Люминесценция. Фосфоресценция, флуоресценция. Классификация видов люминесценции в зависимости от вида возбуждения.

Люминесценция – спонтанное излучение тепла, избыточное при данной температуре тела над тепловым излучением, длительность которого значительно превышает период световых волн. Период световых волн составляет 10^-15 c, а длительность люминесценции как минимум - 10^-10 c.
Типы люминесценции по длительности свечения:

Флуоресценция (10^-8 с)- быстрое свечение, кратковременное, остаточное -излучательный переход возбужденного электрона из синглетного состояния S1 в основное состояние S0

Фосфоресценция (10^-3 – 10^-4 с и более) – длительное свечение, продолжительное -излучательный переход возбужденного электрона из триплетного состояния T1 в основное состояние S0.

а) ν люм = ν б) ν люм ˂ ν в) ν люм ˃ ν

Основной энергетической характеристикой люминесценции является ее энергетический выход η - отношение энергии, которая люминофором излучается, к энергии, которую люминофор поглощает: η = E/E0

Люминесцентный анализ по методике исследования делится на:

· макроанализ

· микроанализ

· флуоресцентные зонды и метки.

Также люминесценцию используют для создания осветительной и регистрирующей аппаратуры (лампы дневного света, экран осциллографа).

Классиф. по виду возбуждения:

▪Фотолюминесценция

▪Рентгенолюминесценция

▪Радиолюминесценция

▪Катодолюминесценция

▪Электролюминесценция

▪Хемилюминесценция

▪Биолюминесценция

Механизм биохемилюминесценции определяется реакциями окисления.

В биологических системах хемилюминисценция возникает при рекомбинации перекисных свободных радикалов липидов.

40. Механизмы люминесценции. Возможные варианты протекания этого процесса. Правило Стокса. Энергетический выход, закон Вавилова.

Люминесценция – спонтанное излучение тела, избыточное при данной температуре тела над тепловым излучением, длительность которого значительно превышает период световых волн. Период световых волн составляет 10^-15 c, а длительность люминесценции как минимум - 10^-10 c.

Резонансная люминесценция – характерна для атомов и некоторых простых молекул при их возбуждении в газовой фазе. Возвращение атомов из возбужденного в нормальное состояниесопровождается излучением кванта люминесценции, равного поглощенному кванту. Обычно у возбужденных атомов происходят те или иные энергетические потери. В результате излучаемые кванты меньше поглощаемых и люминесценция имеет большую длину волны.

Стоксова люминесценция – При взаимодействии с окружающими атомами возбуждённый атом может передать им часть энергии и перейти на уровень 2’, при переходе с которого и происходит люминесценция. Уровень испускания 2’ лежит ниже уровня 2, часть энергии при возбуждении теряется на тепло, а длина волны испущенного света больше, чем поглощённого

Антистоксова люминесценция – получается, если квант света поглощен возбужденной молекулой. Длина излучаемой волны меньше длины волны возбуждающего света

Правило Стокса: Спектр люминесценции сдвинут относительно спектра вызвавшего его света в сторону больших длин волн.

Энергия кванта, вызвавшего возбуждение (hν0 ), при поглощении его веществом, частично переходит в другие энергии:

Основной энергетической характеристикой люминесценции является ее энергетический выход η - отношение энергии, которая люминофором излучается, к энергии, которую люминофор поглощает: η = E/E0.

I – интенсивность люминесцентного излучения, λ – длина волны

Энергия кванта, вызвавшего возбуждение (hν₀), при поглощении его веществом частично переходит в другие энергии: hν₀ = hν_люм + ΔE

Поэтому: hν_люм<hν₀,

λ_люм> λ₀.

Согласно закону Вавилова энергетический выход люминесценции сначала возрастает пропорционально возрастанию длины волны возбуждающего света, а потом резко падает:

η = E/E0 = hν/(hν0) = λ/λ0. (энергетический выход пропорционален длине волны возбуждающего света).

41.Применение люминесценции в биологии и медицине.

Люминесцентный анализ - совокупность методов для определения природы и состава вещества по спектру его люминесценции.

• Качественный анализ - определение наличия (или отсутствия) каких-либо веществ (молекул) по форме спектра люминесценции. При этом можно изучать структуру молекул вещества; межмолекулярное взаимодействие; химические превращения.

• Количественный анализ - определение количества вещества по интенсивности спектра люминесценции (можно обнаружить массу вещества m = 10-10 г).

Если люминофором является растворенное вещество, то при невысокой оптической плотности раствора интенсивность люминесценции пропорциональна концентрации раствора. Поэтому по интенсивности люминесценции можно судить о концентрации раствора. Для этого интенсивность люминесценции исследуемого раствора (Ιχ) сравнивают с интенсивностью люминесценции раствора (I0), концентрация которого известна. Неизвестную концентрацию Сх находят по формуле

По методике исследования люминесцентный анализ можно представить следующей схемой.

Макроанализ - наблюдение невооруженным глазом люминесценции объектов, облученных УФ-излучением:

- проверка качества и сортировка пищевых продуктов

- сортировка фармакологических средств

- свечение волос, чешуек, ногтей при диагностике их поражения грибком и лишаем.

Микроанализ - исследование люминесцирующих микрообъектов при помощи специальных люминесцентных микроскопов, в которых есть специальный осветитель, содержащий ртутную лампу со светофильтром, пропускающим УФ-излучение.

Флуоресцентные зонды. В некоторых медицинских исследованиях применяются специальные люминофоры, вводимые в организм и распределяющиеся по тканям в соответствии со своими свойствами. Такие люминофоры получили название флуоресцентных зондов. Например, при введении раствора такого люминофора в кровь он разносится по всему организму и диффундирует в дерму и эпидермис. Люминесценция возбуждается длинноволновым ультрафиолетовым излучением и наблюдается в видимом свете. В поверхностных тканях с пониженным кровоснабжением люминесценция появляется позже, чем в тканях с нормальным кровоснабжением.

Флуоресцентные метки. Флуоресцирующие молекулы можно ковалентно связывать с определенными молекулами, и затем эту систему вводить в исследуемый объект. Такие молекулы называются флуоресцентными метками. Примером является использование флуоресцентно меченых антител. Если добавить такие антитела к суспензии смеси клеток, то они связываются только с теми из них, на поверхности которых находятся специфические к данному антителу антигены. Возникает яркая люминесценция определенных клонов клеток, наблюдаемая в люминесцентном микроскопе. Данная методика используется в иммунологических исследованиях крови.