Индекс кожно-раздражающего действия

Сущность метода основана на регистрации изменений функционального состояния кожи лабораторных животных воспалительного характера (эритемы и отека). В качестве подопытных животных используют следующие их виды (в порядке снижения чувствительности их кожи и близости по морфо-функциональным признакам к человеческой):

- морские свинки (альбиносы или с крупными белыми пятнами на туловище) массой 300–450 г;

- кролики (альбиносы или светло-серой масти) массой 2000–3500 г;

- белые крысы массой 180–220 г.

Формируют однородную по массе (разница не более 10 %), поведению и состоянию, с чистой здоровой кожей без механических повреждений группу из не менее 5 лабораторных животных. За сутки до начала эксперимента на симметричных участках боковых поверхностей туловища лабораторных животных ножницами или электрической машинкой выстригают кожные «окошки» (опытные и контрольные) площадью 15 см² (5 ´ 3 см) для кроликов, 6 см²
(3 ´ 2 см) для морских свинок и 4 см² (2 ´ 2 см) для крыс.

Из испытуемых образцов из расчета 20 мг/см² кожного «окошка» готовят навески (для ПКП твердой консистенции, используя дистиллированную воду, готовят 50 %-ные растворы или суспензии).

Животным, фиксированным в специальных индивидуальных домиках для исключения слизывания или механического снятия вещества с кожи, в течение трех дней открытым аппликационным способом ежедневно равномерно наносят на кожные «окошки» соответствующие дозы ПКП (на контрольные участки в тех же дозах воздействуют дистиллированной водой), аккуратно втирая в кожу. Ежедневная экспозиция составляет 4 часа, а для моющих, для очистки кожи, ухода за зубами и ртом, волосами, ногтями средств — 15 мин.

По окончании экспозиции ватным тампоном, смоченным в растворителе, не вызывая повреждения кожи, не менее двух раз обмывают оба участка, последним сухим тампоном осушают. Растворитель, применяемый для смыва, должен обладать способностью растворять испытуемый препарат, быть безвредным для кожи и организма в целом. Чаще используют теплую дистиллированную воду с детским мылом, для маникюрных лаков — ацетон, для красящих веществ — 20 %-ный этиловый спирт.

До опыта и через 24 часа после последней аппликации на опытных и контрольных участках визуально по четкости и выраженности тона гиперемии определяют эритематозную реакцию, а микрометром измеряют (в мм) толщину кожной складки (соответственно ТКС_фон. и ТКС_аппл.). Оценку выраженности эритематозной реакции оценивают в баллах по шкале: отсутствие эритемы —
0 баллов, слабая (слабо-розовый фон) — 1 балл, умеренно выраженная (эритема розово-красного тона) — 2 балла. Оценку выраженности отека проводят по разнице ТКС_фон. и ТКС_аппл. в соответствии с таблицей 4.

Таблица 4

Оценка выраженности отека

Интенсивность отека	ТКСфон. –ТКСаппл. , мм	Балл
кролики	морские свинки, белые крысы
Отсутствие	0–0,09	0–0,09
Слабая	0,10–0,59	0,10–0,39
Умеренная	0,60–1,09	0,40–0,69

Индекс кожно-раздражающего действия вычисляют в баллах по формуле:

,

где R — выраженность эритематозной реакции в баллах через 24 часа после последней аппликации на опытном (о) и контрольном (k) участках;
Т — выраженность отека в баллах на опытном (о) и контрольном (k) участках; 1, 2, …, n — порядковый номер животного; n — количество животных в группе.

Пример расчета.

При проведении исследований кожно-раздражающего действия крема для бритья «Х» на 6 белых крысах были получены следующие результаты. Выраженность эритемы: на опытном участке только у первого животного наблюдалась слабо выраженная эритема, на опытном участке у остальных животных и на контрольном участке у всех животных эритема отсутствует (эритема на всех участках до аппликаций крема не наблюдалась). Разность в толщине кожной складки до аппликаций и через 24 ч после последней аппликации на опытном и контрольном участках соответственно: 1 животное — 0,08 и 0,05 мм; 2 животное —
0,01 и 0,01 мм; 3 животное — 0,15 и 0,07 мм; 4 животное — 0,25 и 0,15 мм; 5 животное — 0,05 и 0,05 мм; 6 животное — 0,01 и 0 мм. Рассчитать индекс кожно-раздражающего действия.

Решение. Эритема на опытном участке у первого животного оценивается в 1 балл, на других участках у всех животных — 0 баллов. Выраженность отека на опытном и контрольном участках соответственно: 1 животное — по 0 баллов; 2 животное — по 0 баллов; 3 животное — 1 и 0 баллов; 4 животное — по 1 баллу; 5 животное — по 0 баллов; 6 животное — по 0 баллов.

Ответ: индекс кожно-раздражающего действия равен 0,33 балла, что не соответствует требованиям СанПиН № 10-33-95 и СанПиН № 10-33.1-95.

При испытании местного действия продуктов, которые могут окрашивать кожу (некоторые водостойкие средства декоративной косметики, средства для окраски волос и т.п.), оценку функционального состояния кожи проводят только по выраженности отека. В этом случае индекс кожно-раздражающего действия в баллах вычисляют по формуле:

,

где Т — выраженность отека в баллах на опытном (о) и контрольном (k) участках; 1, 2, …, n — порядковый номер животного; n — количество животных в группе.

Пример расчета.

После 3-кратных 15-минутных аппликаций краски для волос «Х» на кожные «окошки» 6 белых крыс толщина кожной складки на опытных и контрольных участках (через 24 ч после последней аппликации) составила соответственно: 1 животное — 2,50 и 2,40 мм;
2 животное — 2,30 и 2,31 мм; 3 животное — 2,45 и 2,45 мм; 4 животное — 2,40 и 2,35 мм;
5 животное — 2,50 и 2,51 мм; 6 животное — 2,42 и 2,38 мм. Наблюдаемая фоновая (до аппликаций) толщина кожной складки на опытных и контрольных участках соответственно составляла: 1 животное — 2,31 и 2,32 мм; 2 животное — 2,18 и 2,22 мм; 3 животное — 2,41 и 2,43 мм; 4 животное — 2,25 и 2,25 мм; 5 животное — 2,45 и 2,45 мм; 6 животное — 2,29 и 2,31 мм. Рассчитать индекс кожно-раздражающего действия.

Решение. Для расчета индекса кожно-раздражающего действия необходимо рассчитать разность между толщиной кожной складки через 24 ч после последней аппликации и фоновой на обоих участках кожи всех 6 животных, затем оценить ее в баллах, для удобства сведем полученные данные в таблицу 5.

Таблица 5

№ животного	Опытный участок кожи	Контрольный участок кожи
ТКСфон, мм	ТКС24 ч, мм	разность ТКС, мм	выраженность отека, балл	ТКСфон, мм	ТКС24 ч, мм	разность ТКС, мм	выраженность отека, балл
	2,31	2,50	0,19		2,32	2,40	0,08
	2,18	2,30	0,12		2,22	2,31	0,09
	2,41	2,45	0,04		2,43	2,45	0,02
	2,25	2,40	0,15		2,25	2,35	0,10
	2,45	2,50	0,05		2,45	2,51	0,06
	2,29	2,42	0,13		2,31	2,38	0,07

Вычисляется индекс кожно-раздражающего действия:

Ответ: индекс кожно-раздражающего действия краски для волос «Х» равен 0,5 балла, что противоречит требованиям СанПиН № 10-33-95 и СанПиН № 10-33.1-95.

Образец ПКП не обладает раздражающими кожу свойствами, если индекс кожно-раздражающего действия равен 0 баллов.