КРАТКИЕ ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ПОЛОЖЕНИЯ. Питательные среды служат для выделения из исследуемого материала чистых культур

Питательные среды служат для выделения из исследуемого материала чистых культур микробов и изучения их свойств. Питательные среды являются основой бактериологических работ, нередко определяя своим качеством результаты исследования.

В состав сред, применяемых для выращивания бактерий, входят необходимые для построения белков цитоплазмы органогены: азоты, углерод, водород, кислород, неорганические соединения, содержащие фосфор, калий, серу, натрий, магний, железо, микроэлементы: кобальт, йод, марганец, бор, цинк, молибден, медь и др. Все перечисленные элементы должны находиться в питательной среде в удобоусвояемом для данного микроорганизма соединении, причем требования различных микробов в этом отношении неодинаковы. Потребность в кислороде и водороде бактерии удовлетворяют главным образом за счет поступающей в клетку воды.

По составу питательные среды могут быть синтетическими и натуральными.

По консистенциипитательные среды могут быть жидкими, полужидкими (0,2-0,7% агара) и плотными (1,5-2% агара). Различают питательные среды общего назначения (универсальные) и специальные питательные среды. Питательные среды общего назначения пригодны для выращивания многих видов микроорганизмов и применения в качестве основы для приготовления специальных питательных сред. Специальные питательные среды предназначены для избирательного культивирования определенных видов микроорганизмов, изучения их свойств и хранения.

Требования, предъявляемые к питательным средам. Питательные среды должны: 1. Содержать необходимые для питания микроба питательные вещества.

1. Иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроба.

2. Иметь достаточную влажность, так как микробы питаются по законам диффузии и осмоса.

3. Обладать изотоничностью.

4. Быть стерильными, обеспечивая тем самым возможность выращивания чистых культур микробов.

Методы посевов. В зависимости от цели исследования, характера посевного материала и среды используют различные методы посева. Все они включают обязательную цель: оградить посев от посторонних микробов, поэтому посев производят в асептических условиях.

Для посевов на плотные питательные среды применяют шпатель, бактериологическую петлю, иглу, тампон. При посеве проводят петлей по поверхности среды линии, оставляя при этом клетки бактерий на среде. После посева чашки закрывают и переворачивают их вверх дном. Надписи на чашках делают со стороны дна, а на пробирках - в верхней части.

Изучение культуральных свойств выросших в чашках колоний

Рассматривая выросшие колонии в проходящем свете невооруженным глазом (макроскопически) и с помощью лупы описывают следующее:

1. Форму колоний

Формы колоний, которые могут вырастать на плотной среде в чашках Петри, изображены на рис.

Рис. Форма колоний: а – круглая; б – круглая с фестончатым краем;

в – круглая с валиком по краю; г; д – ризоидная; е – с ризоидным краем;

ж –амебовидная; з – нитевидная; и – складчатая; к – неправильная;

л – концентрическая; м – сложная

Форма колоний может быть круглой, неправильной, корневидной, эллипсовидной и т.д.

2. Размеры колоний

Колонии, имеющие диаметр более 4 мм являются крупными, от 2 до 4мм – средними, от 1 до 2 м – мелкими, менее 1мм - точечными или росинчатыми.

3. Цвет колоний

Микроорганизмы, содержащие пигменты могут быть желтого, оранжевого, розового, кремового и др. цветов. Большинство микроорганизмов не содержат пигментов и растут на плотных средах в виде серовато-матовых колоний. Такие колонии называют бесцветными.

4. Рельеф (профиль) колоний

Рельеф или профиль колоний может быть плоским, выпуклым, куполообразным, смешанным - плоским с выпуклым центром, кратерообразным и др. (рис. 10).

Рис. Профиль колоний: а – изогнутый; б – кратерообразный;

в – бугристый; г – врастающий в агар; д – плоский; е –выпуклый;

ж – каплевидный; з – конусовидный

5. Поверхность колоний

Поверхность колоний может быть гладкой, блестящей, шероховатой, морщинистой, извилистой и т.д.

6. Характер края колоний

Разновидности края колоний изображены на рис. 11.

Рис. Край колоний: а - гладкий; б – волнистый; в – зубчатый;

г – лопастный; д – неправильный; е – реснитчатый;

ж – нитчатый; з – ворсинчатый; и – ветвистый

Край может быть ровным (гладким); волнистым; локонообразным (нитчатым); лопастным; бахромчатым; зазубренным; корневидным (ветвистым) и др.

7. Прозрачность колоний

Колонии бывают прозрачные, полупрозрачные и непрозрачные.

8. Структуру колоний

Структура колоний бывает однородная (гомогенная) и неоднородная (гетерогенная). Неоднородные колонии могут быть мелко- и крупнозернистыми, радиально или концентрически исчерченными, чешуйчатыми и др.

9. Консистенцию колоний

Определяется при приготовлении препаратов для микроскопического анализа.

10. Изучение морфологических свойств микроорганизмов

Готовят фиксированные препараты бактерий по методике, изложенной в разделе 2, и окрашивают их по методу Грама. Рассматривают препараты с объективом х90 при максимальном освещении.

Отбор пищевых продуктов для микробиологического исследования. Пищевые продукты, содержащие большое количество питательных веществ, являются благоприятной средой для существования и размножения микробов. Микрофлора, которая встречается в пищевых продуктах, может быть специфической и неспецифической. Специфическая микрофлора состоит из тех микроорганизмов, которые обусловливают вкусовые и питательные свойства продуктов, например молочнокислые бактерии в кисломолочных продуктах и квашеных овощах. Неспецифическая микрофлора представлена случайно попавшими в пищевые продукты микробами из внешней среды. Некоторые из них не оказывают влияния на пищевые продукты, другие делают их непригодными для употребления и даже вредными, например, картофельная палочка, вызывающая «тягучую болезнь хлеба», бактерии, являющиеся причиной ослизнення напитков, и др. Санитарно-показательные и патогенные микроорганизмы также относят к неспецифической микрофлоре.

Попадание в пищевые продукты патогенных микробов, например, стафилококков, возбудителя ботулизма, сальмонелл, приводит к возникновению у человека пищевых отравлений. Пищевые продукты могут быть факторами передачи кишечных инфекций: брюшного тифа и паратифов, дизентерии, холеры, а также бруцеллеза, туляремии, Ку-лихорадки, туберкулеза и др.

Санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов производят в плановом порядке с целью определения соответствия продукта требованиям ГОСТ, временным техническим условиям, и другим установленным кондициям, а также по эпидемиологическим показаниям: при пищевых отравлениях, обнаружении недоброкачественности продукта.

При плановых исследованиях пищевых продуктов определяют общее количество бактерий и степень обсеменения санитарно-показательными бактериями (БГКП). Исследование по эпидемиологическим показаниям преследует цель установления возможных возбудителей пищевых токсикоинфекций.

Отбор проб пищевых продуктов для санитарно-бактериологического исследования проводится в соответствии с существующими ГОСТ. Молоко и молочные продукты из тары большой емкости отбирают в количестве не менее 0,25 л в стерильные колбы. Продукты в мелкой упаковке берут целиком. Пробы сливочного масла и сыров отбирают при помощи стерильного щупа из глубины продукта. Яйца берут целиком 2 штуки из партии, яичный порошок—50 г в стерильные колбы. Мясо и мясные продукты отбирают из толщи продукта при помощи стерильного ножа или скальпеля в количестве не менее 200 г. Тушки птицы берут целиком, колбасу — целым батоном или куском, вырезанным стерильным ножом. Пробы крупной рыбы отбирают вместе с головой и частью брюшной полости. Мелкую рыбу берут целиком. Отобранные пробы мяса и рыбы упаковывают в стерильный пергамент, а затем в оберточную бумагу. Мясные и рыбные полуфабрикаты берут в количестве 1 — 2 штук в стерильные банки. Холодные закуски, первые и вторые горячие блюда, пробы кондитерских изделий с кремом отбирают по 1 порции в стерильную посуду. Отобранные пробы пломбируют и по возможности быстрее доставляют в лабораторию. Из отобранных проб в лаборатории берут навеску в 25—30 г. Навеску из плотных продуктов измельчают с небольшим количеством 0,1% пептонной воды или изотонического раствора хлорида натрия в гомогенизаторе или растирают со стерильным кварцевым песком в стерильной ступке. Полученную взвесь отстаивают и надосадочную жидкость используют для дальнейших исследований. Жидкие и полужидкие продукты тщательно размешивают. Продукты с резко кислой реакцией подщелачивают 10% раствором гидрокарбоната натрия до нейтральной реакции (рН — 7,0— 7,2), Сливочное масло, кремы, мороженое и подобные им продукты расплавляют при температуре 40—43°С. Из подготовленных образцов продуктов готовят ряд последовательных 10-кратных разведений, которые используют для дальнейших исследований.