Тема: Патогенные стрептококки, клостридии газовой гангрены и столбняка
УДК 579:616.31 (072)
ББК 52.64 р30
© Генералов И.И., Железняк Н.В., Данющенкова Н.М., Окулич В.К., Сенькович С.А., Беренштейн Т.Ф., Зубарева И.В., Фролова А.В., Моисеева А.М.
© УО «Витебский государственный медицинский университет», 2011
ОГЛАВЛЕНИЕ
| Стр. | ||
| Занятие №1 | Патогенные стафилококки, псевдомонады. | |
| Занятие №2 | Патогенные стрептококки, клостридии газовой гангрены и столбняка. | |
| Занятие №3 | Возбудители острых кишечных инфекций: эшерихии, шигеллы. | |
| Занятие №4 | Патогенные сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов, сальмонеллезов. | |
| Занятие №5 | Возбудители холеры, ботулизма. Патогенные хеликобактерии. | |
| Занятие №6 | Возбудители бактериальных воздушно-капельных инфекций. Менингококки, коринебактерии дифтерии, бордетеллы. | |
| Занятие №7 | Возбудители туберкулеза, лепры. Патогенные микоплазмы. | |
| Занятие №8 | Итоговое занятие по теме «Возбудители воздушно-капельных, кишечных и раневых инфекций». | |
| Занятие №9 | Возбудители бактериальных зоонозных инфекций: чумы, туляремии, сибирской язвы, бруцеллеза, лептоспироза. | |
| Занятие №10 | Возбудители заболеваний, передаваемых половым путем: сифилиса, гонореи, хламидийных уретритов. | |
| Занятие №11 | Возбудители бактериальных трансмиссивных инфекций. Боррелии возвратного тифа, болезни Лайма. Патогенные риккетсии. Возбудители Q-лихорадки. | |
| Занятие №12 | Общая вирусология. Методы диагностики вирусных инфекций. | |
| Занятие №13 | Вирусные инфекции, вызываемые ортомиксовирусами, парамиксовирусами. | |
| Занятие №14 | Вирусные инфекции, вызываемые пикорнавирусами, аденовирусами, ротавирусами. | |
| Занятие №15 | Вирусные инфекции, вызываемые рабдовирусами, герпесвирусами, флавивирусами и тогавирусы). | |
| Занятие №16 | Гепатотропные вирусы – возбудители гепатитов А, В, С, D. ВИЧ-инфекция. | |
| Занятие №17 | Итоговое занятие по теме «Общая и частная вирусология. Бактериофагия». | |
| Занятие №18 | Клиническая микробиология. Микробиологическая диагностика заболеваний челюстно-лицевой области, стоматогенных гнойно-воспалительных заболеваний, сепсиса. | |
| Список рекомендуемой литературы |
ЗАНЯТИЕ №1
Тема: Патогенные стафилококки, псевдомонады.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Освоить методы лабораторной диагностики стафилококковых инфекций.
3. Знать биопрепараты для специфической профилактики, диагностики и лечения гнойно-воспалительных инфекций.
4. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Стафилококки: таксономия, свойства, резистентность.
2. Факторы патогенности стафилококков. Этиологическая роль стафилококков в развитии гнойно-воспалительных заболеваний.
3. Лабораторная диагностика стафилококковых инфекций. Профилактика и лечение.
4. Псевдомонады: таксономия, свойства, резистентность.
5. Факторы патогенности синегнойной палочки. Этиологическая роль в развитии гнойно-воспалительных заболеваний.
6. Лабораторная диагностика синегнойной инфекции. Профилактика и лечение
7. Биопрепараты: стафилококковый анатоксин, антистафилококковый иммуноглобулин, типовые стафилококковые бактериофаги.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 153-159, 173-176.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 109-112.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Микробиологическое исследование гноя при мастите.
| День | Материал для исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| Гной | 1. Микроскопическое исследование: приготовление мазка из гноя, окраска по Граму, микроскопия 2. Бактериологическое исследование: посев гноя на ЖСА и на кровяной агар | ||
| -“- | Учет посевов. Посев на цитратную плазму для обнаружения плазмокоагулазы Посев на полужидкую среду Гисса с маннитом под вазелиновое масло | ||
| -“- | 1. Учет плазмокоагулазы 2. Учет роста на средах Гисса | ||
| -“- | Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом бумажных дисков (по готовым посевам) | 1. _______- ___мм. 2. _______- ___мм. 3. _______- ___мм. 4. _______- ___мм. 5. _______- ___мм. | |
| Заключение: |
В заключении указать вид стафилококка, обнаруженные факторы патогенности, чувствительность стафилококка к антибиотикам
2. Микробиологическое исследование слизи из зева.
| День | Материал для исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| Слизь из зева | Забор слизи из зева стерильным тампоном посев на кровяной агар | ||
| Учет роста на кровяном агаре. Приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия | |||
| Заключение: |
Второй день исследования проводится на занятии №2.
3. Демонстрация пигментообразования P.aeruginosa на мясо-пептонном агаре.
4. Учет и оценка демонстрационного опыта фаготипирования стафилококков.
ЗАНЯТИЕ №2
ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2
Streptococcus pneumoniae в органахClostridium tetani
окраска по Грамуокраска по Граму
ПРЕПАРАТ №3
Clostridium perfringens
в материале от больного
окраска по Граму
5. Постановка ИФА для определения цитотоксина C. Difficile.
Реагенты
1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными на внутренней поверхности лунок антителами к цитотоксину C. difficile.
2) Исследуемый материал (копрофильтрат).
3) Положительный контрольный образец (К+), содержащий цитотоксин, инактивированный.
4) Отрицательный контрольный образец (К–), не содержащий цитотоксин, инактивированный.
5) Поликлональные антитела к цитотоксину C. difficile из сыворотки крови кролика.
6) Конъюгат – антитела против глобулинов кролика, меченые пероксидазой хрена.
7) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.
8) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).
9) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.
Проведение анализа
1) Внесение исследуемых и контрольных образцов.
В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д 1 внести по 100 мкл исследуемого материала.
Внесение контрольных образцов:
100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;
100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.
2) Добавление во все лунки по 50 мкл рабочего раствора поликлональных антител к цитотоксину C. difficile. Инкубация 60 мин при 37°С в термостате.
3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором.
4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.
5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.
6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.
7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.
8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.
ЗАНЯТИЕ №3
Тема: Возбудители острых кишечных инфекций: эшерихии, шигеллы.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Освоить лабораторную диагностику колиэнтерита и шигеллезов.
3. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Общая характеристика и классификация семейства энтеробактерий.
2. Эшерихии: свойства, резистентность.
3. Энтеропатогенные, энтеротоксигенные, энтероинвазивные и энтерогеморрагические кишечные палочки. Факторы патогенности и патогенез эшерихиозов.
4. Лабораторная диагностика эшерихиозных инфекций.
5. Шигеллы – возбудители дизентерии, классификация, свойства, резистентность.
6. Факторы патогенности шигелл. Патогенез дизентерии, иммунитет.
7. Лабораторная диагностика, лечение и профилактика шигеллезов.
8. Биопрепараты: поливалентная эшерихиозная ОКВ-сыворотка; типовые эшерихиозные ОК-сыворотки: О111К58, О55К59, О26К60; колибактерин, агглютинирующая дизентерийная сыворотка Зоне, Флекснера.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 193-202.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 120-123.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Микробиологическая диагностика колиэнтерита
| День | Материал исследования | Ход исследования | Результат исследования | ||||||
| 1. | Фекалии больного в консерванте | Посев фекалий на среду Левина | |||||||
| 2. | Учет роста на среде Левина Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с поливалентной ОК-В сывороткой В-группы энтеропатогенных эшерихий. Посев колонии, давшей (+) реакцию с ОКВ сывороткой, на косой агар для выделения чистой культуры | ||||||||
| 3. | Учет роста на косом агаре, мазок, окраска по Граму, микроскопия Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с типовыми сыворотками О111К58, О55К59, О20К84 Постановка развернутой реакции агглютинации с сывороткой О26К60 в 2 ряда: 1-й ряд – сыворотку развести до титра О-антител и добавить гретую культуру. 2-ой ряд – сыворотку развести до титра К (В)-антител и добавить живую культуру. Пересев культуры на среды Гисса | ||||||||
| 4. | Учет биохимических свойств | Л | С | Г | М | МН | H2S | индол | |
| Заключение: |
2. Демонстрация бактериологического метода диагностики дизентерии.
ЗАНЯТИЕ №4
Тема: Патогенные сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов, сальмонеллезов.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Уметь определить сальмонеллы по культуральным свойствам на средах Эндо, Левина, Ресселя, висмут-сульфит агаре.
3. Уметь дифференцировать сальмонеллы по биохимическим свойствам.
4. Научиться выделять гемокультуру при брюшном тифе и паратифах.
5. Знать биопрепараты для диагностики брюшного тифа и паратифов.
6. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Сальмонеллы: таксономия, свойства, резистентность.
2. Антигенная структура, серологическая классификация Кауфмана-Уайта.
3. Факторы патогенности сальмонелл. Источник инфекции, пути передачи патогенез брюшного тифа.
4. Ранний метод диагностики брюшного тифа. Профилактика, лечение.
5. Серологический диагноз брюшного тифа и бактерионосительства. Фаготипирование.
7. Возбудители сальмонеллезов. Факторы патогенности, патогенез сальмонеллеза.
8. Лабораторная диагностика сальмонеллезной инфекции. Профилактика и лечение сальмонеллезов.
9. Биопрепараты: агглютинирующие адсорбированные О- и Н- сальмонеллезные сыворотки, неадсорбированные агглютинирующие брюшнотифозные и паратифозные сыворотки, люминесцирующая брюшнотифозная сыворотка, диагностикум брюшнотифозный О, диагностикум брюшнотифозный Н, эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум; брюшнотифозные Vi-бактериофаги.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 202-210.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 115-120.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Ранний метод диагностики брюшного тифа. Выделение гемокультуры.
| День | Материал | Ход исследования | Результаты | |||||
| Кровь больного | Посев 5 мл крови в 50 мл желчного бульона. Термостат 37оС на сутки | |||||||
| Учет роста на желчном бульоне Пересев с желчного бульона на среду Левина. Термостат 37оС на сутки | ||||||||
| Учет роста на среде Левина. Пересев бесцветных колоний на среду Ресселя. Термостат 37оС на сутки | ||||||||
| Учет роста на среде Ресселя Приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными Н- сыворотками брюшного тифа и паратифа В. Пересев на среды Гисса. Термостат 37оС на сутки | ||||||||
| Учет биохимических свойств | Г | Л | С | М | МН | МПБ | ||
| Н2S | индол | |||||||
| Заключение: |
2. РПГА для серодиагностики брюшнотифозного бактерионосительства (демонстрация).
| Ингредиенты | Разведения сыворотки | ||||||||||
| 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | К | |||||||
| Физраствор | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | ||||||
| Сыворотка больного 1:5 |  0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | - | ||||||
| Эритроцитарный Vi-диагностикум брюшного тифа | |||||||||||
| Термостат 1 – 1,5 часа | |||||||||||
| Результат | |||||||||||
| Заключение: | |||||||||||
3. Бактериологическое исследование остатков пищи при пищевой токсикоинфекции (демонстрация).
| День | Материал | Ход исследования | Результаты | |||||
| Остатки пищи (колбаса) | Посев материала: 1. На среду Левина для обнаружения кишечной палочки и сальмонелл 2. На молочно-солевой агар для выявления стафилококка 3. На скошенный агар в конденсоционную воду для обнаружения протея (по Шукевичу) 4. На среду Китта-Тароцци для обнаружения клостридий ботулизма | |||||||
| -“- | Учет роста на среде Левина Учет роста на молочно-солевом агаре Учет роста протея на скошенном агаре Учет роста на среде Китта-Тароцци Пересев бесцветной колонии на среду Ресселя | |||||||
| -“- | Учет роста на среде Ресселя Приготовление мазка. Окраска по Граму, микроскопия Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными сальмонеллезными H-сыворотками Пересев в среды Гисса | |||||||
| -“- | Учет биохимических свойств | Л | С | Г | М | МН | МПБ | |
| Н2S | индол | |||||||
| Заключение: |
ЗАНЯТИЕ № 5
Реагенты
1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными на поверхности лунок антигеном CagA Helicobacter pylori.
2) Исследуемые сыворотки.
3) Положительный контрольный образец сыворотки (К+), содержащий антитела к антигену CagA Helicobacter pylori.
4) Отрицательный контрольный образец сыворотки (К–), не содержащий специфических антител.
5) Конъюгат – антитела против IgG человека, меченые пероксидазой хрена.
6) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.
7) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).
8) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.
Проведение анализа
1) Внесение исследуемых и контрольных образцов.
В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д 1 внести по 100 мкл разведенных исследуемых сывороток в дублях. Предварительное разведение сывороток – 1/100.
Внесение контрольных образцов:
100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;
100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.
2) Инкубация 30 мин при 37°С в термостате.
3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Промыть планшет 5 раз
4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.
5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.
6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.
7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.
8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.
Таблица. Результаты серологической диагностики хеликобактерной инфекции методом ИФА.
| A | K1(+) | K2(+) | ||||||||||
| B | K1(+) | K2(+) | ||||||||||
| C | ||||||||||||
| D | ||||||||||||
| Заключение |
2.Микроскопия и зарисовка препарата
ПРЕПАРАТ №1
Vibrio cholerae
окраска по Граму
3. Демонстрация роста вибрионов на питательных средах.
ЗАНЯТИЕ №6
ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2
Coryтebacterium diphteriae Bordetella pertussis
окраска по Нейссеруокраска по Граму
ПРЕПАРАТ №3
Neisseria meningitidis в гное
окраска метиленовым синим_
4. ПЦР для выявления токсигенности возбудителя дифтерии.
ЗАНЯТИЕ №7
Реагенты
1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными антигенами микоплазм.
2) Исследуемые сыворотки.
3) Положительный контрольный образец сыворотки (К+), содержащий антитела к микоплазменным АГ.
4) Отрицательный контрольный образец сыворотки (К–), не содержащий антител к микоплазменным АГ.
5) Конъюгат – антитела против IgМ человека, меченые пероксидазой хрена.
6) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.
7) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).
8) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.
Проведение анализа
1) Внесение исследуемых и контрольных образцов.
В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д 1 внести по 100 мкл разведенных исследуемых сывороток в дублях. Предварительное разведение сывороток – 1/100.
Внесение контрольных образцов:
100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;
100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.
2) Инкубация 30 мин при 37°С в термостате.
3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Промыть планшет 5 раз.
4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.
5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.
6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.
7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.
8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.
Таблица. Результаты серологической диагностики микоплазменной пневмонии методом ИФА.
| A | K1(+) | K2(+) | ||||||||||
| B | K1(+) | K2(+) | ||||||||||
| C | ||||||||||||
| D | ||||||||||||
| Заключение |
2. Микроскопия и зарисовка мазков:
ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2
M.tuberculоsisM.tuberculisis в мокроте
(корд-фактор)окраска по Циль-Нильсену
окраска по Циль-Нильсену
3. Конфокальная микроскопия возбудителей туберкулеза.
ЗАНЯТИЕ №8
ЗАНЯТИЕ №9
ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2
Yersinia pestis в органах Bacillus anthracisв органах
окраска метиленовым синимокраска по Граму
ПРЕПАРАТ №3 ПРЕПАРАТ №4
Francisella tularensisв органах Вrucella abortus в чистой культуре
окраска по Граму окраска по Граму
ПРЕПАРАТ №5
Край колонии
Bacillus anthracis
ЗАНЯТИЕ №10
Тема: Возбудители заболеваний, передаваемых половым путем: сифилиса, гонореи, хламидийных уретритов.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Научиться учитывать реакцию Вассермана и ИФА для серодиагностики сифилиса.
3. Ознакомиться с морфологией изучаемых возбудителей.
4. Научиться решать ситуационные задачи по теме занятия.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Спирохеты: таксономия, свойства, резистентность.
2. Возбудители венерического сифилиса, факторы патогенности, патогенез, клинические формы (стадии развития) сифилиса.
3. Материал и методы диагностики сифилиса в зависимости от стадии заболевания. Профилактика и лечение сифилиса.
4. Гонококки: таксономия, свойства, резистентность,
5. Факторы патогенности и механизмы их действия. Этиологическая роль гонококков при уретритах и бленнорее. Патогенез гонореи, иммунитет.
6. Лабораторная диагностика острой и хронической гонореи. Профилактика и лечение гонореи.
7. Хламидии: таксономия, свойства, роль в урогенитальной патологии.
8. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение хламидийных уретритов.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 170-173, 266-272, 293-300.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 106-107, 160-164, 170-171.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Постановка ИФА для серодиагностики первичного сифилиса: определение АТ класса IgМ к специфическому трепонемному антигену.
Реагенты
1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированным на внутренней поверхности лунок рекомбинантным трепонемным антигеном.
2) Исследуемые сыворотки.
3) Положительный контрольный образец сыворотки (К+), содержащий антитела к трепонемным АГ.
4) Отрицательный контрольный образец сыворотки (К–), не содержащий антитела к трепонемным АГ.
5) Конъюгат – антитела против IgМ человека, меченые пероксидазой хрена.
6) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.
7) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).
8) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.
Проведение анализа
1) Внесение исследуемых и контрольных образцов.
В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д 1 внести по 100 мкл разведенных исследуемых сывороток в дублях. Предварительное разведение сывороток – 1/100.
Внесение контрольных образцов:
100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;
100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.
2) Инкубация 30 мин при 37°С в термостате.
3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Промыть планшет 5 раз
4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.
5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.
6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.
7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.
8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.
ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2
Treponema pallidum Chlamydia trachomatis
окраска по Романовскому-Гимзеокраска по Романовскому-Гимзе
ПРЕПАРАТ №3
Neisseria gonorrhoeae в гное_
окраска метиленовым синим
4. ПЦР для диагностики хламидийной инфекции.
ЗАНЯТИЕ №11
Реагенты
1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными на поверхности лунок антигенами B. burgdorferi.
2) Исследуемые сыворотки.
3) Положительный контрольный образец сыворотки (К+), содержащий антитела к антигенам B. burgdorfer.
4) Отрицательный контрольный образец сыворотки (К–), не содержащий специфических антител.
5) Конъюгат – антитела против IgG человека, меченые пероксидазой хрена.
6) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.
7) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).
8) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.
Проведение анализа
1) Внесение исследуемых и контрольных образцов.
В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д 1 внести по 100 мкл разведенных исследуемых сывороток в дублях. Предварительное разведение сывороток – 1/100.
Внесение контрольных образцов:
100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;
100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.
2) Инкубация 30 мин при 37°С в термостате.
3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Промыть планшет 5 раз
4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.
5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.
6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.
7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.
8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.
ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ № 2
Borrelia recurrentis Rickettsia typhi____
в крови в тканях_____
окраска по Романовскому-Гимзеокраска по Здродовскому
ЗАНЯТИЕ №12
Тема: Общая вирусология. Методы диагностики вирусных инфекций.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Освоить методы индикации вирусов в курином эмбрионе.
3. Уметь ставить и учитывать результаты РГА для индикации и титрования вируса.
4. Научиться осуществлять индикацию вирусов в культуре клеток по реакции гемадсорбции, цветной пробе, симпластообразованию.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Современные принципы классификации и таксономии вирусов.
2. Структура, свойства и особенности вирусов. Понятие о вирионе, вироиде.
3. Химический состав вирусов, значение различных химических компонентов. Ферменты вирусов.
4. Репродукция вирусов. Особенности репродукции РНК- и ДНК-содержащих вирусов.
5. Методы культивирования, индикация и идентификация вирусов.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 50-67.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 29-41.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Заражение куриных эмбрионов на хорионаллантоисную оболочку, в аллантоисную и амниотическую полости.
2. Постановка реакции гемагглютинации для индикации и титрования вируса.
| Ингредиенты разведения | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | К |
| Физ.раствор | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
| Аллантоисная жидкость 1:5 |  0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | - |
| Взвесь эритроцитов | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
| Результат | ||||||
| Заключение |
3. Титрование бактериофага на жидкой питательной среде.
| Ингредиенты | Разведения бактериофага | |||||||
| 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 | 10-5 | 10-6 | 10-7 | К | |
| Мясо-пептонный бульон | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 |
| Бактериофаг кишечной палочки |  0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
| Кишечная палочка | По одной петле бульонной культуры во все пробирки | |||||||
| Термостат 37оС 18-20 часов | ||||||||
| Результат: | ||||||||
| Заключение: |
4. Титрование бактериофага на плотной и жидкой питательной среде – демонстрация.
5. Демонстрация опыта бактериофагии для идентификации бактерий.
6. Демонстрация опыта фаготипирования бактерий.
7. Микроскопия демонстрационных препаратов:
ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2
Симпластообразование в культуре клетокРеакция гемадсорбции
ЗАНЯТИЕ №13
Тема: Вирусные инфекции, вызываемые ортомиксовирусами, парамиксовирусами.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Ознакомиться с методами диагностики гриппа, парагриппа, паротита, кори, аденовирусной инфекции с использованием демонстрационных реакций и микропрепаратов.
3. Знать вирусные биопрепараты для диагностики, специфической профилактики и лечения вирусных инфекций по теме занятия.
4. Научиться ставить РТГА для идентификации вируса гриппа.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Ортомиксовирусы. Классификация и характеристика семейства. Вирусы гриппа А, В, С. Структура вириона.
2. Антигенная структура, серотипы, антигенная изменчивость (дрейф и шифт). Особенности различных серотипов вируса гриппа (H1N1, H5N1) и др.
3. Патогенез гриппа. Иммунитет.
4. Лабораторная диагностика, лечение и профилактика гриппа.
5. Парамиксовирусы. Классификация и характеристика семейства. Структура вириона.
6. Вирусы парагриппа, свойства, роль в патологии человека. Патогенез, иммунитет, лабораторная диагностика, профилактика, лечение.
7. Вирус эпидемического паротита, свойства, патогенез, иммунитет, лабораторная диагностика, профилактика, лечение паротита.
8. Пневмовирусы (РСВ): свойства, роль в патологии, лабораторная диагностика РСВ-инфекций.
9. Морбиливирусы: вирус кори, свойства, патогенез, лабораторная диагностика, профилактика, лечение кори.
10. Биопрепараты: живая гриппозная вакцина, диагностические противогриппозные сыворотки А(H3N2) и А(H2N2), гриппозные диагностикумы А(H3N2) и A(H2N2), иммуноглобулин против кори, живая вакцина КПК.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 300-309.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 29-41.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Постановка РТГА для идентификации вируса в аллантоисной жидкости.
| Ингредиенты разведения | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | К |
| Физ. раствор | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | |
| Противогриппозная сыворотка А(Н3N2) 1:5 |  0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | |
| Противогриппозная сыворотка А(H2N2) 1:5 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | |
| Аллантоисная жидкость 4ГАЕ | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 |
| Взвесь эритроцитов | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,2 |
| Термостат 37оС 2 часа | |||||||
| Результат А(Н2N2) | |||||||
| Результат А(Н3N2) | |||||||
| Заключение: |
ЗАНЯТИЕ №14
Тема: Вирусные инфекции, вызываемые пикорнавирусами, аденовирусами, ротавирусами.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Ознакомиться с методами диагностики полиомиелита, Коксаки, ЕСНО, ротавирусов, аденовирусов с использованием демонстрационных реакций и микропрепаратов.
3. Знать вирусные биопрепараты для диагностики, специфической профилактики и лечения вирусных инфекций по теме занятия.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Пикорнавирусы: классификация и общая характеристика семейства, роль в патологии человека.
2. Вирусы полиомиелита: особенности свойств, патогенез, иммунитет.
3. Лабораторная диагностика, профилактика, лечение полиомиелита.
4. Вирусы Коксаки и ЕСНО, особенности свойств, роль в патологии человека, лабораторная диагностика, профилактика, лечение.
5. Ротавирусы: структура и свойства вирусов. Патогенез, иммунитет. Лабораторная диагностика ротавирусного гастроэнтерита.
6. Аденовирусы: классификация и характеристика семейства. Аденовирусы человека, структура вириона, патогенез, иммунитет, диагностика аденовирусных инфекций.
7. Биопрепараты: живая вакцина против полиомиелита, типоспецифические полиомиелитные сыворотки, моновалентные сыворотки Коксами и Есно.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 310-317, 318-319, 336-338.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 29-41.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Постановка ИФА для определения антигенов ротавирусов.
Реагенты
1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с а