Неполные (блокирующие) антитела и их определение в реакции торможения связывания комплемента, сущность, техника, особенности учета.

Различают три вида антител: полные, неполные агглютинирующие и неполные блокирующие.

Неполные агглютинирующие и блокирующие антитела (класс G, А) агглютинируют эритроциты в коллоидной среде, в сыворотке, в альбумине. Они появляются позднее, легко проникают через плаценту, поэтому имеют решающее значение в развитии гемолитической болезни.

практической работе в большинстве случаев приходится сталкиваться с наличием в сыворотке неполных агглютинирующих антител. Количество антител выявляют путем определения их титра. Титр антител соответствует наибольшему разведению сыворотки, при котором она еще способна агглютинировать резус-положительные эритроциты (титр антител может быть равен 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и т. д.).

При очень большом титре (концентрации) неполных антител их не удается обнаружить в неразведенной сыворотке. Они проявляют свои агглютинирующие свойства только после разведения в 5-100 раз. Такие антитела называют «скрытые». Наличие «скрытых» антител свидетельствует о большой степени иммунизации.

Для постановки РСК используют комплемент, содержащийся в крови морских свинок. Гемолитическая активность комплемента на комплексе антиген-антитело его действие проявляется реакцией лизиса антигена, если антиген корпускулярный или не сопровождается никакими видимыми изменениями, если это мелкодисперсные или растворимые антигены. Для учёта результатов РСК вводят вспомогательную ( индикаторную) гемолитическую систему. Она состоит из взвеси эритроцитов баранов в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолотической сыворотки кролика, полученной путём его иммунизации упомянутыми эритроцитами.

Приготовление и титрование ингредиентов.

Титрование комплемента. Проводят с помощью реакции имунного гемолиза. Для этого свежую сыворотку морской свинки разводят изотоническим раствором хлорида натрия от 1:10 до 1:40. К 0,2мл каждого разведения комплемента добавляют по 0,4 мл гемолитической смеси (смеси равных объёмов 3% суспензии эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки в разведении, соответствующем е тройному титру). Пробирки выдерживают при 37С и через 30 минут определяют титр комплемента – наибольшее разведение комплемента, которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки. Рабочую дозу комплемента рассчитывают, исходя из его титра. Рабочая доза комплемента должна быть выше титра на 25%.

Антигены изготавливаются из взвесей убитых микроорганизмов, из лизатов, полных антигенов, гаптенов, экстратов тканевых липидов.

Взвесь эритроцитов барана получают из дефибринированной крови барана, отмывая эритроциты изотоническим раствором хлорида натрия до получения полной бесцветности и прозрачности надосадочной жидкости и готовят из нах 3% взвесь в изотоническом растворе хлорида натрия.

Гемолитическая сыворотка готовится путм 3-4 кратной внутривенной иммунизации кролика 50% взвесью бараньих эритроцитов и инактивируется при 56С (разрушен комплемент). На этикетке ампул с сывороткой обозначен её титр – максимальной разведение данной сыворотки, которое обеспечивает полный лизис 3% взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента при 37С в течении часа. Для РСК сыворотка в тройном титре.

Постановка основного опыта РСК. Испытываемую и контрольные сыворотки предварительно инактивируют нагреванием при 56С в течение 30 мин. Первая фаза инкубации смеси антигена испытываемой сыворотки и комплемента при 37С в течении 30 мин. При постановке РСК на холоде эту фазу проводят при 0-4С в течение 18-20ч, что повышает чувствительность реакции. После добавления в каждую пробирку по 0,4 мл гемолитической системы пробирки встряхивают и выдерживают 20-30 мин при 37С. Результаты опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дне, отрицательной- при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена(«лаковая кровь»). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дно (++++,+++,++,+).

В качестве контроля (2-я,3-я) учитывают реакцию с заведомо положительной и заведомо отрицательной сыворотками;4-я,5-я пробирки – проверка антикомплементарных свойств сыворотки и антигена; в6-й,7-й пробирках контролируются рабочая доза комплемента и качество гемолитической системы.

4. В стационаре хирургической клиники возникла серия гнойных послеоперационных осложнений. Наметить план выявления источника инфекции, выделения возбудителя и связи его с ним.

Проверка инструментария на инфекцию, проверить качество стерилизации и определить возбудитель у больных, если они совпадают по всем факторам, значит, стерилизация была проведена не в должном объеме

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ № 50