Казахский национальный медицинский университет им.С.Д.Асфендиярова, г. Алматы (Казахстан).
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЧИСТОТЫ ГЕЛЯ С ПРОТИВОГРИБКОВЫМ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ДЕЙСТВИЕМ
Дербисбекова У.Б.*, Датхаев У.М., Шопабаева А.Р.,
Омарова Г.Ж., Сарсенова К.А.
Казахский национальный медицинский университет им.С.Д.Асфендиярова, г. Алматы (Казахстан).
Резюме: В данной работе приведены результаты исследования микробиологической чистоты геля под условным названием "Антикандид"на основе субстанции производного 4H-пиридо[4’,3’:5,6]пирано[2,3-d]пиримидина с противогрибковым и антибактериальным действием.Практическая ценность и новизна заключаются в исследовании микроорганизмов в исследуемых образцов гелей, различными методами. Результаты исследования показали высокое качество исследуемых образцов по показателю «Микробиологическая чистота».
Ключевые слова:гель,соево-казеиновый агар, Сабуро-декстрозный агар, соево-казеиновый бульон, маннит-солевой агар, тестовые штаммы, поверхностный посев, глубинный посев, бактерий.
Введение. Микробиологическая чистота - является одним из важных показателей качества при исследовании разработанного лекарственного средства. Испытание на микробиологическую чистоту включает количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах.
Испытание на микробиологическую чистоту включает количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах [1].
По микробиологической чистоте, необходимо разработать нормы, ограничивающие уровень микробной контаминации вспомогательного вещества. Однако их микробиологическая чистота находится в прямой зависимости от микробиологической чистоты воздуха производственныхпомещений, условий транспортировки и времени хранения в открытом виде на стадии фасовки. Большинство лекарственных средств, не подвергнутые стерилизации, могут загрязняться микроорганизмами. Микроорганизмы в вязких средах значительно медленнее развиваются, чем в жидких средах, но при этом они длительное время могут выживать и размножаться в самом лекарственном средстве. При процессе приготовления - первичный контаминации определенное количество разных микроорганизмов могут попасть в готовые лекарственные препараты. Источниками микробного загрязнения могут быть вода, сырье, воздух, оборудование, первичная упаковка и различные внешние факторы. Наиболее рациональными и перспективными направлениями в решении проблемы снижения микробной контаминации лекарственныхсредств, действующих и вспомогательных веществ являются: повышение культуры производства и совершенствование технологий производства, отвечающих современным требованиям по микробиологической чистоте.
При разработке новых препаратов одним из важных аспектов является оценка показателей качества и их стандартизация, которое гарантирует безопасность и стабильность препарата в течение всего срока годности.
В этой связи, оптимизация состава и поиск новых лекарственных средств в первую очередь за счет выбора оптимальной основы, является актуальной проблемой фармации [2].
Материалы и методы. Для изучение микробиологической чистоты геля под условным названием "Антикандид" были получены модели геля. Образцов определяли сразу же после приготовления, через каждые 6 месяцы хранение в условиях холодильника (температура от 2 оС до 8оС) и при температурной температуре (от 15оС до 25оС), в течение 24 месяцев.
При определении микробиологической чистоты образцов геля "Антикандид" использовались методы, предлагаемые в ГФ РК: определение общего числа жизнеспособных аэробных мезофильных бактерий и грибов - метод глубинного посева, метод поверхностного посева, определения наличия бактерий Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и семейства Enterobacteriaceae.
Испытания позволяют осуществлять количественное определение мезофильных бактерий и грибов, способных расти в аэробных условиях. В качестве тестовых штаммов использовали микроорганизмы из американской коллекции культур: Staphylococcus aureus АТСС 6538, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 и Escherichia Coli АТСС 25922.
Согласно рекомендации были использованы следующие плотные и жидкие питательные среды: соево-казеиновый агар (для определения количества живых бактерий), Сабуро-декстрозный агар (определения количества грибов), соево-казеиновый бульон (для предварительного инкубирования при определении наличия определенных видов микроорганизмов), маннит-солевой агар (для идентификации Staphylococcus aureus), цетримидный агар (для идентификации Pseudomonas aeruginosa).
При исследовании использовали с каждой питательной средой больше 6 чашек Петри, результат исследовании определяли как среднее арифметическое значение числа колоний, которые выросли на всех паралельных чашках. Чашки с соево-казеиновым агаром инкубировали при температуре от 300С до 350С 5 суток, чашки из Сабуро-декстрозным агаром - при температуре от 200С до 25оС - 7 суток.
Отработанную пробу образца 10 г геля растворяли в 100 мл 0,9 % физиологическом растворе, пробу подогревали не больше температуры 400Си тщательноперемешивали, поддерживая температуры на водяной бане. Добавляли необходимое количество заранее подогретого растворителя для получения разведения испытуемого образца 1:10. Затем перемешивали до образования необходимый эмульсии.
В соответствии с требованиями ГФ РК I, т. 1, 2.6.12, допускается наличие: аэробных бактерий не более 1000, грибов (суммарно) не более 100. В 1 г препарата допускается наличие: энтеробактерий и других грамотрицательных не более 100. А так же в 1 г препарата не допускается наличие Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosа [3-5].
Результаты и их обсуждение. Состав геля "Антикандид" на основе субстанций производных 4H-пиридо[4’,3’:5,6]пирано[2,3-d]пиримидина представлен в таблице №1.
Таблица №1: Состав геля "Антикандид" с противогрибковым
действием
| I | Действующее вещество: | |
| Субстанция производных 4H-пиридо[4’,3’:5,6]пирано[2,3-d]пиримидина | 3% | |
| II | Вспомогательные вещества: | |
| Димексид | 3% | |
| Пропиленгликоль | 50,0 % | |
| Карбопол Ultrez 20 | 1,0% | |
| Триэтаноламин | 1,0% | |
| Вода очищенная | 42,0% |
Инкубация подготовленных образцов гелей (соотношение 1:10) на маннит-солевой агаре (температура 300С до 350С - 72 часы) показала отстутствие колоний, которое отвечает результату - "отсутствие бактерий Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosа в 1 г исследуемой гели". Результаты исследования представлены в таблице под №2.
Таблица №2: Результаты исследовании микробиологической чистоты геля "Антикандид"
| № | Показатель | Метод исследования | Срок хранения, температура, месяц | |||||||||
| t от 20С до 8оС | t от 150С до 25оС | |||||||||||
| Общее число аэробных микроорганизмов, КУО/г. | Глубинный посев | |||||||||||
| Поверхностный посев | ||||||||||||
| Общее число дрожжевых и плесневых грибов, КУО/г. | Глубинный посев | |||||||||||
| Поверхностный посев | ||||||||||||
| Наличие энтеробактерий, грам-отрицательных, грам-положительных бактерий | Staphylococcus aureus | Отсутствуют | ||||||||||
| Pseudomonas aeruginosа | Отсутствуют | |||||||||||
| Escherichia Coli | Отсутствуют |
Примечание: КУО/г - число колониеобразующих единиц в 1 г препарата.
Определение микробиологической чистоты методами поверхностного и глубинного посева показало содержание бактерий - от 10 до 20 колониеобразующих единиц в 1 г (КУО/г), дрожжевых и плесневых грибов - от 8 до 10 КУО/г. Полученные результаты показывают отсутствие в образце гелей грамположительных кокков Staphylococcus aureus и грамотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosа и Escherichia Coli при хранение в течение 24 месяцев в температуре от 20С до 25оС [5-7].
Выводы.По результатам исследования уровень микробной загрязненности не превышал допустимые пределы: не более 10000 КОЕ аэробных бактерий и 100 КОЕ грибов в 1 г геля при отсутствии Escherichia Coli кишечных бактерий - не более 100 КОЕ в 1 г (мл), и бактерии семейства Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosа обнаружен не был и показали микробиологическую чистоту, а так же стабильность в течение всего срока хранения.
Список литературы:
1. Гунар О.В. Различные модификации среды Сабуро для количественного определения грибов, контаминирующих нестерильные лекарственные средства / О.В. Гунар, К.А. Каграманова// Химико-фармацевтический журнал.- 1992.- №6.- С.67-68.
2. Гунар О.В. Особенности контроля качества некоторых лекарственных средств с противогрибковым действием по показателю «Микробиологическая чистота» / О.В. Гунар, Н.И Каламова., Н.С. Евтушенко // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - Т.37. №1. - С.46-48.
3. Каламова, Н.И. Изменение к статье ГФ XI изд. «Методы микробиологического контроля лекарственных средств»/ Н.И. Каламова, К.А. Каграманова, О.В. Гунар // Фарматека.- 1997.- №1.- C.37-38.
4. Одегова, Т.Ф. Методическое руководство. Микробиологический контроль качества лекарственных средств/ Т.Ф. Одегова, О.В. Гунар// Пермь, Изд. ПГФА, 2008. –68с.
5. Arakawa K., Kawai Y., Fujitani K., Nishimura J., Kitazawa H. Bacteriocin production of probiotic Lactobacillus gasseri LA39 isolated from human feces in milk-based media// Animal Science Journal. 2008. - Vol. 79, Issue 5.- P. 634 - 640.
6. Ивахненко Е. Л. Оценка микробиологической чистоты мягкой лекарственной формы с катиазином / Е. Л. Ивахненко, О. П. Стрилец, Л. С. Стрельников, С. П. Кустова // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье» — Курск, 2013. — № 2. – С. 102 – 105.
7. Стрилец О. П. Исследование влияния вспомогательных веществ на технологические свойства новых комбинированных антигипертензивных препаратов в форме таблеток / О. П. Стрилец, Л. С. Стрельников // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – Курск, 2013. — № 2. – С. 125-130.