Метод мембранных фильтров (определение БГКП)

Для определения БГКП этим методом используют фильтровальный аппарат Зейтца, который перед началом исследований протирают тампоном, смоченным в спирте, стерилизуют прокаливанием и устанавливают на колбе Бунзена.

Затем в прибор помещают нитрацеллюлозный или ацетатцеллюлозный мембранный фильтр с диаметром пор не более 0,45 мкм. Такие фильтры предварительно стерилизуют методом кипячения. Выбранный для исследования объем воды пропускают через фильтр, присоединяя аппарат к вакуумному насосу. Если анализируют несколько проб воды, то для каждой из них используют отдельный мембранный фильтр. Перед фильтрованием новой пробы аппарат стерилизуют.

Колба Бунзена

Фильтр Зейтца и колба Бунзена для фильтрации воды

После пропускания через них воды фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри, располагая их на питательной среде фильтрующей стороной вверх. Чашки затем инкубируют в термостате 24 ч при 37ºС . В состав среды Эндо входят лактоза, индикатор и МПА, и поэтому БГКП образуют на ней колонии красного цвета с металлическим отливом. Подсчитывают количество таких колоний, готовят из них мазки и окрашивают по Граму, а также проверяют оксидазную активность. Оксидазоотрицательные бактерии, разлагающие лактозу до кислоты и газа, обнаруженные на фильтре, позволяют дать положительный ответ о наличие в воде БГКП. При анализе питьевой воды вычисляют количество БГКП, содержащихся в 100 мл.

Для дифференциации ОКБ (общих колиформных бактерий) и ТКБ (термотолерантных колиформных бактерий) каждую выросшую на фильтре колонию БГКП засевают в две пробирки с лактозной средой. Одну из пробирок предварительно прогревают до 44ºС с тем, чтобы инактивировать ОКБ. Затем эту пробирку инкубируют при этой же температуре в течение 24 ч (для подтверждения наличия ТКБ). Вторую пробирку с посевом ставят в термостат при температуре 37ºС на 48 ч, чтобы убедиться в наличии ОКБ.

К работе № 3

Микрофлора почвы

Состав микрофлоры почвы определяется климатическими, почвенно-географическими условиями и зависит от комплекса факторов – содержания источников питания, влажности, рН, аэрации, структуры почвы, способов обработки, взаимоотношений между микроорганизмами и др.

Основную массу почвенных микроорганизмов составляют сапрофитные и лишь незначительное количество приходится на долю патогенных видов.

Санитарно-микробиологическое состояние почвы оценивается на основании наличия бактерий - показателей фекального загрязнения. Почвы, с преобладанием санитарно-показательных бакте­рий, расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязненными фекалиями человека или животных. Присутствие в почве бактерий группы кишечной палочки (БГКП или колиформных) и энтерококков (разновидность Streptococcus faecalis) указы­вает на свежее фекальное загрязнение. Наличие бактерий родов Citrobacter и Enterobacter - на несвежее, a Clostridium perfringens - на давнее фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения индекса БГКП - количества бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1 г почвы, перфрингенс-титра - массы почвы (в граммах), в которой обнаружена 1 особь Clostridium perfringens, общей численно­сти сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий (ОМЧ) в 1 г почвы.

Патогенные микроорганизмы выявляют в объектах внешней среды чаще всего для того, чтобы оценить эпидемиологическую ситуацию и принять необходимые меры для ликвидации источников инфекции. В зонах активного земледелия почву исследуют на содержание в ней спор возбудителей столбняка, чтобы провести своевременно профилактику лиц, работающих в земледелии.

Нормативы: чистая почва: титр БГКП - 1 и выше; перфрингенс-титр - 0,01 и выше; ОМЧ - до 0,5 млн/г.

Загрязненная почва: титр БГКП - 0,9 - 0,01; перфрингенс-титр - 0,009-0,0001; ОМЧ-0,5-5,0 млн/г.

Сильно загрязненная почва: титр БГКП - 0,009 и ниже; перфрингенс-титр -0,00009 и ниже; ОМЧ – 5,1 млн/г и более.

Методы оценки: