Лабораторная работа №1. Обнаружение этилового спирта в содержимом желудка лабораторных животных
Этиловый спирт C2H5OH (этанол, этиловый алкоголь, винный спирт) – бесцветная, летучая жидкость с характерным запахом, жгучая на вкус, т. кип. 77-77,50С, горит синим пламенем, во всех отношениях смешивается с водой, диэтиловым эфиром, и многими органическими растворителями, перегоняется с водяным паром.
Полученный брожением крахмалсодержащих продуктов, фруктов, сахара, этанол отгоняют; спирт-сырец очищают ректификацией. Спирт-сырец и самогон, изготовленный в домашних условиях, содержат некоторое количество сивушных масел, относительно медленно метаболизирующихся в организме. Этанол широко используется в промышленности (как растворитель и исходное вещество для получения ряда химических соединений), в медицине как дезинфицирующее средство, в фармации, входит в состав спиртных напитков. Ориентировочная летальная доза - 6- 8 мг чистого этанола на 1 кг массы тела или 200-300 мл в пересчете на всю массу тела непьющего человека. Этанол локализуется в головном мозге, печени, почках, поражает сердечно-сосудистую, нервную системы, вызывает цирроз печени, психозы. Спирт - наркотик, оказывающий возбуждающее, а затем угнетающее действие на нервную систему. 90 % поступившего в организм этанола (при приеме внутрь, внутривенном введении, с вдыхаемым воздухом) метаболизируется ферментами алкогольдегидрогеназой и альдегидоксидазой до СО2 и Н2О, до 10 % - выделяется в неизменном виде с мочой, выдыхаемым воздухом, слюной, потом.
В последние годы острые отравления этиловым спиртом занимают первое место – около 75 % среди отравлений другими токсикантами.
При исследовании органов на наличие этанола, его отгоняют с водяным паром; обнаружение этилового спирта проводят при помощи описанных ниже реакций. Для обнаружения этилового спирта в крови и моче, напитках, растворах применяют метод газожидкостной хроматографии.
Получение биоматериала для исследований и отгонка этанола с водяным паром.
Материалы и оборудование.
Желудок и его содержимое белой лабораторной крысы – 2 шт.
Ход работы.
Желудок крыс вместе с его содержимым измельчают ножницами и переносят в прибор для перегонки с водяным паром. Колбу с содержимым нагревают и перегоняют этанол с водяным паром. Первые порции дистиллята собирают в приемник, содержащий 2-3 см3 2 %-ного NaOH и проверяют на наличие солей синильной кислоты (образование берлинской лазури при добавлении раствора хлорида железа (II)). После этого отбирают ещё 10-15 см3 дистиллята и определяют в нем наличие этанола.
1.2. Реакция образования йодоформа.
При нагревании этилового спирта с раствором иода и щелочью, образуется йодоформ (СНI3), имеющий специфический запах:
I2 + 2NaOH ® NaOI + NaI + H2O;
C2H5OH + NaOI ® CH3– CHO + NaI + H2O;
CH3–CHO + 3 NaOI ® CI3-CHO + 3 NaOH;
CI3-CHO+ NaOH ® CHI3+ HCOONa
Предел обнаружения: 0,04 мг этанола в 1 см3 раствора. Реакция не специфична на этиловый спирт. Ее дают ацетон, молочная кислота и др.
Реактивы и оборудование.
Дистиллят, содержащий этанол, 5 %-ный раствор гидроксида натрия, 1 %-ный раствор иода, приготовленный на 2 %-ном растворе иодида калия, пробирки, пипетки, баня водяная, плитка электрическая.
Ход работы.
В пробирку вносят 1 см3 дистиллята и 2 см3 5-%-ного раствора гидроксида натрия. Затем по каплям прибавляют 1 %-ный раствор иода в 2 %-ном растворе иодида калия до слабо-желтого окрашивания. Затем смесь нагревают на водяной бане (50ОС) до появления запаха иодоформа.
В протокол записывают ход работы, полученные результаты, формулируют выводы.
1.3. Реакция образования этилбензоата.
При взаимодействии этанола с хлористым бензоилом образуется этилбензоат, имеющий характерный запах:
Избыток хлористого бензоила маскирует запах этилбензоата, вследствие чего для разложения избытка бензоилхлорида прибавляют раствор щелочи:
Реактивы и оборудование.
Дистиллят, содержащий этанол, хлористый бензоил, 10 %-ный раствор гидроксида натрия, штатив с пробирками, пипетки с грушей.
Ход работы.
В пробирку вносят 1 см3 дистиллята, прибавляют 1-2 капли хлористого бензоила. При взбалтывании смеси прибавляют по каплям 10 %-ный раствор гидроксида натрия до исчезновения запаха хлористого бензоила.
Для лучшего ощущения запаха этилбензоата, несколько капель реакционной смеси наносят на кусочек фильтровальной бумаги.
В протоколе отмечают ход работы и результаты проведения реакции.
1.4. Реакция образования ацетальдегида.
Ацетальдегид, образующийся при окислении этилового спирта, можно обнаружить при помощи реакции с нитропруссидом натрия и морфолином.
Реактивы и оборудование.
Исследуемый раствор, содержащего ацетальдегид, 20 % водный раствор морфолина, 5 % водный раствор нитропруссида натрия, пробирки, пипетки, груши, фильтровальная бумага.
Ход работы.
2-3 капли раствора, содержащего ацетальдегид, наносят на фильтровальную бумагу и прибавляют каплю реактива (свежеприготовленная смесь равных объемов 20%-го водного раствора морфолина и 5%-го водного раствора нитропруссида натрия). При наличии ацетальдегида в растворе появляется синяя окраска.
Предел обнаружения: 1 мкг ацетальдегида в пробе.
В протоколе отмечают ход работы и результаты проведения реакций.