Химико-токсикологический анализ на угарный газ

Острые отравления окисью углерода остают­ся частыми явлениями, они занимают второе место после от­равлений спиртами, при этом в 50% случаев наблюдается смер­тельный исход.

Условно интоксикации окисью углерода подразделяют на производственные и бытовые. Однако существенно преобладают бытовые. В быту интоксикации окисью углерода происходят по нескольким причинам: стихийные бедствия, несчастные случаи, суицид.

Токсичность окиси углерода заключается в образовании НЬСО. Закреп­ление на геме СО сопровождается «блокированием» гемоглобина, который более не может переносить кислород. Это обусловливает понижение концен­трации кислорода в крови (гипоксемию) сопровождающуюся понижением окисления в тканях и клетках (гипоксией). Тканевая недостаточность кисло­рода обуславливается поражением нервных клеток и сердечной мышцы. Наи­более чувствительными к недостатку кислорода являются нервные клетки. Окись углерода блокирует также гем других белков, способных всту­пать в обратимую комбинацию с кислородом (тканевые белки, белки крови).

Последствием внутриклеточного закрепления угарного газа является «блоки­рование» дыхательной цепи, что ведет к кислородной недостаточности клеток со всеми метаболическими осложнениями. Окись углерода проникает через плацентарный барьер.

Раздел 1. Качественный анализ на угарный газ

Химический метод.

1. Реакция с 33% раствором едкого натра (проба Гоппе-Зейлера)

К пробам контрольной и исследуемой крови (1:100) прибавляют равный объем 33% раствора едкого натра. Кровь с НЬСО сохраняет окраску, кон­трольная меняет свой цвет на бурый за счет образования щелочного гематина. Однако гнилостно измененная кровь под влиянием щелочи может приобре­тать ярко-красную окраску за счет образования гемохромогена.

2. Реакция с формалином (проба Либмана)

К капле контрольной и исследуемой крови (1:100) на предметном стекле прибавляют 1 каплю формалина. Контрольная кровь приобретает коричнево-чёрную окраску за счет образования формали­нового пигмента, исследуемая сохраняет свой цвет.

3. Реакция с сульфатом меди (проба Залесского)

1 мл крови разводят водой до 100 мл, хорошо перемешивают. К 5 мл полученной крови прибавляют 10% раствор сульфата меди. Контрольная проба приобретает зелёный цвет, исследуемая − сохраняет пурпурно-красный.

4. Реакция с гексацианоферратом калия (проба Бюркера)

К капле контрольной и исследуемой крови (1:100) на предметном стекле прибавляют 1 каплю 1% гексацианоферрата (III) калия. Контрольная кровь изменяет свою окраску до жёлтой, исследуемая кровь остаётся красной.

Разновидностью данной реакции являются пробы Сидорова (с ферроцианидом калия и дихроматом калия; при этом контрольная кровь приобретает зелёную окраску, а исследуемая─ карминово-красную) и Ветцеля (с ферроцианидом калия и уксусной кислотой; в контрольной крови выпадает серо-коричневый осадок, в исследуемой─вишнево-красный).

5. Реакция с танином (проба Кунцеля-Ветцеля)

К растворам крови (1:4) добавляют равный объём танина и взбалтывают. Исследуемая кровь сохраняет розовую окраску, контрольная кровь буреет.

6. Реакция с сульфидом аммония (проба Сальковского – Катаяма)

К 10 мл дистиллированной воды прибавляют 5 капель крови и 5 капель свежеприготовленного раствора сульфида аммония. Смесь осторожно взбалтывают с 30% раствором уксусной кислоты. Исследуемая кровь приобретает малиново-красную окраску, контрольная ─ серо-зелёную.

Разновидностью реакции является проба Хорошкевича–Маркса с 8% раствором гидрохлорида хинина и сульфидом аммония. Контрольная кровь приобретает грязную красно-бурую окраску, исследуемая кровь ─ розовую.

Метод микродиффузии.

Во внешнюю камеру чашки Конвея вносят 1 мл крови и 1 мл 10% раствора серной кислоты. Во внутреннюю камеру помещают 2 мл 0,1% раствора хлорида палладия в 0,1н растворе соляной кислоты. Прибор плотно закрывают крышкой и оставляют на 1 час при комнатной температуре. При наличии СО в крови во внутренней камере появляется серебристая плёнка металлического палладия.

PdCI₃+ CO+ H₂O→Pd+CO₂ + 2 HCI

Спектроскопический метод

После разбавления крови дистиллированной водой до светло-розовой окраски её исследуют в спектроскопе. При рассмотрении крови наблюдаются линии и полосы поглощения между линиями Фраунгофера Д и E. Спектр оксигемоглобина имеет две полосы поглощения при длинах волн 577-589 и 536-556 нм, спектр карбоксигемоглобина ─две полосы при 564-579 и 523-536 нм.

После прибавления одного объёма свежеприготовленного раствора сульфида аммония или дитионита натрия к 4 объёмам водного раствора исследуемой крови оксигемоглобин превращается в дезоксигемоглобин, который имеет одну широкую полосу поглощения при 543-596 нм. Карбоксигемоглобин не восстанавливается сульфидом аммония и другими восстановителями. Поэтому после прибавления восстановителей полосы поглощения карбоксигемоглобина не исчезают. Таким образом, после прибавления сульфида аммония к крови, содержащей окси- и карбоксигемоглобин, сохраняются две полосы поглощения карбоксигемоглобина, но исчезают полосы оксигемоглобина, а вместо них появляется широкая полоса поглощения дезоксигемоглобина. По наличию соответствующих полос поглощения делают вывод об отравлении оксидом углерода (II).

Спектральный метод оправдывает себя при исследовании крови, содержащей 10-30% карбоксигемоглобина.