Тема: Активаторы и ингибиторы ферментов. Энзимология.
Теоретические вопросы:
- Проферменты. Механизм активирования проферментов на примере пепсина и HCL.
- Активаторы и ингибиторы (обратимые, специфические, неспецифические). Типы ингибирования: конкурентный и неконкурентный.
- Механизм регуляции активности ферментов: фосфорилирование, дефосфорилирование, обратная отрицательная связь. Регуляция синтеза ферментов в клетке.
- Энзимология. Направления энзимологии:
1) Энзимопатология. Виды энзимипатии и причины.
2)Энзимодиагностика. Изоферменты. Органоспецифические ферменты. Их значение в энзимодиагностике. Трансаминазы, изоформы ЛДГ и креатинкиназы, их значение в клинике и диагностике.
3) Энзимотерапия.
5. Контрольная работа по ферментам.
Лабораторные работы:
Влияние температуры на активность фермента амилазы слюны.
ХОД РАБОТЫ:берут два ряда пробирок по 4шт, в 1-4 капают по 10кап 0,5% крахмала, в 5-8 по 10 кап слюны, разведенной в 10 раз. Пробирки оставляют на 10минут в следующих условиях:
| Пробирки | Температура | Окраска с I2 |
| 1 и 5 | 00С лед | |
| 2 и 6 | 200С комнатная t | |
| 3 и 7 | 370С водяная баня | |
| 4 и 8 | 1000С кип. вод. баня |
Через 10мин сливают содержимое пробирок 1 и 5, 2 и 6, 3 и 7, 4 и 8. Перемешивают, снова оставляют на 10 мин в тех же условиях и проделывают реакцию с I2
ВЫВОДЫ:
Влияние реакции среды рН на активность фермента амилазы слюны.
ХОД РАБОТЫ: готовят буферные смеси с разными значениями рН согласно таблице:
| № | Количество Na2HPO4 0,2 М в мл. | Кол-во лимонной кис- ты 0,1М в мл. | рН среды | Результаты опыта | |
| 2 ,9 | 2 ,1 | 5 ,6 | |||
| 3 ,1 | 1 ,9 | 6 ,0 | |||
| 3 ,9 | 1 ,2 | 6 ,8 | |||
| 4 ,8 | 0 ,2 | 8 ,0 |
В каждую пробирку приливают 0,5мл разбавленной в 5раз слюны, по 0,5мл 0,5% крахмала, через 5 минут во все пробирки прибавляют по 1кап. I2 .ВЫВОДЫ:
Литература:
1.ЛЕКЦИИ
2.Березов, Коровкин, 1990 с.22-27, 60-62, 1983 с.16-23
3.Николаев 1989 36-52
ЗАНЯТИЯ 7 пед-2017г.
ТЕМА: Коферментная функция водорастворимых витаминов
Теоретические вопросы:
1. Витамины, определение, функции и классиф. гипо - , гипер-авитаминозы, их экзогенные и эндогенные причины
2. Номенклатура витаминов: буквенные обозначения, латинское название. Провитамины и антивитамины
3. Вит. В 1, строение активной формы ТПФ, биороль, авитаминоз,пищевые источники и суточная потребность
4. Вит. В 2, строение, ФМН, ФАД, их биороль, авитаминоз, пищевые источники и суточная потребность
5. Вит. В 6, строение пиридоксальфосфата-ПФ, его биороль, авитаминоз, пищевые источники, суточная потребность. Антивитамин - изониазид, его механизм действия
6. Вит. В 12, его биороль, участие в реакциях кроветворения. Внешний и внутренние факторы Касла, пищевые источники, суточная потребность.
7. Вит. РР. Строение НАД, его биороль, авитаминоз, пищевые источники, суточная потребность.
8. Вит.С. Строение, свойства, биороль, участие в синтезе коллагена, эластина. Авитаминоз, пищевые источники, суточная потребность.
Примечание: по возможности принести овощи и фрукты (10 гр) для опред. вит. С.
Практическая работа:
1.Качественное реакция на вит. В1 /тиамин/ - окисление тиамина в тиохром, взбалтывают и наблюдают в УФО.
2.Качественное реакция на вит. В2- восстановление рибофлавина в лейкофлавин.
Ход работы: вит. В2 +НCIконц+ Zn – розовое ---бесцветное и наблюдают в УФО.
| название витамина | употребляемые реактивы | условия опыта | набл. флюоресценция |
| B1-5% р-ра тиамина 1 кап. | +5-10кап.10%NaOH +1-2кап K3Fe (CN)6- | УФО | синяя |
| B2-0.025%р-ра рибофлавина 10 кап. | 5кап. HCIконц.+ Zn(кусочек) - розовая→ бесцветная | ||
| B2- рибофлавина10 кап. | водный раствор | УФО | зеленая |
Количественное определение витамина С с методом йодиметрического титрования.
Аскорбиновая кислота является сильным восстановителем и может быть определена йодиметрически при определенном значении рН раствора (например рН = 7). При титровании йодом аскорбиновая кислота окисляется, образуя дегидроаскорбиновую кислоту.
Подготовка экстракта из пищевых продуктов для определения витамина С.
2 г капусты или картофеля натереть на терке в ступке с небольшим количеством толченного стекла или песка. Затем прямо в ступку добавить 10 мл 2% - го раствора HCl . хорошо перемешанную массу прилить 1 мл 0,5% -го раствора крахмала и титровать рабочим раствором 0,003н. I2 до появления синего окрашивания.
При расчете содержания витамина С в продукте использовать формулу определения массы при помощи титра по определяемому веществу.
н.Э
М= ______ . V(г).
Где «н.» -молярная концентрация эквивалента йода. 0,003н.
Э – молярная масса эквивалента аскорбиновой кислоты в г, равная в данном случае 88г;
V – объем пошедшего на титрование йода, в мл.
Для пересчета на содержание витамина С в 100 г продукта использовать формулу
М×1000
X= ______ (г).
Литература:
Лекции
Николаев, 1989, с. 60-70, 2004, с 434- 435