Иммуноферментный анализ для серо- и ликвородиагностики сифилиса

Принцип:- аг Т. pallidum сенсибилизируются к поверхности твердофазового носителя (лунки панелей). Добавляется исследуемая сыворотка. При наличии антител против Т. pallidum образуется комплекс антиген- антитело, связанный с поверхностью носителя. На следующем этапе в лунки наливают антивидовую сыворотку (против иммуноглобулинов человека), меченую ферментом (пероксидазой или щелочной фосфатазой). Меченые анти-тела взаимодействуют с комплексом антиген-антитело, образуя новый комплекс. Для его выявления в лунки наливают раствор субстрата (5- аминосалициовая кислота). Под действием фермента субстрат меняет цвет, что указывает на положительный результат.

Оптимальным в случае использования ИФА считается одновременное применение трех его вариантов:

- выявление суммарных AT (CAT)

- последующее дифференцированное определение трепонемоспецифическихIgM и IgG.

Появление противосифилитических антител происходит в соответствии с общими закономерностями иммунного ответа. Вначале появляются IgM на 2- 4 неделе после заражения и исчезают у нелеченных больных примерно через 18 месяцев; при лечении раннего сифилиса через 3-6 месяцев; позднего - через год. По мере развития болезни начинает преобладать синтез IgG, которые появляются на 4 неделе после заражения, достигают более высоких титров и длительно сохраняются даже после клинического излечения.

Источники возникновения ошибок при использовании ИФА-тест- систем:

- нарушения техники взятия крови, условий транспортировки и хранения тест-систем и проб.

- некачественная работа лаборантов,

- любые отклонения от инструкции по применению тест-системы,

- неисправность инструментов и приборов,

Реакция иммунофлюоресценции для специфической серо- и ликвородиагностикисифилиса

Принцип: специфический комплекс антиген-антитело + иммунная анти- видовая сыворотка, меченная флюорохромом, и выявление с помощью люминесцентного микроскопа.

В качестве антигена используют взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса из 7-суточного орхита кролика. Здоровых кроликов - самцов заражают интратестикулярно и при возникновении орхита извлекают из яичек Т. pallidum.

С одним и тем же антигеном реакция может ставиться в течение 2-4 месяцев.

В настоящее время применяется РИФ-абс, РИФ-200 (испытуемые сыворотки крови разводят в 200 раз фосфатным буфером).

В связи с возможностью получения отрицательных результатов при наличии флюоресцирующих антител не следует исследовать кровь и сыворотку крови в РИФ-абс и РИФ-200 во время лечения больных пенициллином.

Ложноположительные результаты отмечали у беременных, алкоголиков, больных ревматоидным артритом, системной и дискоидной красной волчанкой, склеродермией, циррозом печени.

РПГА. Принцип: сыворотка крови, содержащая специфические антитела + эритроциты, сенсибилизированные соответствующим антигеном = характерная агглютинация.

Общее мнение исследователей заключается в том, что РПГА является ценным диагностическим тестом при всех формах сифилиса, но особенно чувствительна она при поздних формах заболевания. Реакция становится положительной на 3 неделе после заражения и остается таковой спустя много лет после выздоровления.

Результаты РПГА учитывают через 1,5-2 ч при микрометоде или на следующий день при макрометоде. Неподвижно стоящие пластины даже при высыхании их содержимого сохраняют полученную картину:

"4+" - положительная РПГА. Эритроциты равномерно выстилают всю поверхность лунки (в виде зонтика).

"3+" - положительная РПГА. Эритроциты выстилают всю поверхность лунки, но часть их соскальзывает к центру.

"2+" - слабоположительная РПГА. Эритроциты образуют пленку на небольшом участке нижней части лунки.

"1+" - отрицательный результат РПГА. На дне лунки эритроциты образуют рыхлый осадок.

- отрицательная РПГА. Эритроциты ровным плотным "колечком" или "пуговкой" лежат на самом дне лунки (без окружающего зернистого осаждения).

Ложноположительные результаты могут быть получены при исследовании сывороток крови пациентов с невенерическими трепонематозами, за счет ревматоидного фактора и перекрестно реагирующих с трепонемным антигеном антител, образующихся при различных системных или индуцированных лекарствами и наркотиками нарушениях обмена, из-за аномального уровня иммуноглобулинов;у новорожденных детей - за счет образования в организме плода или ребенка IgM-антител к IgG матери, что осложняет трактовку результатов и диагностику врожденного сифилиса.

Ложноотрицательные результаты реакции могут быть обусловлены конкуренцией между IgM- и IgG-антителами.

22. Принципы ЛЕЧЕНИЯ СИФИЛИСА

В настоящее время считается, что сифилис полностью излечим, если лечение начато в ранней стадии заболевания. При поздно начатой терапии в большинстве случаев наблюдается клиническое выздоровление или стабили­зация процесса.

Принципы терапии:

1. Лечение необходимо назначить как можно раньше (лучше прогноз).

2. Терапия должна быть максимально индивидуальной с учетом возраста, физического состояния больного, стадии и формы сифилиса, наличия сопут­ствующих заболеваний, переносимости препаратов.

3. Лечение должно быть комбинированным. Специфическую терапию необ­ходимо сочетать с неспецифической стимулирующей терапией.

4. Во время лечения необходим контроль за общим состоянием больного, пе­реносимостью применяемых препаратов.

Стационарное лечение больных сифилисом осуществляется в внерологических отделениях специализированных больниц, либо в спе­циализированных отделениях при инфекционных больницах.

Обязательной госпитализации подлежат:

- дети,

- социально неадаптированные подростки,

- беременные, больные сифилисом.

Госпитализация показана также в случаях непереносимости пациен­том препаратов пенициллинового ряда, при наличии соматической отя-гощенности, осложненного течения сифилиса, поздних форм заболева­ния, а также пациентам старше 60 лет.

Для лечения используют препараты пенициллинового ряда (бенза- тин бензилпенициллин, бициллин, прокаинбензилпенициллин). При их непереносимости применяют альтернативные препараты.

Особенности лечения у беременных Лечение проводится в два этапа:

1 этап. Специфическое лечение. Проводится на любом сроке бере­менности одним из препаратов прокаин-бензилпенициллин, новокаиновая соль пенициллина, бензилпенициллина натриевая соль (водорастворимый пенициллин).

2 этап. Профилактическое лечение. Проводится, начиная с 20-й не­дели беременности, но при поздно начатом специфическом лечении - непо­средственно вслед за ним одним из препаратов: прокаин-пенициллин, но­вокаиновая соль пенициллина, натриевая соль бензилпенициллина в суточ­ных и разовых дозах; в качестве альтернативных препаратов используют - ампициллин, цефтриаксон в рекомендованных дозах.

Особенности лечения у детей

Лечение проводится по схемам лечения взрослых, исходя из возрас­тных дозировок антибиотиков. Расчет препаратов пенициллина проводится в соответствии с массой тела ребенка.