Принципиальная схема лабораторной диагностики ВИЧ инфекции

См. теоретическую справку

Исследуемый материал:

____________________

Работа № 3. Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции

А) Цель: учесть готовый результат реакции ИФА, поставленной с целью выявления специфических антител к gр 120 и gр 41 для выявления антител в крови обследуемого, с подозрением на инфицирование ВИЧ. Сделать вывод о наличии инфицирования. Составить план дальнейших лабораторных исследований. Начертить принципиальную схему выявления антигенов ВИЧ с помощью иммуноблоттинга.

Учесть готовый результат ИФА.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Опыт Негативный контроль Позитивный контроль

gр 120

gр 41

Результат:______________________________________________________________________

Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофареза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции. Антиген возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигена. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от не связавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс (Аг+Ат больного + Ат против Ig человека) выявляют добавлением субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.

промыли промыли

*

+ + + субстрат

Ат АГС

Инфицирован Носитель СПИД

Работа № 4. Иммунологическая лабораторная диагностика СПИДа

1. Цель: определить процент выживаемости больных СПИДом если количество Т-хелперов в 1 мл крови составляет 150.

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. Цель: определить тяжесть течения заболевания СПИДом у двух больных, если соотношение Th/Ts у одного больного равно 0,7, а у другого 0,3.

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. Цель: Определить стадию инфекционного заболевания и характер инфекционного процесса. При обследовании группы риска выявлен здоровый пациент, у которого в крови

определились антитела к ВИЧ, а вирус выявить не удалось. Соотношение Th/Ts равно 2,0,

содержание Т-хелперов в одном мл крови составляет 800.

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. Цель: Определить стадию инфекционного заболевания и характер инфекционного процесса. Больной обратился с жалобами на длительную субфебрильную температуру,

упорный кашель, потерю в весе тела, понос. При вирусологическом обследовании из

крови больного выделен ВИЧ и антитела к ВИЧ. Соотношение Th/Ts равно 0,8,

количество Th в 1мл крови составило 400.

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5. Цель: Определить стадию инфекционного заболевания и характер инфекционного процесса. Больной с заболеванием саркомой Капоши обследовали на наличие СПИДа. В крови выявлен и вирус и антитела к ВИЧ. Количество Т-хелперов составило 80 на 1 мл крови, а соотношение Th/Ts равно 0.15.

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Описать препараты:

Цель: Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

Вакцина «Энджерикс»

2.____________________________________________________________________________

3.____________________________________________________________________________

4.____________________________________________________________________________

5.____________________________________________________________________________

6.____________________________________________________________________________

Ig человека против гепатита В

2. __________________________________________________________________________

3. __________________________________________________________________________

4. __________________________________________________________________________

5. __________________________________________________________________________

6. __________________________________________________________________________

1. Интерферон лейкоцитарный человеческий2.____________________________________________________________________________

3.____________________________________________________________________________

4.____________________________________________________________________________

5.____________________________________________________________________________

6.____________________________________________________________________________

Выполните задания для самоконтроля:

ГЕПАТИТ В

Таксономия возбудителя:

Семейство____________________________________________________________________

Род__________________________________________________________________________

Вид__________________________________________________________________________

Морфологические свойства__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Места первичной локализации___________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Длительность болезни_______________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия)_____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты)__________________________________________________________________

ГЕПАТИТ D

Таксономия возбудителя:

Семейство____________________________________________________________________

Род__________________________________________________________________________

Вид__________________________________________________________________________

Морфологические свойства__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных____________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота______________________________________________________________________

Места первичной локализации_________________________________________________________________

Инкубационный период_____________________________________________________________________

Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вид инфекции (генерализованная, локальная)____________________________________________________________________________________________________________________________________

Длительность болезни_______________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Лабораторная диагностика____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия)_____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты)________________________________________________________________

ГЕПАТИТ С

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические свойства__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных____________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Места первичной локализации___________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вид инфекции

(генерализованная,локальная)____________________________________________________

Длительность болезни____________________________________________________________________

Иммунитет_________________________________________________________________

Лабораторная диагностика___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия)_____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты)__________________________________________________________

ВИЧ

Таксономия возбудителя:

Семейство____________________________________________________________________

Подсемейство_________________________________________________________________

Тип__________________________________________________________________________

Морфологические свойства____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________Антигенная структура___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Назовите биологические жидкости больного ВИЧ-инфекцией, содержащие высокие концентрации вируса: ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Перечислите возможные пути передачи возбудителя. _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Какими методами лабораторной диагностики устанавливают наличие ВИЧ-инфекции: ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия)__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)__________________________________________________________________Лечение (препараты)__________________________________________________________________

Подпись преподавателя__________________________________________________________

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В инфекционную больницу обратился мужчина с клиническими признаками гепатита. Больной являл­ся наркоманом. Какой исследуемый материал можно взять для проведения лабораторных исследований, чтобы подтвердить диагноз гепатита В? Какие методы лабораторного исследова­ния можно использовать?

2. В иммунологическую лабораторию Центра по профилактике СПИДа обратились два человека с просьбой об­следовать их на ВИЧ-инфекцию. Было проведено серологиче­ское исследование путем постановки ИФА. Оценить результат исследования, оформить протокол и сделать вывод.

Для учета результатов исследования выделяется планшет с ИФА для серологической диагностики ВИЧ-инфекции.

Диагностикам	Сыворотки
обследуемого 1	обследуемого 2	положительная контрольная	отрицательная контрольная
ВИЧ-1	-	+	+	-
I вариант	(отсутствие окрашивания)	(окрашивание)
ВИЧ-2	-	-	+	_
I вариант
ВИЧ-1	-	-	+	-
II вариант
ВИЧ-2 II вариант	-	+	+	_

Вопросы 1. У кого изобследуемых возникло подозрение на ВИЧ-инфекцию? По­чему?

2. Какие дополнительные исследования нужно провести для подтверждения либо исключения ВИЧ-инфекции?

Пример решения задачи

В инфекционную больницу поступил мужчина 20 лет с температурой 38 °С, жалобами на боли в правом под­реберье, иктеричностью склер. Больной является наркоманом. Возникло подозрение на гепатит В. Для подтверждения диагно­за был проведен ИФА в целях обнаружения HBsAg и антител к HBcAg. Учесть результат реакции, оформить протокол, сде­лать вывод.

Для учета результатов выделяются исследования планшеты с ИФА для серологической (обнаружение AT) и экспрессной (обнаружение АГ) диагностики гепатита В.

Вопросы Подтвержда­ется ли диагноз гепатита В у обследуемого? Почему?

Решение. Студент учитывает данные ему результаты ис­следований, заполняет протокол и делает вывод: У обследуе­мого подтвержден диагноз гепатита В, так как у него обнару­жены антитела к HBcAg вируса гепатита В и выявлен HBsAg.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПАРАВКА