Состав и применение иммуноглобулина человека против гепатита В

Ответ: ИММУНОГЛОБУЛИН ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВ ГЕПАТИТА В.

Получен из сыворотки (плазмы) крови здоровых доноров, иммунизированных вакциной гепатита В рекомбинантной дрожжевой жидкой.

Применяют с целью экстренной профилактика вирусного гепатита В у детей и взрослых:

• новорожденных от матерей - носителей HBsAg или больных острым гепатитом В;

• лиц, не проходившим ранее вакцинацию против гепатита В или с уровнем llBs-антител ниже защитного, после случайных заражений в результате контакта с инфицированным материалом;

• лиц, относящихся к группам высокого риска инфицирования вирусом гепатита В.

Экзаменационный билет №13

1. Механизм взаимодействия антител с антигенами. Афинность и авидность. Нормальные, моноклональные, полные и неполные антитела. Свойства антител. Динамика антителообразования при первичном и вторичном ответе.

Антиген — антитело реакция — специфическое взаимодействие антител с соответствующими антигенами, в результате которого образуются комплексы антиген — антитело (иммунные комплексы). Часто конечным результатом этой реакции является связывание токсинов, обездвиживание вирулентных бактерий, нейтрализация вирусов. Реакция антиген — антитело протекает в две фазы, которые различаются между собой по механизму и скорости. Первая фаза — специфическое соединение активного центра антитела с соответствующими группами антигена или гаптена. Вторая — неспецифическая фаза, следующая за первой, — визуально наблюдаемая реакция. При взаимодействии антител с простыми гаптенами вторая фаза, как правило, отсутствует. При некоторых условиях, например в отсутствие солей, первая фаза может осуществиться, а вторая — нет. Первая фаза протекает всегда быстро, а вторая иногда очень медленно. Соединение антигена с антителом обратимо; прочность соединения, называемая аффинитетом, может быть количественно измерена с помощью определения константы ассоциации. Существует также термин авидности антител, который употребляется для описания суммарной силы взаимодействия поливалентного антитела с полидетерминантным антигеном. В процессе взаимодействия с АГ участвует антигенсвязывающийцентр -паратоп,который локализован в Fab-фрэгменте. AT взаимодействует не со всей молекулой АГ сразу, а с ееантигенной детерминантом -эпитопом. AT отличаетспецифичность взаимодействия- способность связываться со строго определенной антигенной детерминантой.

Важное значение имеют особенности AT и АГ и условия, в которых происходит их взаиютмодействие АГ+АТ=ИК . Силы удерживающие ИК- водородные связи, электро-статическое и гидрофобное взаимодействие, Ван-дервальсовы силы. По сравнению с ковалентными связями сипы нековалентного межмолекупярного взаимодействия по отдельности весьма слабы, но при большом числе слабых взаимодействий суммарная энергия связывания получается значительной. Сила нековалентной связи зависит прежде всего от расстояния между взаимодействующими химическими группами. Взаимодействие антитела с молекулой антигена сопровождается, в свою очередь, изменениями пространственной структуры антигена. Так, метмиоглобин превращается в апомиоглобин в результате комплексообразования с антителом, направленным к апомиоглобину, а лишенная активности b-галактозидаза — в активный фермент в результате реакции с антителами к активной форме b-галактозидазы. Таким образом, при взаимодействии антигена с антителом оба соединения оказывают взаимное влияние на собственную пространственную конформацию. Возникающие конформационные изменения имеют обратимый характер.

Извлеченные из иммунных комплексов антитела сохраняют антигенсвязывающую активность и не отличаются по химическим и физическим свойствам от нативных антител. Характер реакций, протекающих во второй фазе А. — а. р., определяется в значительной мере физическими свойствами антигена и проявляется в виде нескольких основных феноменов (агглютинации, нейтрализации токсинов и преципитации). Феномен агглютинации заключается в том, что микроорганизмы, животные клетки или другие корпускулярные антигенные частицы, находящиеся во взвеси, под влиянием антител склеиваются между собой. Реакция агглютинации нашла широкое применение для определения групп крови человека, резус-фактора, количественного определения антител и антигенов. Реакция нейтрализации токсинов основана на свойствах антитоксинов (антител против токсинов), которые, соединяясь с соответствующими токсическими веществами, нейтрализуют их. Феномен преципитации заключается в образовании нерастворимых комплексов антиген — антитело в результате соединения растворимого антигена со специфическими антителами и выпадании этого комплекса в осадок.

. Свойства AT

• Аффинность AT - прочность связи одного антигенсвязывающвго центра с индивидуальным эпитюпом АГ. Зависит от степени пространственного соответствия (комплементарности) структуры антигеисвязывающего центра и эпитопа.

Наибольшим аффинитетом обладают моноклональные AT, наименьшим — нормальные AT. Аффинность антител существенно меняется в процессе иммунного ответа в связи с селекцией наиболее специфичных клонов В- лимфоцитов.

• Авидность AT- прочность связывания AT и АГ-суммарная сила. Определяется аффинностью и числом антигенсвязывающих центров. При равной аффинности наибольшей авидностью обладают антитела класса М, тк они имеют 10 антигенсвязывающих центров

Поливалентность АГ и AT существенна усиливает прочость их соединения, поскольку для диссоциации ИК необходим разрыв сразу всех связей Применительно к физиологическим условиям более адекватно рассматривать авидность а не аффитность AT, тк природные АГ поливалентны

- специфичность, т. е. способность вступать во взаимодействие с антигеном, аналогичным тому, который индуцировал (вызвал) их образование;

Моноклональные антитела — антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы. Моноклональные антитела могут быть выработаны на почти любое вещество (в основном белки и полисахариды), которое антитело будет специфически связывать. Они могут быть далее использованы для детекции(обнаружения) этого вещества или его очистки. Моноклональные антитела широко используются в биохимии, молекулярной биологии и медицине. В случае их использования в качестве лекарства его название оканчивается на -mab (от английского «monoclonal antibody»).

Антитела неполные

Ат, реагирующие с Аг одним паратопом, в результате чего образования преципитата не происходит (исходя из этого, их еще называют непреципитирующими). По структуре не отличаются от полных Ат. Предварительная инкубация Аг с Ат. н. приводит к потере способности Аг взаимодействовать с полными Ат, в том числе давать обычные серол. реакции. Поэтому Ат н. называют еще блокирующими. В частности, Ат н. могут блокировать соединение аллергена с адсорбированными на тучных клетках IgE и тем самым предупреждать развитие анафилаксии или атопии. Выявляют Ат н. с помощью прямой или непрямой реакции Кумбса (см.), блокирующей пробы и иммуноферментным методом.

антитела полные- Антитела, обусловливающие при взаимодействии с антигеном in vitro видимые серологические реакции агглютинации, преципитации, связывания комплемента.

Антитела нормальные(естественные) - Ат против Аг, попадание к-рых в организм невероятно или не отмечено. Первая группа Ат н. - это изоантитела, напр., изогемагглютинины, присутствие к-рых легко объяснимо. Вторая группа - это Ат н. против бактер. Аг и Аг различных животных и растений. Механизм синтеза Ат н. рассматриваемого типа не ясен. Предполагается, что они могут быть результатом бытовой иммунизации, иммунизации гетерофильными Аг, спонтанного синтеза. Обнаруживаются не у всех людей, в низком титре, относятся к классу IgG. Антимикробные Ат н. выполняют защитную функцию

Если организм впервые встречается с Аг, то развивается первичный иммунный ответ, а при повторном контакте — вторичный ответ

Первичный иммунный ответ. Появлению антител ( АТ ) предшествует латентный период продолжительностью 3~5 сут. В это время происходит распознавание Аг и образование клонов плазматических клеток. Затем наступает логарифмическая фаза, соответствующая поступлению антител ( АТ ) в кровь; её продолжительность — 7-15 сут. Постепенно титры антител ( АТ ) достигают пика и наступает стационарная фаза, продолжительностью 15-30 сут. Её сменяет фаза снижения титров AT, длящаяся 1-6 мес. В основу пролиферации клеток-продуцентов AT заложен принцип селекции. В динамике антителообразования титры высокоаффинных AT постепенно нарастают: после иммунизации аффинность AT к Аг постоянно увеличивается. Первоначально образуются IgM, но постепенно их образование уменьшается и начинает преобладать синтез IgG. Так как переключение синтезов от IgM к IgG не меняет идиотипа AT (то есть его специфичность по отношению к конкретному Аг), то оно не связано с клональной селекцией. Особенности первичного ответа — низкая скорость антитело -образования и появление сравнительно невысоких титров AT.

Вторичный иммунный ответ.После антигенной стимуляции часть В- и Т-лимфоцитов циркулирует в виде клеток памяти. Особенности вторичного иммунного ответа — высокая скорость антителообразования, появление максимальных титров антител ( АТ ) и длительное (иногда многолетнее) их циркулирование.

Основные характеристики вторичного имунного ответа:
• образование антител ( АТ ) индуцируется значительно меньшими дозами Аг;
• индуктивная фаза сокращается до 5-6 ч;
• среди антител ( АТ ) доминируют IgG с большой аффинностью, пик их образования наступает раньше (3-5 сут);
• Антитела ( АТ ) образуются в более высоких титрах и циркулируют в организме длительное время.

2. У больного, поступившего в урологическое отделение с высокой температурой, была взята для исследования моча, засеянная на кровяной агар и в сахарный бульон. Через сутки в посевах на плотную среду выявили небольшие выпуклые колонии с зоной гемолиза, в бульоне появился рост в виде скудного хлопьевидного осадка. Врач-бактериолог сделал вывод о стрептококковой инфекции. Обоснованно ли такое заключение? Какие методы нужно дополнительно использовать?

Эталон ответа: Заключение врача обосновано (культуральные свойства, факторы патогенности - гемолизины). Но необходимы дополнительные исследования (выделение чистой культуры, ее идентификация по биохимическим, антигенным свойствам, серотипирование, обнаружение токсина А), так как стрептококк – это условно-патогенный микроорганизм и может быть выделен из материала от больного ошибочно.

Свой ответ: Заключение врача обосновано, так как основным методом идентификации является бактериологический метод (культуральные свойства(на агаре с кровью стрептококк образует мелкие (1—2 мм в диаметре) по­лупрозрачные палочки, сероватые или бесцветные, которые хорошо снимаются петлей и имеют зоны гемолиза, В жидких питательных средах для стрептококков характерен придонный, часто поднимающийся по стенкам рост. При взбалтывании зернистая или хлопьевидная взвесь.), факторы патогенности - гемолизины). Но необходимы дополнительные исследования (выделение чистой культуры, ее идентификация по биохимическим(метаболизируют глюкозу с образованием молоч­ной и других кислот), антигенным свойствам, серотипирование, обнаружение токсина А), так как стрептококк – это условно-патогенный микроорганизм и может быть выделен из материала от больного ошибочно.

Исследуемый материал за­севают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из коло­ний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcuspyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитические 3) ?-гемолитические, образующие вокруг колонии пол­ностью прозрачную зону гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков.
Серодиагностика: устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют для подтверждения диагноза ревматизма.