I.6.2. Некоторые причины ошибок

При определении группы крови

1. Если при определении группы крови не покачивать тарелку с сыворотками, может возникнуть псевдоагглютинация. Под псевдоагглютинацией понимают образование монетных столби­ков эритроцитов, ошибочно принимаемых за скопление эритроцитов, связанных антителами.

2. Эритроциты, содержащие антиген А₁, при взаимодейст­вии с антителами α в первые же секунды образуют крупные, хорошо видимые невооруженным глазом скопления. В связи с тем, что антигены А₂ (см. разделI.8.3.1.) обладают меньшей способностью к агглютинации, эритроциты группы А₂(II)соединяются в мелкие комочки через более длительное время (несколько минут). По этой причине можно ошибочно отнести кровь группы А₂(II) к группе 0(I), а кровь группы А₂В(IV) – к группе В(III).

3. Затруднения в идентификации группы крови возникают также при наличии в исследуемой крови кровяных химер- одновременного пребывания в крови двух популяций эритроцитов (эритроцитов разных групп крови). Химеры имеются у разногруппных гетерозиготных близнецов при межплацентарных анастамозах и могут наблюдаться при недавнем переливании эритроцитов группы 0(I) иногруппным реципиентам.

4. Некоторые патологические процессы, происходящие в организме человека, сопровождаются падением активности ферментов, участвующих в образовании антигенов системы АВ0. Это приводит к снижению экспрессии антигенов А и/или В в мембране эритроцитов вплоть до их полного исчезновения, проявляющейся при определении группы крови как «изменение группы крови».

I.6.3. Определение группы крови

Моноклональными антителами

Моноклональные антитела (МКА) – это высокоспециализированные антитела, способные связываться лишь с одним типом эпитопа антигена. МКА получают методом гибридомной биотехнологии.

Гибридома образуется в результате гибридизации (слияния) антителопродуцирующей клетки определенной специфичности и опухолевой клетки. В качестве опухолевой клетки используется плазмоцитома - клетка, происходящая из молодых плазматических клеток. Озлокачествление плазматических клеток, способных функционировать неограниченное время, индуцируется определенным образом у мышей в лабораторных условиях. Затем методом отбора выделяется мутантная плазмоцитома, утратившая способность синтезироватьсобственныеантитела.

Далее производится иммунизация мыши антигеном системы АВ0 (или антигеном любой другой группы крови). Через некоторое время после начала образования антител к введенному антигену осуществляется забор селезенки и лимфатических узлов мыши. Из изъятых тканей готовится взвесь клеток. В эту взвесь в присутствии полиэтиленгликоля помещаются мутантные плазмоцитомы. В исследуемой среде происходит слияние клеток - образование гибридов (рис. 9).

Гибрид антителопродуцирующей клетки иммунизированной мыши и мутантной плазмоцитомы являетсягибридомой.

Рис. 9. Схема культивирования моноклональных антител

(из Основы иммунологии под ред. Воробьева А.А. и др., 2006).

Гибридома – это клеточный гибрид, способный бесконечно производить себе подобные клетки (клон), синтезирующие абсолютно идентичные по структуре и иммунным свойствам высокоспецифичные антитела – моноклональные антитела. Если потребность в антителах иссякает, гибридому замораживают. Размороженная гибридома способна вновь синтезировать антитела.

За открытие и разработку принципов выработки моноклональных антител с помощью гибридом Нильс Ерне, Георг Келер и Сезар Мильштейн в 1984 году были удостоены Нобелевской премии.

Для определения групп крови системы АВ0 применяются солевые растворы, содержащие моноклональные антитела к антигенам наружной мембраны эритроцитов – цоликлоны анти-А, анти-В, а также смесь этих антител.

Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, произведенными от антителопродуцирующих клеток разных штаммов, и являются иммуноглобулинами М. Цоликлоны наносятся на плоскость по одной большой капле и затем перемешиваются с маленькими каплями исследуемой крови. Покачивая тарелку, наблюдают за ходом реакции в течение 3 минут[‡].

*Если соответствующий антителу антиген в эритроцитах отсутствует, капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинация не наблюдается.

*Если комплементарный антителу антиген присутствует на мембране исследуемых эритроцитов, происходит агглютинация эритроцитов, и делается заключение о наличии в эритроцитах соответствующего антигена.

*Если агглютинация произошла при взаимодействии с обоими цоликлонами (и с анти-А, и с анти-В), исключают неспецифическую агглютинацию: смешивают каплю исследуемой крови с каплей физиологического раствора. Если эритроциты в физиологическом растворе не агглютинировали, кровь относят к группе АВ(IV).

При определении группы крови параллельно выявляются антитела плазмы исследуемой крови. Для этого используют стандартные эритроциты разных групп крови. Эритроциты с известными антигенами смешивают с сывороткой исследуемой крови и наблюдают за реакцией. По наличию или отсутствию агглютинации стандартных эритроцитов судят о содержании соответствующих антител системы АВ0 в тестируемой крови.