Микробиологическая диагностика спирохетозов

Заболевание	Вид исследования	Материал для исследования	Сроки проведения исследования
Вшивый возвратный тиф (эпидемический)	Микроскопия 1. Препарат раздавленной капли в темном поле. 2. Просмотр мазков и толстой капли, окрашенных фуксином, микроскопия препаратов по Бурри. Серологическое исследование Реакция Брусина-Риккенберга (основана на феномене фиксации тромбоцитов на поверхности м/о в присутствии иммунной сыворотки и комплемента).	Кровь     Кровь     Сыворотка больного	Во время лихорадочного периода То же     Со 2-3-й недели
Клещевой возвратный тиф (эндемический)	Микроскопия 1. Препарат раздавленной капли в темном поле. 2. Просмотр мазков и толстой капли, окрашенных фуксином. Биопроба Заражение морских свинок	Кровь     Кровь     Кровь	На протяжении болезни   То же     То же
Сифилис	Микроскопия 1. Препарат раздавленной капли в темном поле.     2. Просмотр препаратов по Бурри или мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Серологическое исследование 1. Реакция Вассермана   2. Осадочные реакции (Кана и Закса-Витебского). 3. Реакция иммобилизации трепонем (тест Нельсона-Мейера)	Тканевая жидкость твердого шанкра   То же   Сыворотка больного, СМЖ     Сыворотка больного, СМЖ   То же	С начала заболевания     То же   У детей при подозрении на врожденный сифилис. Через 2-3 мес. после рождения. С 5-6-й недели заболевания В четвертом периоде заболевания
Лептоспиры	Микроскопия 1. Просмотр раздавленной капли в темном поле или мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Бактериологическое исследование Посев на среду Уленгута Серологическое исследование 1. Реакция микроагглютинации (лизиса) с живыми культурами лептоспир. 2. РСК Биопроба Внутрибрюшинное заражение морской свинки (только при желтушном лептоспирозе).	Кровь   Кровь, моча   Сыворотка больного   То же     Кровь	С начала заболевания     Со 2-3-й недели заболевания     С 6-7-го дня заболевания   То же     С начала заболевания

Диагностика лептоспироза

Исследование проводят в лаборатории особо опасных инфекционных болезней. Диагноз лептоспироза подтверждают следующими методами:

♦ бактериоскопический (экспресс-метод). В первые дни больным проводят микроскопию крови в темном поле, а с 6-7-го дня и микроскопию мочи.

♦ серологический (основной метод). Очень чувствительная реакция микроагглютинации (РМА) с парными сыворотками крови, взятыми на 1-й неделе болезни и через 7-10 дней.

Диагностическое значение имеет нарастание титра антител к лептоспирам в 4 раза и более. Иногда антитела появляются даже через 1 месяц и позже. Для РМА берут 3-4 мл крови из вены. Весьма перспективны иммуноферментный и радиоиммунный методы;

♦ с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) можно обнаружить лептоспиры с первых дней болезни, даже если их количество ничтожно;

♦ бактериологический (дополнительный метод). Высевают кровь, мочу, спинномозговую жидкость на специальные среды (Уленгута, Терских и другие). Однако лептоспиры растут долго – в течение 30 суток, а частота выделения их невелика;

♦ биологический (дополнительный метод). Гвинейским свинкам или молодым золотистым хомякам вводят внутрибрюшинно или наносят на скарифицированную рану кровь больного, мочу или ликвор, при наличии лептоспир заболевание развивается примерно через неделю (желтуха, кровотечение).

Наиболее распространенный метод исследования – реакция микроагглютинации-лизиса с живыми антигенами. Может быть использована РСК, а также реакция макроагглютинации с убитым антигеном. Агглютинины, лизины и комплементсвязывающие антитела появляются в крови на 3-5-й день болезни и максимально накапливаются на 8-10-й день, титр сыворотки в этих случаях равен1:10000-1:50000.

Положительным диагностическим титром считается реакция в разведении 1:400.

Для получения чистых культур лептоспир рекомендуется использовать питательную среду С.Я. Любашенко или В.И. Тверских. Кровь и ликвор следует брать в ранней стадии болезни, при высокой температуре, мочу - в поздней стадии. Посевы из органов нужно делать не позднее чем через 2-3 ч после гибели собаки. Получить чистую культуру из органов очень трудно, поэтому часто прибегают к биопробе: заражают крольчат массой 350-400 г, золотистых хомяков или морских свинок массой 150-180 г. Микроскопией (в темном поле) мочи в поздней стадии болезни можно также обнаружить лептоспир.

Диагностика Лайм-боррелиоза

Ранняя диагностика основывается на клинико-эпидемиологических данных. При классической картине мигрирующей эритемы диагноз ставится по клиническим признакам, диагноз регистрируют даже при отсутствии лабораторного подтверждения и данных об укусе клеща. В остальных случаях диагноз подтверждают лабораторными методами. Посев, выявление антигена возбудителя и гистологическое исследование кожи недостаточно чувствительны и специфичны, гистологическое исследование, кроме того,инвазивно. Поэтому диагноз подтверждают, в основном, серологическими методами - выявлением в крови специфических антител к возбудителю. ПЦР-тестирование на наличие генетического материала возбудителя в данном случае малоэффективно.

Антитела к Borreliaburgdorferi класса IgM выявляются через 1 - 3 недели после инфицирования. Максимальное количество IgG-антител синтезируется через 1,5 - 3 месяца после инфицирования. Антитела класса IgG часто не выявляются на ранней, локализованной стадии заболевания или при рано назначенной антимикробной терапии. Антитела класса IgG циркулируют в крови длительный срок (от нескольких месяцев до нескольких лет), даже после успешной антимикробной терапии и излечения инфекции. Иммунитет против боррелий не является стерильным. У переболевших людей возможно повторное заражение через несколько лет. Ложноположительные результаты определения антител класса IgG к боррелиям могут быть обусловлены присутствием в крови специфических антител при заболеваниях, вызываемых спирохетами (сифилис, возвратный тиф); низкий уровень антител IgG возможен при инфекционном мононуклеозе, гепатите B, ревматических болезнях (СКВ), заболеваниях периодонта, у 5 – 15 % здоровых лиц из эпидемической зоны.

Положительный результат исследования свидетельствует о текущей или перенесенной в прошлом инфекции. Это может иногда приводить к неверной оценке результатов исследования, если клиническая картина заболевания нетипична.

Отрицательный результат исследования может быть при отсутствии инфицирования, при проведении исследования в ранние сроки заболевания или в отдалённые сроки после перенесенной инфекции. Нужно помнить, что отсутствие антител не исключает раннюю инфекцию, но действительно исключает хроническийборрелиоз.

В принципе, на основании только серологических исследований нельзя определить необходимость назначения лечения и нельзя оценить эффективность терапии. Эти проблемы должны решаться индивидуально с учётом клинических данных.

Для лабораторной диагностики используют серологическое исследование крови в непрямой реакции иммунофлюоресценции (нРИФ) с антигеном из боррелий. Положительной реакцией считают нарастание титра антител через Знедели от начала заболевания в 2 раза. При отсутствии нарастания титра антител в динамике диагностическим является титр 1 : 40.На поздних сроках заболевания положительная нРИФ в титре 1 : 40 и выше, вероятно, свидетельствует о хроническом или латентном течении болезни Лайма. Для выявления антител классов IgM и IgG используется ИФА. Среди перспективных методов диагностики боррелиоза - вестернблот и ПЦР.