Полуколичественное определение белка
ПРИНЦИП МЕТОДА: метод основан на реакции Геллера с концентрированной азотной кислотой. Путем последовательного разведения мочи достигают такого максимального разведения, при котором еще появляется кольцо между 2-й и 3-й минутой.
ХОД РАБОТЫ:
1.отмерить в 4 пробирки по 1 мл HNO3;
2. в других 4-х пробирках приготовить разведения мочи по схеме:
| ОТМЕРИТЬ | ОПЫТ 1 | ОПЫТ 2 | ОПЫТ 3 | ОПЫТ 4 и т.д. |
| Разведение Моча Н2О | неразвед. 1,0 мл - | 1 : 10 0,1 мл 0,9 мл | 1 : 20 0,1 мл 1,9 мл | 1 :30 0,1 мл 2,9 мл |
| Наслоить с помощью пипетки разведенную мочу (1мл) на азотную кислоту | ||||
| HNO3 конц., | 1,0 мл | 1,0 мл | 1,0 мл | 1,0 мл |
РЕЗУЛЬТАТ:
КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ: Умножают разведение на 0,033, получают содержание белка в моче в г/л.
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: то же, что и в работе “Качественная реакция на белок”.
В Ы В О Д:
КАЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ (проба Гайнеса).
ПРИНЦИП МЕТОДА: метод основан на способности глюкозы восстанавливать при нагревании в щелочной среде гидроксид меди в оксид меди красного цвета.
ХОД РАБОТЫ: взять пробирку: опыт
| ОТМЕРИТЬ | ОПЫТ |
| Реактив Гайнеса Моча | 9 капель 2 капли |
Перемешать, нагреть до начала кипения.
РЕЗУЛЬТАТ:
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Присутствие глюкозы в моче – глюкозурия наблюдается при сахарном диабете, при поражении почек, отравлении оксидом углерода, эфиром, хлороформом и т.д.
Алиментарные физиологические глюкозурия и фруктозурия встречаются только у грудных детей, что связано с физиологической незрелостью транспортных систем, участвующих в реабсорбции этих углеводов. Галактоза, пентозы и дисахариды никогда не подвергаются реабсорбции, вследствие чего у детей грудного возраста (особенно у недоношенных новорожденных) возможны алиментарные галактозурия, пентозурия, дисахаридурия в физиологических условиях. Обычно галактозурия и лактозурия исчезают у детей к 10-му дню жизни, но иногда могут сохраняться дольше.
В Ы В О Д:
4. экспресс-методы
Дата: ______________
ЗАНЯТИЕ № 36
РАБОТА № 1: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА В СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Содержание белка в спинномозговой жидкости, в отличие от сыворотки крови, незначительно. Определение общего белка в спинномозговой жидкости имеет большое значение для диагностики опухолей мозга и воспалительных заболеваний центральной нервной системы.
ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА. Раствор белка в щелочной среде в присутствии сульфата меди (NaOH/CuSO4) окрашивается в сине-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации белка в сыворотке крови и определяется фотометрически.
ХОД РАБОТЫ: взять опытную и контрольную пробирки.
| ОТМЕРИТЬ | ОПЫТ | КОНТРОЛЬ |
| РЕАКТИВ ГОРНАЛА СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ NaCl 0,9% | 4,0 мл 0,1 мл - | 4,0 мл - 0,1 мл |
| Перемешать, фотометрия через 20 минут. Кювета 1 см, λ=540 нм (зеленый светофильтр) |
РЕЗУЛЬТАТ:
Еоп =
С общего белка =
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Нормальное содержание общего белка в спинномозговой жидкости – 0,22-0,33 г/л.
Гиперпротеинорахия – увеличение уровня белка в СМЖ наблюдается при менингитах (серозный и гнойный), опухолях головного мозга, полиомиелите, арахноидите, кровоизлияниях в мозг, абсцессах мозга, рассеянном склерозе.
Гипопротеинорахия – снижение уровня белка в СМЖ отмечается при гидроцефалии, гиперсекреции ликвора, доброкачественной внутричерепной гипертензии.
ВЫВОД:
РЕФЕРЕНТНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ ОСНОВНЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ВЗРОСЛЫХ
КРОВЬ
| Показатель | Значение |
| АлАТ | 0,1 - 0,68 ммоль/ч×л |
| Альбумины | 40 - 50 г/л |
| Амилаза | 16 -30 г/ч×л |
| АсАТ | 0,1 - 0,45 ммоль/ч×л |
| Белок общий | 65 - 85 г/л |
| Билирубин общий | 5,0 - 20,5 мкмоль/л |
| Гемоглобин | 115 - 145 г/л (женщины) 130 - 160 г/л (мужчины) |
| Глобулины | 20 - 30 г/л |
| Глюкоза | 3,3 - 6,4 ммоль/л |
| Железо | 8,8 - 31,0 мкмоль/л |
| Калий | 3,2 - 5,6 ммоль/л |
| Кальций | 2,25 - 2,75 ммоль/л |
| Креатинин | 53 – 115 мкмоль/л |
| Мочевая кислота | 140-340 мкмоль/л у женщин 200-415 мкмоль/л у мужчин |
| Мочевина | 2,5 - 8,33 ммоль/л |
| Натрий | 130 - 155 ммоль/л |
| Общие липиды | 4,0 - 8,0 г/л |
| Триглицериды | 0,4 - 1,54 ммоль/л у женщин 0,45 – 1.82 ммоль/л у мужчин |
| Фибриноген | 2 - 4 г/л |
| Хлор | 95 - 110 ммоль/л |
| Холестерин | 3,1 - 5,2 ммоль/л |
МОЧА
| Показатель | Значение |
| Амилаза | 28 -160 г/ч×л |
| Мочевая кислота | 1,6 – 6,44 ммоль/сут |
| Мочевина | 333 – 583 ммоль/сут |
СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ