Схема постановки РТГА для выявления противовирусных антител
| Ингредиенты | Количество ингредиента при разведении диагностикума, мл | Контроль | |||||||
| 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | диагностикума | эритроцитов | |
| Солевой раствор, мл | - | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,4 |
| Исследуемая сыворотка 1:10 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | - |
| Вирусный диагностикум | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | - | - |
| Экспозиция 1 ч при 37˚С | |||||||||
| Взвесь эритроцитов | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 |
| Экспозиция 1 ч при 37˚С | |||||||||
                Учёт |
Примечание: (+) – наличие гемагглютинации, (-) – отсутствие гемагглютинации. Титр противовирусных антител в исследуемой сыворотке 1:160.
Если в исследуемой сыворотке присутствуют антитела к используемому вирусному диагностикуму, то произойдет блокада вирусных гемагглютиногенов антителами сыворотки и агглютинации эритроцитов не произойдет (реакция положительна). При отсутствии в сыворотке специфических противовирусных антител, либо при их низкой концентрации агглютиногены диагностикума блокированными антителами не будут, что вызовет агглютинацию эритроцитов (реакция отрицательна).
При однократном исследовании сыворотки крови больного в РТГА этиологический диагноз по результатам реакции выставляется в случае диагностического титра, или титра, его превышающего. Для каждого вирусного инфекционного заболевания принят свой диагностический титр, то есть наименьший титр антител в сыворотке крови, выявление которого дает право постановки соответствующего этиологического диагноза при однократном серологическом исследовании. Для более точной серологической диагностики вирусных инфекций РТГА проводят в парных сыворотках, одну из которых берут в начале заболевания (при поступлении в стационар), а вторую – через 7-10 дней после первой. Увеличение титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой в 4 раза и более подтверждает этиологический диагноз.
РТГА позволяет дифференцировать противовирусные антитела по классам, в частности, обнаруживать Ig M и G. С этой целью сыворотку крови больного делят на 2 порции, одну из которых обрабатывают химическим реагентом, избирательно разрушающим Ig M (цистеина гидрохлорид), или адсорбирующим Ig G (белок А Staphylococcus aureus штамма Cowan). Постановка РТГА в этом случае не отличается от приведенной выше и заключается в параллельном титровании предварительно обработанной и необработанной порций сыворотки крови больного.
Если в исследуемой сыворотке после ее обработки цистеина гидрохлоридом титр антител снижается пол сравнению с необработанной сывороткой, то это свидетельствует о присутствии антител класса Ig M. Следовательно, больной переносит острую форму вирусного заболевания, поскольку Ig М образуются при первичном иммунном ответе. Напротив, обнаружение в исследуемой сыворотке антител класса Ig G будет свидетельствовать о вторичном иммунном ответе. При этом в зависимости от наличия или отсутствия клинических симптомов болезни присутствие антител класса Ig G может быть расценено как хроническое течение вирусного заболевания, либо как полное выздоровление.
РСК. Наряду с идентификацией вирусов, РСК используется для серологической диагностики вирусных заболеваний. В последнем случае известным компонентом является вирусный диагностикум, посредством которого пытаются выявить специфические антитела в сыворотке крови обследуемого. РСК проводится с парными сыворотками крови. Первую сыворотку разводят 1:4-1:128, вторую – 1:8-1:256. Дальнейшее исследование проводят согласно табл. 4. Проводят также контроль специфической, неспецифической сывороток, а также диагностикума и комплемента.
Таблица 4