Определение глюкозы в крови
Лабораторная работа
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ ЭНЗИМАТИЧЕСКИМ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.
Принцип метода
При окислении Д-глюкозы кислородом воздуха под действием фермента глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски полученного раствора пропорциональна концентрации глюкозы в пробе.
ХОД РАБОТЫ
| Опытная проба | Калибровочная проба | Холостая проба | |
| Рабочий раствор, мл Сыворотка крови Калибратор,мл Вода дистил. | 2,0 0,04 - - | 2,0 - 0,04 - | 2,0 - - 0,04 |
Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют 15 минут при 370С или в течение 25 минут при 18-250С. Через5-10 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхнуть. После окончания инкубации измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кювете с толщиной поглощаемого слоя 5 мм при длине волны 490-540 нм.
Расчет концентрации глюкозы проводят по формуле:
Ео
С = -------------- х 10, где Ео – оптическая плотность опытной пробы;
Ек Ек – оптическая плотность калибровочной пробы;
10-концентрация глюкозы в калибраторе.
Результат:
Вывод:
1. Количественное определение глюкозы в моче с помощью диагностической тест-полоски «Глюкофан»,«Глюкотест»
Принцип теста: определение основано на специфической энзимотической реакции с использованием ферментов глюкозооксидазы и пероксидазы. Окисление глюкозы кислородом катализируется ферментом глюкозооксидазой. При этом образуется глюкозолактон и пероксид водорода, который в последующей реакции, катализируемой ферментом пероксидазой, окисляет хромогенную систему с образованием интенсивно окрашенных продуктов.
Ход работы:
Тест – полоску погружают в исследуемую мочу и немедленно вынимают. Через 20-30 секунд сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой
Результат:
Вывод:
Метод однократной сахарной нагрузки. Сахарные кривые на занятии разбираются по результатам анализа: у больного, при построении сахарных кривых, наблюдалась следующая динамика уровня сахара (ммоль/л):
| N | исходный уровень | 30 минут | 60 минут | 90 минут | 120 минут | Коэффициенты Рафальского и Бодуэна | При каком заболевании характерно |
| 4,6 | 5,5 | 6,0 | 5,7 | 4,6 | Алиментарная гирегликемия | ||
| 4,5 | 9,0 | 7,7 | 6,3 | 4,5 | Гепатит | ||
| 4,7 | 7,9 | 11,3 | 10,1 | 9,8 | Латентный сахарный диабет | ||
| 6,0 | 9,0 | 12,4 | 12,7 | 12,4 | Сахарный диабет | ||
| 5,2 | 8,0 | 11,0 | 8,0 | 5,2 | Гипертиреоз | ||
| 3,2 | 3,8 | 4,2 | 3,8 | 3,2 | Гликогеноз | ||
| 2,9 | 3,3 | 4,0 | 2,7 | 2,7 | Инсулома |
Построить сахарные кривые и дать оценку в каждом случае.
Обучающие задачи
1.Мальчик спросил, почему при длительном пережевывании хлеба он ощутил во рту сладкий вкус. Объясните эту ситуацию.ответ: при гидролизе крахмала (под действием амилазы слюны ) образуется мальтоза, которая и придает сладковатый привкус
2.Пациент принял "peros" дозу инсулина, в 10 раз превышающую суточную, назначенную врачом для парэнтерального лечения. Изменится при этом содержание глюкозы в крови? Объясните. Ответсодержание глюкозы не изменится, так инсулин в желудочно-кишечном тракте гидролизуется на отдельные аминокислоты, поэтому инсулин всегда вводят парентерально
3.Блюда, приготовленные без соли, невкусные. Имеет ли добавление соли физиологический смысл или только вкусовой? ОтветДобавление соли к пище имеет несколько смыслов, в том числе- активация амилазы, так NaCl является изостерическим активатором, а другой смысл в том ,что при добавлении соли активируются в кишечнике транспортные белки для переноса глюкозы в кровь
4.При заборе крови медсестра не успокоила ребенка, он громко плакал и вырывался из рук. Биохимическое исследование выяснило существенное увеличение сахара в крови. Объясните механизм такого увеличения.
Возможно ли на основании проведенного исследования исключить у ребенка сахарный диабет?Ответадреналин, через образованиецАМФ активирует гликогенфосфорилазу
( подключая каскадный механизм активации) разрушая при этом гликоген до свободной глюкозы, что и приводит к гипергликемии
5.В эксперименте животному произведена перевязка протока поджелудочной железы. Отразиться ли это на переваривании углеводов в желудочно-кишечном тракте? Почему?ОтветВ панкреатическом сокевырабатывается альфа-амилаза, гидролизующая декстрины крахмала и гликогена до мальтозы и изомальтозы,поэтому при перевязке протока поджелудочной железы нарушается переваривание углеводов
6.В детскую клинику поступила больная в возрасте 4 лет с жалобами на приступы с временной потерей сознания, частые носовые кровотечения, отставание в росте.
Из анализа: начиная с 8 месяцев отмечались ежемесячные приступы с временной потерей сознания и судорогами. Приступы начинались до еды или рано утром. С 1 года - частые носовые кровотечения. При внешнем осмотре: маленький рост, большой живот, непропорционально худые конечности, геморрагии на коже, "кукольное" лицо, гепатомегалия.
При лабораторном исследовании: сахар крови 2,9 ммоль/л, гиперлактатацидемия, гипертриглицеридемия, гиперурикемия. Отсутствует гипергликемическая реакция на введение глюкагона и адреналина. Объяснить с биохимической точки зрения наличие данной симптоматики.
Какое заболевание можно предположить? Как подтвердить предположение? Ответу ребенка вероятно отсутствует фермент в печени глюкозо6 фосфатаза, болезнь Гирке, гликоген не распадается, а только синтезируется, при этом печень увеличивается, гликоген в мышцах окисляется до лактата, его содержание увеличивается , наибольшее его количество утилизируется в ГНГ, а он не может происходить, так как этот же фермент обслуживает и распад гликогена и ГНГ, подтверждается предположение введением адреналина, при котором увеличивается в крови не глюкоза, а лактат
7. К эндокринологу обратилась пациентка с жалобами на повышенный аппетит и избыточную массу тела.
При обследовании: рост 160 см, вес 120 кг, повышенное питание.
Биохимические исследования выявили: сахар крови 2,7 ммоль/л.
Оцените содержание сахара в крови и выясните причину гипогликемии.
Ваши рекомендации.Ответможно предположить гиперинсулинизм – налицо анаболические эффекты гормона и гипогликемия
8. Через 30 мин. после съедания 100 г сахара содержание глюкозы в крови у пациента возросло в 1,5 раза, а после употребления 100 г хлеба оно не изменилось. Почему?ОтветСахар является легкопереваримым углеводом, его переваривание происходит только под действием сахаро-изомальтазного комплекса, поэтому быстро увеличивает глюкозу крови, в то время как крахмал хлеба долго переваривается под действием амилазы панкреатической, а затем мальтазы, и поэтому глюкоза в крови не увеличивается