Общие принципы диагностики острых кишечных инфекций.
К ОКИ относятся: эшерихиозы, вызываемые условно-патогенными и патогенными (энтеропатогенными, энтерогеморрагическими, энтероинвазивными и энтеротоксигенными) кишечными палочками, брюшной тиф, паратифы А и Б, сальмонеллезы, дизентерия, кишечные клебсиеллезы и кишечные иерсиниозы.
Методы их микробиологической диагностики включают следующие принципы:
1. Микроскопический метод диагностики, как правило, не приемлем, так как патогенные и непатогенные энтеробактерии имеют общие морфологические характеристики.
2. Для диагностики применяют бактериологический и серологический методы. Выбор метода диагностики зависит от клинических проявлений, места локализации возбудителя и фазы патогенеза болезни
Бактериологическая диагностика.
1. Забор материала. Характер материала зависит от первичной или вторичной локализации микроба-возбудителя. Если материалом служат испражнения, что чаще всего бывает, то их берут до начала или после суточного перерыва в антибактериальной терапии. Материал лучше забирать ректальной трубкой, тампоном со стерильной пеленки или стерильной пергаментной бумаги, специальным устройством для забора фекалий (ни в коем случае не допуская его контакта с дезинфектантами). Если материалом служит кровь, то забирают 10,0 мл крови из вены локтевого сгиба.
2. Транспортировка материала осуществляется медицинским работником в системе "стекло, металл" в течение не более трех часов после его забора или в консерванте с сопровождающими документами.
3. Питательные среды, используемые для бактериологического исследования, можно подразделить на три группы:
а) среды обогащения, создающие условия преимущественного размножения выделяемого возбудителя и основанные либо на принципе наличия в среде факторов активации роста данного микроба, либо на принципе подавления роста сопутствующих микробов-антагонистов. Первой группе соответствует среда Рапопорт, второй - селенитовая, магниевая, Мюллера, с пенициллином и т.д.;
б) средь/ дифференциально-диагностические - плотные питательные среды, содержащие дифференцирующий углевод - лактозу и индикатор. Кишечные палочки, разлагающие лактозу (лактозоположительные), растут в виде окрашенных колоний в зависимости от типа среды - в малиново-красный и розовый (среда Эндо, Плоскирева) или темно-синий (среда Левина) цвет. Клебсиеллы пневмонии разлагают лактозу в среде с индикатором бромтимоловым синим и образуют колонии желтого цвета, в то время как колонии лактозоотрицательных биоваров формируют колонии цвета среды. Сальмонеллы и шигеллы на средах Эндо, Левина, Плоскирева также не разлагают лактозу и дают бесцветные колонии;
в) среды накопления чистой культуры. Чаще применяется среда Олькеницкого (трехсахарный агар). Она состоит из столбика, скошенной части и включает лактозу, глюкозу и сахарозу, индикатор, реагенты для определения сероводорода и уреазы. Посев производят уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенной части. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза - на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды. При образовании газа - формируются пузырьки и разрывы в среде, при продукции сероводорода - наблюдается почернение по ходу укола, при продукции уреазы - изменение цвета среды на оранжевый.
4. Идентификация выделенных культур основана на определении:
· общего для семейства признака - грам- палочки;
· наличия капсулы (у клебсиелл);
· цвета колоний на чашечных средах;
· подвижности (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы
· неподвижны);
· биохимических свойств;
· антигенной структуры;
· чувствительности к антибактериальным препаратам;
· чувствительности к бактериофагам.
Антигенную структуру определяют по предварительному установлению
серогруппы, чаще с монорецепторными адсорбированными сыворотками,
а затем серовара тоже с адсорбированными сыворотками.
Серологическая диагностика: начинается с получения сывороток от
больных. В них обнаруживаются антитела в реакции агглютинации,
гемагглютинации, латекс-агглютинации или РСК. Диагноз основан на
обнаружении антител в диагностическом титре или нарастании титра антител
в динамике болезни.
92. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, семейство Enterobacteriaceae, р. Escherichia, E.coli
2. Морфология: Гр-, палочка, иногда капсула или микрокапсула, иногда есть перитрихии, подвижна или неподвижна, споронеобразующая
3. Тип питания: хемоорганотроф.
4. Биологические свойства:
а) хорошо растут на простых питательных средах
б) ферментируют гл и лактозу до кислоты и газа
5. АГ структура: О-антиген, К-антиген и Н-антиген.
6. Факторы патогенности и патогенез:
а) адгезины (капсула – также угнетает фагоцитоз, пили)
б) третья секреторная система
в) ферменты инвазии
г) эндотоксин (ЛПС)
д) энтеротоксин - активирует аденилатциклазу, приводит к водянистой диарее.
е) экзотоксины (шигоподобный, холероподобный)
ж)нуклеопротеиды – вызывают повышенную чувствительность к МБ
Адгезия на энтероцитах ® активный захват энтероцитами и их колонизация, фагоцитоз пейеровыми бляшками и разрушение лимфоцитов ® изменению функции энтероцитов, продукция гемолизинов, энтеротоксинов ® увеличение кол-ва цАМФ (водянистая диарея), иногда развитие колитов.
7. Клинические проявления:
а) эндогенные инфекции – гнойно-воспалительные процессов различных локализации (пиелиты, циститы, холециститы).
б) ОКИ: ЭПКП – сальмонеллоподобные инфекции, ЭТКП – холероподобные инфекции, ЭИКП – дизентериеподобные инфекции, ЭГКП – геморрагический колит.
8. Иммунитет: ГИО (АТ не обладает протективным действием).
9. Эпидемиология. Источник – больные люди или бактерионосители. ОПЗ – алиментарный. Используется как санитарный показатель для оценки загрязнений (коли-титр, коли-индекс). Устойчивы во внешней среде, месяцами сохраняются в почве, воде, испражнениях.
10. Профилактика: специфической нет. Неспецифическая: выявление больных и носителей, их изоляция, лечение.
11. Лечение: бифидобактерин, лактобактерин – для детей раннего возраста, АБ (хлорамфеникол, цефалоспорины, фторхинолон).
12. Диагностика:
Цель: выделение чистой культуры и отличие ее от УПН.
Материал для исследования: фекальные массы.
Бактериологический метод:
1-й этап - посев на среду Эндо (Левина);
2-й этап:
а) обнаружение окрашенных колоний, микроскопия их по Граму;
б) РА на стекле со смесью сывороток к патогенным серогруппам (предварительная дифференциация патогенных эшерихии от условнопатогенных)
в) отсев положительно реагирующей в РА колонии на среду Олькеницкого;
3-й этап:
а) учет изменения среды Олькеницкого (посинение и разрыв всей среды);
б) определение чистоты выделенной культуры;
в) определение серовара патогенной эшерихии (путем постановки РА с отдельными ОК-сыворотками на стекле и в пробирках с живой (определение К-антигена) и убитой кипячением (определение О-антигена) культурой;
г) проба на индол, подвижность и чувствительность к антибиотикам.
Серологический метод - постановка РА с сывороткой больного (на 2-ой неделе заболевания).
93. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, семейство Enterobacteriaceae, р. Salmonella, в. S. typhi, S. parathyphi A, S. parathyphi B, S. typhimurium, S. enteritis, S. haifa, S. panama, S. anatuma
2. Морфология: Гр-, палочка, мелкая, есть микрокапсула, перитрихии, споронеобразующая, подвижна
3. Тип питания: хемоорганотроф
4. Биологические свойства:
а) лактозоотрицательные (диагностический признак)
б) ферментируют сахара до кислоты и газа (кроме S. thyphi)
в) протеолитические свойства слабо выражены
5. АГ структура: О- (ЛПС), Н- (в двух фазах – специфической и не специфической), иногда Vi-AГ (особый К-АГ).
6. Факторы патогенности и патогенез:
а) капсула, пили
б) третья секреторная система – препятствует слиянию фагосом и лизосом в макрофагах
в) эндотоксин (ЛПС) – индукция лихорадки, нарушение микроциркуляции
г) холероподобный энтеротоксин – активация аденилатциклазы, водянистая диарея
Адгезия на энтероцитах и их колонизация ® проникают в макрофаги ® размножение ® бактериемия (возможно интенсивное разрушение бактерий с высвобождением энтеротоксина и эндотоксина).