Иммунологическая лаборатория, объекты и этапы исследования
Определение лейкоцитарной формулы
Вопросы для подготовки
1. Предмет и задачи иммунологии. История становления и развития иммунологии как науки.
2. Иммунная система. Общее понятие и определение. Центральные и периферические органы иммунной системы.
3. Определение понятия «Иммунитет» и «Иммунный ответ». Классификация видов и форм иммунитета, их общая характеристика
4. Генез (развитие и дифференцировка) лимфоцитов и их значение в формировании клеточного и гуморального иммунитета. Предшественники Т- и В-лимфоцитов. Рециркуляция лимфоцитов.
5. Антигены, определение, химическая природа, строение и свойства.
6. Классификация антигенов. Тимусзависимые и тимуснезависимые антигены.
7. Антигенная структура микроорганизмов.
8. Структура лаборатории клинической иммунологии. Задачи. Техническая оснащенность. Автоматизация.
9. Основы техники безопасности. Санэпидрежим. Дезинфицирующие средства. Правила работы с дезинфицирующими средствами.
10. Этапы лабораторных иммунологических исследований: преаналитический, аналитический, постаналитический. Задачи этапов, характеристика возможных ошибок.
11. Виды биоматериала, поступающего на исследование. Техника обработки, получение проб, условия хранения проб.
12. Подпишите органы иммунной системы к которым направлены указатели.
13. Схематично зарисуйте антигенную структуру бактерий, обозначьте на рисунке все антигены.
    |  |
Практическая работа
З а д а н и е №1
Провести определение лейкоцитраной формулы своей крови. Оформить протокол в виде рисунка. Сделать заключение.
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
Для установления лейкоцитарной формулы крови человека или лабораторных животных необходимо правильно приготовить мазки крови, которые получают следующим образом. На середину хорошо вымытого и обезжиренного предметного стекла без царапин наносят каплю исследуемой крови величиной с «просяное зерно». Затем делают мазок при помощи другого шлифованного предметного или покровного стекла более узкого, чем основное предметное стекло. При этом узкое стекло прикладывают к основному стеклу под углом 45°. Дают капле крови растечься по краю шлифа и быстро продвигают его к противоположному концу стекла. Мазки крови должны быть равномерными и тонкими и не доходить до края предметного стекла. Мазки крови сушат на воздухе, а затем фиксируют в закрытой кювете химически чистым этиловым спиртом в течение5 минут. Зафиксированные мазки окрашивают в течение 20 минут по методике Романовского-Гимза. В основе методики лежит способность смеси основных (азур II) и кислых красителей (водорастворимый желтый эозин) окрашивать элементы клеток крови в разные цвета и оттенки. После окраски препараты крови промывают дистиллированной водой и сушат на воздухе. Плохое приготовление мазка приводит к не равномерному распределению
Лейкоцитов и дает при подсчете не правильное соотношение их отдельных популяций. В толстом мазке форменные элементы крови трудноразличимы. Подсчет лейкоцитарной формулы крови осуществляют с помощью светового микроскопа при иммерсионном увеличении объектива×90 (или при увеличении объектива×20 иокуляре×10). Начинают подсчет клеток крови с середины окрашенного мазка, передвигая предметное стекло зигзагообразно от центра к краю по всей поверхности мазка (зубчатая линия Меандра). Более крупные по величине клетки крови располагаются по краям препарата. Считают подряд все встречающиеся в поле зрения форменные элементы (всего200 клеток), распределяя их в отдельные популяции с учетом величины клеток, формы и окраски ядра и цитоплазмы. Определяют процентное содержание клеток различных популяций в исследуемом образце. Сравнивают полученную лейкоцитарную формулу анализируемой крови с представленными в табл. 2 приложения данными о количественном содержании отдельных популяций клеток в крови людей разного возраста.
Справочный материал для оформления протоколов
Таблица Лейкоцитарная формула крови
| Показатель | Среднее значение М±т у людей в возрасте | ||
| Лейкоциты, 109/л Лимфоциты, % Лимфоциты, 10 /л | 18–25 лет 6,53±0,025 (3,23 – 9,60) 30,8±1,07 18–48 2,02±0,15 (0,85–4,19) | 27–55 лет 5,60+0,21 (3,12–9,50) 29,4+1,11 17–46 1,65±0,11 0,72–4,10 | 60–80 лет 4,90±0,26 (2,65–8,60) 27,1±1,00 16–44 1,33+0,12 0,60–3,50 |
| Моноциты, % | 6,50±0,27 (2–10) | 6,20±0,24 (2–10) | 5,90±0,25 (1–10) |
| Нейтрофилы Палочкоядерные Сегментоядерные Эозинофилы, % | 1,80+0,02 1–5 58,2+1,13 (40–72) 2,30±0,03 (1–5) | 1,56±0,02 1–5 60,30+1,118 43–73 2,20±0,03 1–5 | 1,60±0,02 1–5 62,60±1,15 43–75 2,4+0,03 1–5 |
| Базофилы, % | 0,40±0,003 0–1 | 0,40+0,003 0–1 | 0,40±0,003 0–1 |
| Т–лимфоциты, % Т–лимфоциты,109/л В–лимфоциты, % | 63,7± 1,3 5 39–81 1,28+0,11 0,58–3,25 9,6±0,78 3–26 | 67,3±1,21 40–84 1,11±0,10 0,40–3,12 8,20±0,88 2–25 | 71,2±1,30 38–85 0,95±0Д0 0,33–2,80 8,50+0,85 2–31 |
| В–лимфоциты, 109/л | 0,19+0,10 0,3–3,5 | 0,14±0,01 0,02–0,98 | ОД 1+0,01 0,2–0,92 |