Изучение активности гуморальных факторов врожденного иммунитета

Вопросы для подготовки

1. Бактерицидные пептиды (дефензины, кателицидины и т.д.) и их роль в естественном иммунитете. Механизмы действия на бактериальную клетку.

2. Система комплемента. Особенности альтернативного, лектинового и классического путей комплемента.

3. Альтернативный путь комплемента.

4. Классический путь комплемента.

5. Эффекторные факторы комплемента: относительная роль опсонизации и лизиса. Малые фрагменты комплемента.

6. Белки острой фазы. Пентраксины. Роль во врожденном иммунитете.

7. Лактоферрин и лизоцим. Роль во врожденном иммунитете.

8. Решить задачу:

Обследуемый А., 18 лет, с 7 лет находящийся на диспансерном учете в группе ЧДБ (часто длительно болеющие), был направлен в клинико-иммунологическую лабораторию для оценки состояния факторов естественной резистентности (обследование проведено в весеннее время). Сравнить полученные результаты лабораторного исследования сыворотки крови и сделать заключение о состоянии естественной резистентности обследуемого (с объяснением).

ФИО обследуемого	Бактерицидная активность сыворотки (БАС)	Лизоцим, мкг/мл	Комплемент, мг/мл
Кол-во колоний в контрольной чашке	Кол-во колоний в опытной чашке	БАС, %
Нормативные значения (пол мужской, 18 лет, весна)*	–	–	80,6	6,8	1,23
Обследуемый А.			?	5,0	0,81

* – нормативные значения показателей естественного иммунитета для населения ХМАО-Югры

Практическая работа

З а д а н и е №1

Определить бактерицидную активность собственной кожи по Клемпарской (индекс бактерицидности). Оформить протокол в виде рисунков. Сделать заключение.

0¢	10¢

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

На поверхность кожи предплечья (ладонная сторона) наносят пипеткой 1 каплю культуры E. coli. Распределяют суспензию стерильным стеклянным шпателем. Делают первый отпечаток с кожи пластинкой со средой Эндо (0 мин экспозиции). Через 10 мин экспозиции контакта микробов и кожи делают второй отпечаток (рядом с первым, но не с того же участка). Чашки с предметными стеклами-отпечатками помещают в термостат на 24 часа. Подсчитывают количество колоний на пластинках со средой Эндо. На основании полученных результатов рассчитывают индексы бактерицидности (ИБ) по формуле:

ИБ = (К_о – К₂₀)/К_о 100%,

где К_о – количество колоний сразу после контаминации кожи;

К₁₀ – количество колоний через 10 мин после контаминации кожи.

В норме ИБ > 95%.

З а д а н и е №2

Определить активность (титр) лизоцима в собственной слюне. Учесть полученные результаты и данные занести в таблицу. Оформить протокол. Сделать заключение.

Ответить на вопросы:

1. Почему в качестве объекта использован Micrococcus luteus?

2. Зачем поставлен контроль культуры?

3. Что такое титр лизоцима в слюне?

Разведения слюны/ Ингредиенты	1 : 20	1 : 40	1 : 60	1 : 80	1 : 160	1 : 320	1 : 640	Контроль
Слюна 1 : 10, мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	–
Физ.раствор, мл	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	2,0
2-х млрд. взвесь M. luteus, капли
Инкубация 20 мин, 37°С
Результат

в дез. раствор

«+» – лизис культуры, «–» – отсутствие лизиса

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

В пробирках готовят разведения слюны, начиная от 1:10 и заканчивая 1:640. В контрольную пробирку вместо слюны добавляют физиологический раствор. К каждому разведению добавляют 2-х млрд. взвесь микрококка (M. luteus) по 5 капель. Ставят в термостат на 20 мин. Определяют титр лизоцима по наличию просветления в среде (полный лизис микрококка). В норме титр лизоцима > 1:320.

Занятие №4

Цитокины