Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных Spirillum minus

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, экссудат из очага инфекции, пунктат лимфатических узлов.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.Является ведущим мето­дом диагностики. Возбудителя в нативных препаратах из ис­следуемого материала обнаруживают с помощью темнопольной микроскопии. Бактерии 3—5 мкм длиной и 0,2—0,5 мкм тол­щиной, подвижны, имеют извитую форму (2—6 завитков).

Бактериологическое исследование.Не проводится, поскольку Spirillum minus не удается культивировать in vitro.

Экспресс-методы диагностики.Биохимические и моле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Биопроба.Материал от больного вводят внутрибрюшинно морским свинкам. Через 7—10 дней перитонеальный экссудат и кровь зараженного животного исследуют методом темно­польной микроскопии.

• Микробиологическая диагностика пастереллеза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое кожных язв, гной из абсцессов, кровь, спинномозговая жидкость.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Впрепаратах из исследу­емого материала, окрашенных по методу Грама, обнаруживают короткие (0,3—1,5 мкм длиной и 0,15—0,25 мкм толщиной) грамотрицательные палочки овоидной формы, которые могут окрашиваться биполярно.

Бактериологическое исследование.Pasteurella multocida хоро­шо растут на простых питательных средах, через 24 ч образуют мелкие непигментированные колонии. На кровяном агаре ге­молиз нехарактерен. Чистую культуру возбудителя идентифи­цируют по морфологии микробных клеток, тинкториальным, культуральным и биохимическим признакам.

Экспресс-методы диагностики.Биохимические имоле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить пред­варительный диагноз.

Серодиагностикамало информативна и практически не при­меняется.

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных
Erysipelothrix rhusiopathiae

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты поражен­ных участков кожи, отечная жидкость, кровь при септической форме инфекции.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Впрепаратах из исследу­емого материала, окрашенных по методу Грама, обнаруживают мелкие (0,8—2,5 мкм длиной и 0,2—0,5 мкм толщиной) грам-положительные палочки, располагающиеся поодиночке, вви­де коротких цепочек или образующих длинные неветвящиеся нити.

Бактериологическое исследование.Исследуемый материал за­севают на богатые питательные среды и инкубируют в течение 7 дней в атмосфере с повышенным содержанием С0₂. Бакте­рии образуют колонии двух типов: мелкие гладкие и крупные шероховатые, на кровяном агаре дают а \ -гемолиз. Чистую куль­туру возбудителя идентифицируют по морфологии микробных клеток, тинкториальным, культуральным и биохимическим при­знакам, внутривидовое типирование (серотипирование) осу­ществляют по соматическому антигену клеточной стенки в РА с типоспецифическими антителами.

Экспресс-методы диагностики. Биохимические и моле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый ма­териал используют для обнаружения ДНК возбудителя с помо­щью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика не применяется.

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных Bartonella hensella

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптат из поражен­ного участка кожи, лимфатического узла или органа, кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. В гистологических пре­паратах из очагов поражения, окрашенных по методу Грама, могут быть обнаружены мелкие грамотрицательные палочки, располагающиеся преимущественно внутриклеточно. Метод обладает чрезвычайно низкой чувствительностью в связи с малыми размерами возбудителя. Вероятность обнаружения бактерий повышается при использовании окраски серебрени­ем, позволяющей выявлять объекты малых размеров. Метод имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование. Бартонеллы выделяют из крови пациентов на богатых средах сложного состава (с добав­лением сердечно-мозгового экстракта, крови и других факто­ров роста) или путем заражения клеточных культур (Vero и др.). Культивирование занимает несколько недель, поскольку бар­тонеллы являются прихотливыми медленно растущими бакте­риями. Для идентификации используют серологические (реак­ция ИФ) и молекулярно-биологические методы (ПЦР, метод ДНК-зондов). Бактериологическое исследование при болезни кошачьей царапины применяется сравнительно редко по при­чине трудоемкости.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Антигены возбудителя в био-птатах из очагов поражения могут быть обнаружены методом ИФ.

Молекулярно-биологические исследования. ДНК возбудителя в биоптатах из очагов поражения и крови может быть обнаружена с помощью метода ДНК-зондов и ПЦР.

Серодиагностика недостаточно информативна, поскольку антитела часто присутствуют в крови здоровых лиц. Для обна­ружения специфических IgM в крови больных применяют ме­тод непрямой ИФ: клетки культуры Vero, зараженные тест-штаммом бартонелл, обрабатывают сывороткой крови пациен­та. Специфические IgM выявляют с помощью моноклональных антител (МКАТ) к человеческим IgM, меченных флюорохро-

мом. В положительном случае наблюдается специфическое свечение бактерий в зараженных клетках.

• Микробиологическая диагностика пситтакоза и Q-лихорад-

ки. Изложена ранее (см. тему 14.1).

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Бруцеллезный единый диагностикум. Взвесь убитых бруцелл, окрашенных метиленовым синим, применяется для серодиаг­ностики бруцеллеза в реакции агглютинации Райта и Хеддель-сона.

Туляремийный диагностикум. Взвесь убитых бактерий F.tu-larensis применяется для постановки реакции агглютинации при серодиагностике туляремии.

Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка. Получена из крови лошадей, гипериммунизированных культурой B.anthracis. Применяют для постановки реакции термопреципитации по Асколи.

Чумной бактериофаг. Используется для идентификации Y.pestis.

Сибиреязвенный бактериофаг. Применяют для идентифика­ции B.anthracis.

Бруцеллин. Фильтрат 3-недельных бульонных культур В. те-litensis, В.abortus, B.suis, убитых нагреванием. Применяют для постановки кожно-аллергической пробы Бюрне.

Тулярин. Взвесь F.tularensis (вакцинного штамма), убитых нагреванием, используется для постановки кожно-аллергичес­кой пробы.

Антраксин. Белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, извлеченный при гидролизе B.anthracis, применяется для по­становки кожно-аллергической пробы.

Чумная живая сухая вакцина. Высушенная живая культура Y.pestis вакцинного штамма EV используется для активной спе­цифической профилактики чумы (создание активного имму­нитета).

Туляремийная живая сухая накожная вакцина. Высушенная живая культура вакцинного штамма F.tularensis применяется для активной специфической профилактики туляремии.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вак­цина. Высушенная живая культура вакцинного штамма B.abor-tus применяется для активной специфической профилактики бруцеллеза (создание активного иммунитета).

Бруцеллезная лечебная вакцина. Взвесь убитых нагреванием бруцелл используется с лечебной целью, способствует десен­сибилизации организма.

Сибиреязвенная живая вакцина СТИ. Названа в честь Сани-тарно-технического института, в котором была впервые полу­чена. Представляет собой высушенную взвесь живых спор ави-

Продолжение

Возбуди-	Заболевание	Источник	Перенос-	Способ
тель		инфекции	чик	паразитизма
Coxiella	Q-Лихорадка	Многие виды	Иксодо-	Облигатные
burnetii		диких и до-	вые, гама-	внутрикле-
		машних жи-	зовые, ар-	точные па-
		вотных	гасовые клещи	разиты
Bartonella	Траншейная	Человек (?)	Платяная	Факультати-
quintana	лихорадка		вошь	вные внут­риклеточные паразиты

Тема 17.1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БАКТЕРИАЛЬНЫХ ТРАНСМИССИВНЫХ ИНФЕКЦИЙ

А План

Программа

1. Биологические свойства возбудителей зоонозных ин­фекций, их патогенность, экология, особенность ин­фекций и эпидемиология вызываемых заболеваний.

2. Микробиологическая диагностика.

3. Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

Демонстрация

1. Препарат B.recurrentis из крови больного, окрашенный по методу Романовского—Гимзы.

2. Микропрепараты риккетсий в пораженных клетках и из чистой культуры вакцинного штамма R.prowazekii, окрашенные по методу Здродовского.

3. Методы культивирования риккетсий в куриных эмб­рионах, культурах клеток и путем заражения живот­ных.

4. Риккетсиозные диагностические и профилактические препараты (корпускулярные и растворимые антигены, сыпнотифозная вакцина).

Задание студентам

1. Микроскопировать препараты крови "толстая" капля, окрашенные по методу Романовского—Гимзы, и ма­зок, окрашенный фуксином. Сделать заключение по данным микроскопического исследования.

2. Учесть результаты реакции агглютинации риккетсий с сыворотками крови больных эпидемическим и крыси­ным сыпным тифом по данным, полученным из ла­боратории.

3. Определить титр агглютининов в реакциях с антиге-

нами из R.prowazekii и R,typhi. Сопоставить результаты и обосновать диагноз заболевания. 4. Учесть результаты РСК, поставленных для дифферен­циации первичного эпидемического сыпного тифа и рецидива (болезнь Брилля—Цинссера). Сделать за­ключение по результатам серодиагностики. ▲ Методические указания

• Микробиологическая диагностика возвратного тифа
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.Основной метод лабора­торной диагностики возвратного тифа. У больного во время приступа болезни берут кровь и готовят препараты для микро­скопии. Мазки окрашивают фуксином, а препарат "толстая" капля — по методу Романовского—Гимзы. Borrelia recurrentis представляют собой тонкие изогнутые нити длиной 8—16 мкм с 4—12 завитками (рис. 17.1.1; на вклейке). В мазках они окрашиваются фуксином в красный цвет, в препарате "толс­тая" капля — в фиолетово-розовый. Кроме того, рекомендуется исследовать нативные препараты в темном поле.

Биопроба.Используют для дифференциальной диагностики эпидемического возвратного тифа от клещевого, к возбудите­лям которого чувствительны лабораторные животные. Кровью больных заражают морских свинок. Через 5—6 дней при поло­жительном результате (клещевой возвратный тиф) в крови животных появляется большое количество боррелий.

Серодиагностикаимеет дополнительное значение, для выяв­ления антител применяют РСК, метод непрямой ИФ и другие реакции.

• Микробиологическая диагностика клещевого боррелиоза
Лайма

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты из пора­женных участков кожи, кровь, спинномозговая жидкость; ге­молимфа инфицированного клеща.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.На ранних стадиях забо­левания в биоптатах из пораженных участков кожи возбудитель может быть обнаружен методом серебрения. По морфологии В. burgdorferi не отличается от других представителей рода.

Бактериологическое исследование.В.burgdorferi культивируют на жидких иплотных питательных средах сложного состава (среда Келли идр.). Для идентификации возбудителя исполь­зуют биохимические и молекулярно-генетические методы (гель-

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.Иммуно­химические исследования. Возбудитель может быть обна­ружен в аспирате из высыпных элементов, а также в цитоплаз­ме моноцитов периферической крови методом иммунофлюо-ресценции. Положительные результаты удается получить в 50 % случаев заболевания.

Биохимические и молекулярно-биологичес­кие исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбу­дителя с помощью метода "зондов" и ПЦР. В случае обнару­жения соответствующих молекул можно поставить предвари­тельный диагноз.

Серодиагностика.Является наиболее распространенным и доступным методом лабораторной диагностики риккетсиозов. Для обнаружения антител в крови больного применяют реак­ции агглютинации, РКС и РИГА, непрямой иммунофлюоре-сценции, ИФА и др. (см. схему 17.1.1, тему 10.4).

Реакция агглютинации применяется при серодиагностике всех риккетсиозов и характеризуется высокой специфичнос­тью. В отличие от РСК РИГА не позволяет провести внутри-групповую дифференциацию риккетсиозов. Однако РИГА мо­жет быть использована для определения фазы заболевания, поскольку гемагглютинирующие антитела накапливаются в вы­соком титре в ходе инфекционного процесса, титр их быстро падает в период реконвалесценции, а через 6 мес после выздо­ровления они исчезают. Использование РСК в сочетании с РИГА позволяет дифференцировать текущее заболевание от перенесенного в прошлом (анамнестического).

Серодиагностика позволяет дифференцировать первичный (эпидемический) сыпной тиф от рецидива сыпного тифа (бо­лезни Брилля—Цинссера) на основании особенностей иммун­ного ответа. При первичной инфекции образуются антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М, тогда как при рецидиве антитела представлены преимущественно иммуно­глобулинами класса G. Метод ИФА позволяет избирательно выявлять противомикробные IgM или IgG в сыворотке боль­ных.

• Микробиологическая диагностика эрлихиозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Влейкоцитах периферичес­кой крови больных при окраске по методу Романовского— Гимзы могут быть обнаружены характерные гроздьевидные включения — морулы, напоминающие ягоды ежевики.

Бактериологическое исследование.Эрлихии культивируют путем заражения клеточных культур (первичные культуры мо­ноцитов собак, перевиваемые линии мышиных макрофагов, клетки HeLa, промиелоцитарные опухолевые клетки человека и др.). В зараженных клетках появляются характерные вклю­чения, которые выявляют при окраске по методу Романовско­го—Гимзы. Для идентификации используют иммунохимичес­кие и молекулярно-биологические методы (ПЦР, метод ДНК-зондов). Метод культивирования эрлихий редко применяют с диагностической целью по причине трудоемкости.

Экспресс-методы диагностики.Биохимические и моле­кулярно-биологические исследования. ДНК возбуди­теля может быть обнаружена непосредственно в крови и лей­коцитах больного с помощью метода "зондов" и ПЦР.

Серодиагностика.Антитела к антигенам эрлихий в сыворот­ке крови пациентов могут быть обнаружены с помощью метода непрямой ИФ (диагностический титр 1:40) и других серологи­ческих реакций. Необходимо помнить, что антитела в диагнос­тических титрах могут длительно сохраняться после выздоров­ления, поэтому для подтверждения диагноза применяют метод парных сывороток.

• Микробиологическая диагностика бартонеллезов

(см. тему 16.1 "Микробиологическая диагностика инфек­ций, вызванных Bartonella hensella")

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, биоптаты по­раженных органов, лимфатических узлов.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое, бактериологическое исследование, экс­пресс-методы диагностикисм. тему 16.1 "Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных Bartonella hensella".

Серодиагностика. Антитела к антигенам бартонелл в сыво­ротке крови пациентов могут быть обнаружены с помощью ИФА, метода непрямой ИФ и других серологических реакций. Необходимо помнить, что антитела могут присутствовать в крови практически здоровых лиц, поэтому для подтверждения диагноза применяют метод парных сывороток. Для обнаруже­ния IgM используют метод непрямой ИФ.

• Диагностические, профилактические и лечебные
препараты

Тест-системыдля диагностики возвратного тифа и болезни Лайма методом ДНК-зондов.

Флюоресцирующие антителадля диагностики возвратного тифа и болезни Лайма методом ИФ.