

б)______________________________________________________

в)______________________________________________________

г)______________________________________________________

5. При подсчете клеток на мембранных фильтрах учитываются параметры (величины):

а)______________________________________________________

б)______________________________________________________

в)______________________________________________________

г)______________________________________________________

6. Удобство подсчета клеток на фиксированных окрашенных мазках по методу Виноградского-Брида в том, что:

а)______________________________________________________

б)______________________________________________________

в)______________________________________________________

г)______________________________________________________

гДля подсчета методом «предельных разведений» используются условия:

а)______________________________________________________

б)______________________________________________________

в)______________________________________________________

г)______________________________________________________

7. При определении количества клеток нефелометрическим методом необходимо придерживаться условий:

а)______________________________________________________

б)______________________________________________________

в)______________________________________________________

г)______________________________________________________

_________________________________ _____________________

(дата защиты лабораторной работы) (подпись преподавателя)

Рекомендованная литература:

1. Практикум по микробиологии : учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / А. И. Нетрусов [и др.] ; под ред. А. И. Нетрусова. – М. : Академия, 2005. – 608 с.

2. Руководство к практическим занятиям по микробиологии : учеб. пособие / Под ред Н. С. Егорова. – 3-е изд., перераб. и доп. – М. : Изд-во МГУ, 1995. – 224 с.

3. Микробиология : руководство к лаборатор. занятиям: учеб. пособие для студентов вузов / И. Л. Дикий [и др.]. – Киев : ИД «Профессионал», 2004. – 594 с.

4. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований : учеб. пособие / под ред. А. С. Лабинской, Л. П. Блинковой, А. С. Ещеной. – М. : Медицина, 2004. – 576 с.

5. Теппер, Е. З. Практикум по микробиологии: учебное пособие для вузов / Е. З. Теппер, В. К. Шильникова, Г. И. Переверзева ; под ред. В. К. Шильниковой. – 6-е изд., стереотип. – М. : Дрофа, 2005. – 256 с.

6. Сэги, Й. Методы почвенной микробиологии / Й. Сэги / Пер. с венг. И. Ф. Куренного ; под ред. и с предисл. Г. С. Муромцева. –М. : Колос, 1983. – 296 с.

ЗАНЯТИЕ 9