Рекомендации по оформлению протокола
Основные анаэробные микроорганизмы, важные для медицинской микробиологии.
Спорообразующие:
Грамположительные бактерии
Clostridium (около 100 видов)
Неспорообразующие:
Грамположительные бактерии:
Actinomyces
Bifidobacterium
Lactobacillus
Propoinobacterium
Грамположительные кокки
Peptococcus
Peptostreptococcus
Sarcina
Грамотрицательные бактерии
и спиральные формы
Anaerovibrio
Prevatella
Anaerobospirillum
Campilobacter
Bacteroides (> 40 видов)
Leptotrichia
Fusobacterium
Porhpyromonas
Treponema
Borellia
Грамотрицательные коки
Veilonella
Характеристика возбудителей анаэробных инфекций
| Возбу-дитель | Морфология | Расположение споры | Под виж ность | Кап- сула | Форма колоний на кровяном агаре | Ферментация | ||||
| Глюкоза | Лак тоза | Саха роза | Разжиже-ние свер-нутой сы-воротки | Изменения молока | ||||||
| Cl. perfringens | Толстая с обрубленными (закругленными) концами палочка | Центральное или субтер-минально | - | + | Круглые, гладкие с зеленоватым гемолизом | + | + | + | - | Быстрое свертывание. Газообразование |
| Cl. novii | Толстая с закругленными концами | Субтерми-нально | + | - | Шершавые гемолитические | + | - | - | - | Медленное свертывание. Газообразование |
| Cl. septicum | Полиморфная тонкая палочка | Субтерми-нально или центрально | + | - | Нежный кружевной рост, гемолиз. | + | + | - | - | Медленное свертывание |
| Cl. histolyticum | Тонкая с закругленными концами палочка | Субтерми-нально | + | - | Мелкие гладкие "росинки" без гемолиза | - | - | - | + | Пептонизация |
| Cl. tetani | Тонкая палочка 4-8 мм | Терминаль-но | + | - | Нежный кружев-ной рост мелки-ми щепотками; гладкие прозрач-ные колонии "росинки" с гемолизом | - | - | - | - | Слабое свертывание |
| Cl. botuli - num | Полиморфная (с закругленными концами) палочка | Субтерми-нально или терминально | + | - | Шершавые се-рые выпуклые в центре с изре-занными краями. Отростки коло-ний двуконтур-ные. Гемолиз. | + | - | - | - | Полная пепто-низация |
Ход исследований при выявлении возбудителя ботулизма.
День исследования
1. Взятие материала от больного :
промывные воды (растирают);
рвотные массы (растирают);
кровь (разводят цитратом натрия 1:3)
2 .Приготовление мазков из опытного материала:
окраска по Граму;
выявление капсул методом Йоне
3. Посев на:
среду Китта-Тароцци;
стерильное лакмусовое молоко;
среду Вильсон-Блера;
среду Врублевського;
желточную среду,
5% кровяной МПА
Культивирование в анаэростате.
4. Выявление ботулинического токсина с помощью биопробы.
Материал от больного экстрагируют в 0,9% р-ре NaСl, фильтруют, центрифугируют. Подготовленный материал разливают по 1 мл в 5 пробирок. В пробирки добавляют по 1 мл протиботулиничних сывороток разных сероваров. Затем проводят заражение пяти лабораторных животных (белых мышей). Вводят по 0,5-1,0 мл каждой смеси внутрибрюшинно или подкожно.
День исследования
1 Учет и описание результатов роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.
2. Приготовление мазков из образовавшихся колоний, окраска по Граму, выявление типичных "теннисных ракеток" со спорами.
3. Посев чистой культуры на среду Врублевського
День исследования
1. Изучение роста микроорганизмов на среде Врублевського.
2. Окраска по методу Грама.
3. Идентификация возбудителя :
по морфологии (подвижность);
в РНГА;
определение биохимической активности (ферментация глюкозы; гидролиз желатина; ферментация липазы; пептонизация молока);
по антигенной структуре в РА на стекле.
4. Учет выявления ботулинического токсина. Если в опытном материале был ботулинический токсин, выживет лишь животное, которому ввели токсин, нейтрализованный соответствующей сывороткой. У остальных животных развивается парез конечностей, поражения внутренних органов.
Ход исследования для выявления возбудителя столбняка.
День исследования
1. Взятие материала от больного:
раневое отделяемое;
кусочки тканей
2. Приготовление мазков из взятого материала:
окраска по Граму;
выявление спор методом Циля-Нильсена
3. Посев:
на среду Китта-Тароцци,
5% кровяной МПА
Культивирование в анаэростате.
4. Биопроба:
Материал от больного экстрагируют в 9% растворе NaCl. С целью идентификации токсина вводят экстрагированный материал экспериментальным животным (белым мышам).
День исследование
1. Учет и описание результатов роста микроорганизмов на питательных средах:
характеристика колоний;
приготовление мазков из колоний и окраска по Граму
посев чистой культуры на среду Врублевського
2. Учет биопробы:
У экспериментальных животных развивается клиническая картина столбняка.
3. Постановка реакции нейтрализации:
Культуру, выращенную на среде Китта-Тароцци центрифугируют. Надосадочную жидкость смешивают с антитоксической противостолбнячной сывороткой (и с NaCl 9% для положительного контроля). Вводят двум белым мышам внутримышечно у корня хвоста.
День исследование
1. Изучение роста микроорганизмов на среде Врублевського
2. Окраска колоний по методу Грама.
3 Учет реакции нейтрализации.
У первого животного в результате нейтрализации токсина антитоксином визуальные проявления отсутствуют. У второго - развивается ригидность хвоста и мышц в месте введения токсина, животное погибает.