Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Устройство камеры и сетки Горяева. Камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, прорезанное четырьмя поперечными бороздами. Борозды делят стекло на пластинки — две боковые и среднюю. Средняя пластинка на 0,1 мм ниже боковых. Она разделена поперечной бороздкой на 2 равные части. На каждой половине средней пластинки нанесена сетка Горяева. Принадлежностью' камеры служит шлифованное покровное стекло. Его следует наложить так, чтобы оно покрыло обе боковые и среднюю пластинки. Нажимая большими пальцами на края стекла, его притирают к боковым пластинкам до появления радужных колец (кольца Ньютона).

Так как боковые пластинки выше средней, между нею и покровным стеклом остается щель. Это и есть камера, в которую заливают разведенную кровь. Глубина камеры 0,1 мм.

Нанесенная на дно камеры сетка Горяева квадратная. Сторона ее — 3 мм, площадь-—9 мм^». Сетка разграфлена на 225 больших квадратов—15 по горизонтали и 15 по вертикали. Часть больших квадратов (через два на третий) разделена на 16 малых квадратов. Сторона малого квадра­та равна 1/20 мм .

Техника подсчета. Правильное заполнение счетной камеры разведенной кровью обеспечивает точность под­счета форменных элементов. Перед заполнением камеры содержимое пробирки перемешивают, вращая ее между ладонями в течение 2 мин. Разведенную кровь наносят на среднюю пластинку камеры пастеровской пипеткой с баллоном или стеклянной палочкой, помещая ее около края покровного стекла. По закону капиллярности жид­кость затекает под стекло, заполняя камеру.

После заполнения камеру нужно положить на стол на 2—3 мин, пока движение жидкости в ней не прекратится, и клетки не расположатся неподвижно на фоне квадратов сетки. При заполнении камеры жидкость не должна стекать в борозды. Недопустимо попадание в камеру пузырьков воздуха.

Подсчет производят под малым" увеличением микро­скопа (об.8, ок.10 или 15), конденсор должен быть опущен, а диафрагма закрыта.

Возможные ошибки при подсчете:

Правила:

-к данному квадрату принадле­жат клетки, находящиеся большей своей половиной внут­ри него;

- клетки, разделенные пограничной линией попо­лам, считают только на верхней и левой границе квадрата;

- клетки же, лежащие большей своей половиной вне данно­го квадрата не считают вовсе.

Принцип. Подсчет эритроци­тов под микроскопом в определенном количе­стве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови, исходя из объема квадратов и разведе­ния крови.

Реактивы. 0,9 % раствор хлорида натрия

Специальное оборудование. 1. Счетная камера Горяева. 2. Микроскоп.

Ход исследования. Разводят иссле­дуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую про­бирку отмеривают 4 мл реактива 1 или 2. Пипет­кой набирают 0,02 мл крови. Кончик пипетки вы­тирают фильтровальной бумагой или марлей, и кровь выдувают на дно пробирки; пипетку тща­тельно промывают в верхнем слое жидкости, повторно набирая ее и выдувая в пробирку, содержимое пробирки перемешивают и остав­ляют стоять до момента счета (рекомендуется считать эритроциты в ближайшие 2—3 ч после взятия крови, а при гемолитических и. В 12-дефи­цитных анемиях — сразу после взятия, так как эритроциты могут разрушиться). Недопустимо оставлять взятую кровь с несосчитанными эри­троцитами на следующий день, так как эритро­циты частично разрушаются.

Подготавливают счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и покровное стекло, за­тем покровное стекло притирают к камере, слегка надавливая на стекло таким образом, чтобы по краям его появились радужные полосы (это сви­детельствует о требуемой высоте камеры — 0,1 мм).

Заполняют счетную камеру разведенной кровью: предварительно несколько раз тщатель­но встряхивают содержимое пробирки, затем пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы она равномерно без пузырьков воздуха запол­нила всю поверхность камеры с сеткой, не зате­кая в бороздки. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении 1 мин (ДЛЯ ОСЕДАНИЯ эритроцитов).

Для подсчета эритроцитов - микроскоп (объектив на 8х, окуляр на 10Х), находят верхний левый край сетки. Счет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т. е. в 80 малых квадратах.

Расчет количества эритроцитов:

производится по следующей формуле:

Х= а ■ 4000 ■ в

б

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови;

а — количество формен­ных элементов, сосчитанных в 80 малых квадратов;

б— количество сосчитанных малых квадратов;

в — степень разведения крови; 1\4000 мкл — объем малого квадрата; умножая на 4000, приводим к объему 1 мкл крови.

Сокращенная формула: Х= а х10000

Нормативные показатели:

У мужчин: 4,0-5,0 х 10 12

У женщин: 3,7-4,7 х 10 12

Клинико-диагностическое значение: Снижение числа эритроцитов в крови является одним из ос­новных лабораторных критериев анемии. Однако степень эритроцитопении широко варьирует при разных формах малокровия. Так, при наиболее распространенном заболевании — железодефицитной анемии на почве хронических кровопотерь — количество эритроцитов может быть нор­мальным или нерезко сниженным (3• 10⁶ — 3,6-10⁶ в 1 мкл, или 3-10'²/л — 3,6-10^|2/л). При острой кровопотере, В|2-дефицитной анемии (в стадии рецидива), гипопластической анемии, гемолитических анемиях (в период криза) число эритроцитов в крови может значительно сни­зиться и достигнуть I -10⁶ в 1 мкл, или 1 • 10^|2/л и менее.

Повышение количества эритроцитов в кро­ви — эритроцитоз — может быть обусловлен многими причинами. Значительный эритроцитоз (6,5-10⁶—8,5-10^е в 1 мкл, или 6,5-10^|2/л — 8,5-10^|2/л крови) является одним из важных лабораторных симптомов эритремии. Другие гемобластозы миелопролиферативной природы (сублейкемический миелоз или миелофиброз и хронический миелолейкоз) реже сопровождают­ся эритроцитозом и только в начальной стадии заболевания.

Вторичный(симптоматический) эритроцитоз может сопутствовать широкому кругу различ­ных заболеваний и бывает абсолютным (связан­ный с усилением нормального эритропоэза) и от­носительным (гемоконцентрационный). Абсо­лютные эритроцитозы сопутствуют хроническим обструктивным заболеваниям легких, врожден­ным порокам сердца, первичной легочной гипертензии, синдрому Пиквика, наследственным гемоглобинопатиям, гипернефроидному раку, гемангиобластоме мозжечка, гепатоме, гормо­нально-активным опухолям, заболеваниям, со­провождающимся стенозом почечных артерий, заболеваниям ЦНС и др. Вторичные относитель­ные эритроцитозы связаны с нарушением гемо-концентрации и характеризуются нормальным объемом циркулирующих эритроцитов при сни­жении массы циркулирующей крови и массы циркулирующей плазме.

Патологические формы эритроцитов

Повышение числа эритроцитов — полицитемия, мо­жет быть истинной (опухолево-пролиферативный процесс) и симптоматической (реактивное раздражение эритропоэза, сгущение крови, нарушение нервной регуляции и пе­рераспределения). Понижение числа эритроцитов — ане­мия (постгеморрагическая, гемолитическая, вследствие нарушения кроветворения).

Качественные изменения эритроцитов. Анизоцитоз — изменение величины эритроцитов (эритроциты меньших размеров называются микроцитами; больших — макроцитами, эритроциты диаметром 12 мкм и более называются мегалоцитами). Пойкилоцитоз — изменение формы эритроцитов (грушевидные, серповидные — дрепаноциты, каплевидные, мишеневидные, с вытянутыми концами, шизоциты — обломки разрушенных эритроци­тов, акантоциты — эритроциты зубчатой формы, стоматоциты — эритроциты с просветлением в центре в виде узкой линейной полоски как форма рта, эхиноциты — эритроциты с множественными выростами, анулоциты — эритроциты в виде пустых колец). Анизохромия — из­менение интенсивности окраски эритроцитов в патологи­ческих случаях. Встречаются бледно окрашенные эрит­роциты — гипохромия, интенсивно окрашенные — гиперхромия. Эритроциты могут окрашиваться не только кислыми, но и основными красителями — полихромазия.

Обнаруживаются при патологии в периферической кро­ви ядросодержащие эритроциты: нормобласты, эритро­бласты и мегалобласты. Мегалоциты и мегалобласты ха­рактерны для анемии Аддисона-Бирмера.

В эритроцитах можно иногда обнаружить остатки ядерной оболочки — так называемые кольца Кебота и ядерные остат­ки — тельца Жолли при мегалобластных анемиях, отравле­нии гемолитическими ядами и др. При свинцовом отравлении и у людей, принимающих препа­раты крови, наблюдается базофильная пунктуация эритроци­тов (наличие точечной зернисто­сти). Сидероциты — эритроциты с включениями не гемоглобинового железа (ферритин, гемосидерин) в виде мелких гранул синего цвета.

2.5 Подсчет лейкоцитов