Классический путь Альтернативный путь

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФГАОУ ВО «КРЫМСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени В. И. ВЕРНАДСКОГО»

МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ С.И.ГЕОРГИЕВСКОГО

Практические задания

По иммунологии

(учебно-практическое пособие)

Ф.И.О. _______________________________________________________

Факультет _____________________________________________________

Курс______________________________________________________

Группа _______________________________________________________

Симферополь – 2017 г.

УДК 579 : 578 : 577.27 (075)

ББК 52.64

П 69

Практические задания по иммунологии (учебно-практическое пособие к практическим занятиям студентов) / Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии медицинской академии им. С.И Георгиевского «Крымского Федерального университета имени В. И. Вернадского»

- Симферополь, 2017 г. - 90 с.

Учебно-практическое пособие «Практические задания по иммунологии» составлено доцентом, к.м.н. Л.В. Тышкевич, доцентом, к.м.н. Н.В. Павловой, доцентом, к.б.н. И.Б. Андроновской, старшим преподавателем, к.м.н. Т.А. Сарачан, ассистентами О.Н. Постниковой, М.А. Кирсановой.

Пособие предназначено для студентов медицинских факультетов и включает 17 тем занятий по иммунологии, в которых данные представлены и структурированы таким образом, чтобы обеспечить самостоятельную подготовку студентов и повысить эффективность освоения материала в процессе проведения практического занятия.

Пособие составлено в форме, которая поможет студенту после освоения теоретического материала и овладения практическими навыками самостоятельно создать конспект по иммунологии. Такой конспект облегчит подготовку студентов к контрольным работам по иммунологии и при подготовке к зачету по специальности «иммунология».

Пособие включает перечень вопросов, ответы на которые студент должен знать, и список практических навыков, которыми студент должен обладать.

Рекомендовано к изданию учебно-методической комиссией Медицинской Академии им С.И. Георгиевского.

ISBN 5 – 89481 – 118 – Х

Дата _____________

Занятие 1

Тема: Естественный (врожденный) иммунитет. Механизмы распознавание патогенов: паттерны микроорганизмов и «изменённое своё». Паттерн-распознающие рецепторы. Механические и физиологические факторы врожденного иммунитета

Вопросы для обсуждения:

1. Факторы неспецифической защиты организма (внешние барьеры, клеточные и гуморальные факторы).
2. Защитные свойства кожи и слизистых.

3. Фагоцитоз. Характеристика клеток, участвующих в реакциях фагоцитоза.

4. Стадии фагоцитоза. Завершенный и незавершенный фагоцитоз.

5. Естественные киллеры (ЕК): характеристика функций. Распознавание естественными киллерами клеток мишеней и механизмы цитотоксичности.

6. Воспаление как универсальная защитная реакция организма от патогенов.

1. Понятие о паттернах («образы», «маркеры»):

а) РАМР (pathogen associated molecular pattern) – патоген- ассоциированные молекулярные структуры – «чужое»;

б) DAMP (damage- associated molecular pattern)- молекулярные структуры, ассоциированные с повреждением собственных клеток и тканей – « изменённое своё».

8. Паттерн- распознающие рецепторы- PRRs (pattern recognition receptors): Toll-подобные, эндоцитозные, растворимые.

9. Toll-like рецепторы (TLRs) гранулоцитов, макрофагов, их роль в распознавании патогенов и активации механизмов врожденного иммунитета.

10. Система белков комплемента. Пути его активации и эффекторные биологические функции.

11. Антимикробные пептиды (лизоцим, дефензины, кателициды).

12. Интерфероны. Классификация и свойства.

13. Механизм противовирусного действия альфа-интерферона. Применение интерферонов в медицине.

Практические задания:

1. Демонстрация незавершенного фагоцитоза. Промикроскопировать препараты из гнойного отделяемого уретры больного гонореей, окрашенные щелочным метиленовым синим и по Граму. Препараты зарисовать.

Рис. 1. Фагоцитоз гонококков. Окраска по Грамму	Рис. 2. Фагоцитоз гонококков. Окраска щелочным метиленовым синим

2. Изучить основные мембранные рецепторы макрофага и указать их функции.

3. Изучить основные паттерны микроорганизмов и толл-подобные рецепторы для их распознавания.

}   }

Паттерн- распознающие рецепторы.     Паттерны микроорганизмов

4. Изучить схему строения TOLL-подобных рецепторов и их клеточную локализацию.

	Строение TOLL-подобных рецепторов Внешний домен содержит повторяющиеся последовательности с высоким содержанием лейцина и цистеина; он обеспечивает взаимодействие рецептора с компонентом м/о.   TIR-домен (Toll/IL-1 receptor and resistance domain)- цитоплазматический (C-концевой) или внутренний домен – проводит сигнал от активированного TLR внутрь клетки
	Локализация Toll-подобных рецепторов	Мембранные Toll-подобные рецепторы.   Эндосомные (внутренние) Toll-подобные рецепторы)

5. Изучить схему механизмов действия ЕК на клетки-мишени.

KIR – killer cell immunoglobulin-like receptor

6. Изучить схемы классического и альтернативного путей активации комплемента.

Микробные паттерны и PRRs

Защита организма от патогенов осуществляется за счет скоординированной работы систем врожденного и адаптивного иммунитета. Из сотен тысяч представителей микромира (бактерии, грибы, простейшие, вирусы) примерно 3500 могут быть причиной инфекционных заболеваний. Распознавание «чужого» после инфицирования происходит быстро (минуты, часы). Это объясняется тем, что в строении микроорганизмов есть однотипные, консервативные молекулярные структуры, названные паттернами – образами (pathogen associated molecular patterns –PAMP). К микробным паттернам относят липополисахариды (ЛПС), липотейхоевые кислоты, пептидогликан, флагеллин, зимозан, мотивы нуклеиновых кислот бактерий, вирусов.

Паттерны (патоген-ассоциированные молекулярные структуры – pathogen associated molecular patterns-PAMP)–консервативные, присущие только патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, молекулярные структуры: Липополисахарид, липопротеин, пептидогликан,липоарабиноманнан (гликолипид микобактерий), флагеллин, зимозан (грибов), однонитевая РНК вирусов (sRNK), двунитевая РНК вирусов (ssRNK), мотивы ДНК бактерий или вирусов – CPG (cytosine phosphate guanosin).

Эти «образцы» распознаются образраспознающими рецепторами (pattern recognition receptors – PRRs). PRRs являются носителями эволюционной памяти многоклеточных организмов о том, что такое «свое» и как оно отличается от чужого.

Группы PRRs:

1. рецепторы передачи сигналов;

2. рецепторы эндоцитоза;

3. секретируемые рецепторы.

1. Рецепторами передачи сигналовявляются Тоll- рецепторы и Тоll-подобные – TLR (toll-like receptor, рецепторы «звонящие, сигнализирующие о появлении чужого»). TLR являются гомологами Тоll- рецепторов мух Drosophila, защищающих их от инфекций. Они имеются на мембранах макрофагов, нейтрофилов, дендритных клеток, В-лимфоцитов, эндотелиальных и эпителиальных клеток.

TLR в оновном экспрессированы на поверхности клеток, а часть субпопуляции (TLR7, TLR8, TLR9 и в некоторых случаях TLR3) – во внутриклеточных компартментах (эндосомах). Наряду с TLR к сигнальным рецепторам относят NOD1- и NOD2 рецепторы (NOD – nucleotide-binding oligomerization domain), расположенные в цитоплазме и распознающие различные фрагменты пептидогликана.

TLR клеток активно реагируют на микробные лиганды: TLR4 является главным рецептором для бактериального липополисахарида ЛПС. TLR3 взаимодействует с двунитевой вирусной РНК, а TLR7 и TLR8 – с однонитевой вирусной РНК; TLR9 – связывает CPG-мотивы ДНК бактерий или вирусов; TLR5 распознает жгутиковый белок (флагелин) бактерий. Активация вирусами TLR3, TLR7 и TLR8 включает последовательные взаимодействия белков-посредников, что приводит к высвобождению β-интерферона (активация TLR3) α и β-интерферона (активация TLR7 и TLR8).

TLR могут активироваться компонентами организма (фибриногеном, белками теплового β-шока, β-дефенсином « и другими эндогенными материалами).

TLR, связавшись с патоген-ассоциированными молекулами микробов, проводят активационные сигналы внутрь клетки. Например, CD14 макрофага связав комплекс бактериального ЛПС и липосахарид связывающего белка (ЛСБ), взаимодействует с TLR4, соединенным с МD-2. В результате TLR4 проводит в клетку особый сигнал, происходит стимуляция NF-kB и синтез цитокинов. TLR индуцируют созревание макрофагов и дендритных клеток, а также экспрессию ими костимулирующих молекул типа CD80/CD86, которые способствуют презентации микробных пептидов Т-лимфоцитам. Так врожденный иммунитет «нанимает» факторы приобретенного иммунитета на специфическую борьбу с микробами и опухолевыми клетками.

Экспрессия TLR на клетках Лангерганса кожи снижена по сравнению с другими дендритными клетками, что может объяснить, почему бактерии-комменсалы постоянно не вызывают воспаление в коже. Так, ЛПС стимулирует созревание дендритных клеток, но не клеток Лангерганса.

2. Эндоцитозные, мембранные PRR экспрессированы на поверхности фагоцитов и отвечают за поглащение и транспорт веществ, некоторых бактерий и вирусов к лизосомам. К ним относятся рецептор для маннозы и рецепторы – «мусорщики» (рецепторы для «мусора»). Маннозный рецептор распознает маннозу некоторых бактерий и вирусов; рецепторы-«мусорщики» связывают вещества клеточной стенки бактерий (липопротеины, ЛПС, липотейхоевую кислоту и др.) и стареющие клетки, например, эритроциты.

3. Секретируемые, растворимые PRRявляются опсонинами, которые, связываясь с поверхностью микробов, облегчают их фагоцитоз. К ним относятся C1q-комплемента, С-реактивный белок, липополисахаридсвязывающий белок, маннозосвязывающий лектин (mannose-binding lectin, MBL) и фиколины.

Рис. 3. Участие PRRs в распознавании микробных паттернов и запуске реакций врожденного и приобретенного иммунитета

Занятие 2

Тема:Органы и клетки иммунной системы. Иммунокомпетентные клетки. Этапы их созревания и дифференцировки. Характеристика рецепторов, цитокиновый профиль и иммунологическая функция субпопуляций Т- и В- лимфоцитов. Механизмы процессинга и презентации эндо- и экзогенных антигенов

Вопросы для обсуждения:

1. Центральные и периферические органы иммунной системы.
2. Клетки иммунной системы: иммунокомпетентные, антиген-представляющие и антиген-неспецифической защиты, их характеристика.
3. Антигены кластерной дифференцировки клеток (cluster of differentiation - CD), методы определения. Маркеры лейкоцитов человека.
4. В- лимфоциты, этапы созревания и дифференцировки. В-клеточный рецептор (BCR).
5. Субпопуляции В-лимфоцитов: В (CD5^-) и В1(CD5⁺)-Lm, их характеристика, функции.
6. Т-лимфоциты: этапы созревания и дифференцировки. Популяции и субпопуляции Т-лимфоцитов.
7. Типы Т-клеточного рецептора (ТСR) у Т-лимфоцитов: альфа/ бета (α,β) и гамма/дельта (γ,δ), их функциональные различия.
8. Характеристика основных субпопуляций Т-хелперов (Th)-Th1,Th2 : CD-маркер и мембранные рецепторы клеток, цитокиновые профили, функции.
9. Характеристика цитотоксических Т-лимфоцитов( Тс): CD-маркер и основные мембранные рецепторы клетки, синтезируемые цитокины, функция.
10. Регуляторные Т-лимфоциты (Тreg): CD⁸⁺ CD^28- и другие.
11. Механизм процессинга и презентации экзогенных (фагоцитированных и эндоцитированных) пептидных антигенов.
12. Процессинг и презентациия эндогенных (синтезируемых на рибосомах клетки) пептидных антигенов.
13. Презентация непептидных антигенов молекулами семейства CD1(CD1а - CD1е).

Практические задания:

Занятие 3

Тема: Кооперация клеток иммунной системы и формирование приобретенного гуморального иммунитета. Идиотиповые и антиидиотиповые антитела. Моноклональные антитела. Реакции антиген-антитело (Аг-Ат), их практическое применение. Реакция агглютинации.

Вопросы для обсуждения:

1. Рецепторная и медиаторная кооперация антигенпредставляющих клеток (АПК), Т- и В- лимфоцитов при развитии гуморального иммунного ответа. Генетическая регуляция синтеза антител.
2. Первичный и вторичный иммунный ответ. Иммунологическая память.
3. Т-зависимый иммунный ответ
4. Т-независимый иммунный ответ
5. Идиотиповые и антиидиотиповые антитела.
6. Моноклональные антитела, их получение.
7. Техника постановки РА на стекле и ее учет.
8. Техника постановки развернутой РА и ее учет.
9. Варианты РА: реакция непрямой агглютинации (РНГА), реакция обратной непрямой агглютинации (РОНГА), реакция коаглютинации.

Практические задания:

1. Нарисовать схему межклеточной кооперации при развитии гуморального иммунного ответа.

2. Нарисовать схему иммунного ответа на Т-независимые антигены.

3. Нарисовать схему идиотиповых и антиидиотиповых антител.

4. Дополнить схему получения моноклональных антител.

5. Поставить реакцию агглютинации (РА) на стекле исследуемой чистой культуры с диагностическими сальмонеллезными монорецепторными сыворотками, учесть и зарисовать полученные результаты. Определить вид исследуемой культуры с помощью табл.

Антитела к антигенам сальмонелл	О - 9	О - 12	Vi	Hd	Hgm	0,85% NaCl (контроль)

Рис. 2. Результаты постановки РА на стекле

Таблица 1.

Классификация сальмонелл по антигенной структуре

(сокращенный вариант)

Серогруппа, вид или серовар	О-антиген	Н-антиген
фаза -1	фаза-2
Серогруппа А S. paratyphi A	1,2,12	a	(1,5)
Серогруппа B S. schottmuеlleri S. typhimurium	1,4,(5),12 1,4,(5),12	b i	1,2 1,2
Серогруппа C S. cholerаesuis	6,7	c	1,5
Серогруппа D S. typhi S. enteritidis S. dublin S. moscow	9,12,Vi 1,9,12 1,9,12 9,12	d g,m g,p b,g	- (1,7) - -

Выводы: на основании полученных результатов постановки РА на стекле чистой культуры диагностическими сальмонеллезными монорецепторными сыворотками установлено, что исследуемая культура бактерий относится к ______________________________________________________________________

(дописать видовое название)

3. Произвести учет результатов развернутой реакции агглютинации для определения титра антител в сыворотке крови больного с подозрением на брюшной тиф. Используя схему постановки реакции, зарисовать полученные результаты.

Таблица 2.

Схема постановки реакции агглютинации для выявления антител в сыворотке крови больного и определения их титра

Ингредиенты	Номер пробирки
					Контроль сыворотки	Контроль диагностикума
0,85% р-р NaСl, мл	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	-	1,0
Сыворотка крови больного в разведении 1:50, мл	1,0 →	1,0 →	1,0 →	1,0 →	‎ 1,0 →	→ 1,0	→ → -
Полученное разведение сыворотки крови больного	1:100	1:200	1:400	1:800	1:1600
Диагностикум, в каплях						1:100

Инкубация при 37º С в течение 2 часов, затем при комнатной температуре 18-20 часов.

Выводы: титр антител к О-антигену Salmonella typhi в сыворотке крови больного составляет 1: ____________.

Полученный результат позволяет/не позволяет подтвердить диагноз болезни (нужное подчеркнуть). Объяснить почему: __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя __________________

Дата _____________

Занятие 4

Тема: Формирование приобретенного клеточного иммунитета. Эффекторные функции Т- цитотоксических лимфоцитов и Т- эффекторов воспаления (ГЗТ). Противоопухолевый и трансплантационный иммунные ответы. Реакция преципитации.

Вопросы для обсуждения:

1. Рецепторная и медиаторная кооперация антигенпредставляющих клеток и популяций Т- лимфоцитов в развитии клеточной формы иммунного ответа.

2. Генетический механизм формирования специфического антиген-распознающего Т- клеточного рецептора (TCR).

3. Эффекторная функция цитотоксического Т-лимфоцита (Т-киллер): распознавание мембранных антигенов клетки- мишени и механизм реализации цитотоксичности.

4. Эффекторная функция Тгзт-Lm в иммунном воспалении. Медиаторы иммунного воспаления.

5. Классификация онкогенных антигенов по локализации и генезу.

6. Механизм развития антиопухолевого иммунного ответа.

7. Роль макрофагов в антиопухолевом иммунном ответе.

8. Функции гамма-интерферона

9. Классификация трансплантантов.

10. Трансплантанционный иммунный ответ.

11.Реакция преципитации Ингредиенты, применяемые для постановки реакции преципитации.

12. Техника постановки реакции кольцепреципитации и реакции преципитации в геле.

13. Практическое применение реакции преципитации.

Практические задания:

1. Изучить молекулы, участвующие в кооперации основных лимфоидных клеток, свойства молекул (антигенов) I и II классов главного комплекса гистосовместимости и феномен HLA – рестрикции.

Таблица 1.

Молекулы кооперации основных лимфоидных клеток, их функциональное назначение и распределение на клетках

Молекулы	Функциональное значение	Экспрессия
CD2	Рецептор к эритроцитам барана; лиганд для LFA-3 - антигена, ассоциируемого с функцией Lm.	Т - лимфоциты
CD3	Сигнальный комплекс Т-клеточного антигенраспознающего рецептора (TCR).	Т – Lm альфа, бета; Т– Lm гамма, дельта
TCR α, β	Т-клеточный Ag-распознающий рецептор (альфа, бета)	Т – Lm (большинство)
TCR γ, δ	Т-клеточный Ag-распознающий рецептор (гамма, дельта)	Т – Lm (слизистые, эпидер-мис)

HLA классов I и II

Характеристика	Класс I	Класс I
Генетические локусы	HLA – A, B, C	HLA – DP, DQ, DR
Распределение в тканях	Все ядросодержащие клетки	В-Lm, моноциты - макрофаги, денд-ритные клетки, активированные Т - Lm, эпителиальные и эндотелиальные клетки
Участие в презентации пептидов для Т-Lm	Для Т – киллеров (СD8+)	Для Т – хелперов (СD4+)
Cвязывание с поверх-ностными молекулами Т- Lm	С молекулой СD8+	С молекулой СD4

Рис. 1. Феномен HLА-рестрикции: АГ-РР – антигенраспознающий рецептор.

2. Нарисовать схему межклеточной кооперации при развитии клеточного иммунного ответа.

3. Нарисовать схему межклеточной кооперации при развитии иммунного воспаления.

4. Ознакомиться со схемой механизма реализации цитотоксичности Т-лимфоцитами-киллерами.

Рис. 3. Механизм реализации цитотоксичности Т–лимфоцита-киллера

(«поцелуй смерти»)

Гранзимы– семейство сериновых протеаз, собранных в гранулы.

Каспазы– семейство цистеиновых протеаз.

Гранзимы, в частности, гранзим В. активирует каспазу 10; взаимодействие рецепторов Fas и FasL активирует каспазу 8; взаимодействие ОНФα* и рецептора ОНФ активирует каспазу 2.

Все они и цитохром С активируют каспазу 3, которая активирует ядерные эндонуклеазы, что приводит к апоптозу. Кроме того, гранзим В способен напрямую активировать каспазы 3 и 7.

• ОФНα – опухольнекротизирующий фактор альфа

5. Поставить реакцию кольцепреципитации для выявления термостабильного антигена возбудителя сибирской язвы. Учесть и зарисовать полученные результаты.

а в

Рис. 3. Реакция кольцепреципитации:

а – контроль, отрицательный результат;

в – опыт, положительный результат.

6. Определить токсигенность Corynebacterium diphtheriae с помощью реакции преципитации (иммунодиффузия) в геле (демонстрация).

Полученные результаты зарисовать.

Рис. 4. Определение токсигенности Corynebacterium diphtheriae с помощью реакции преципитации в геле.

Выводы: __________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя __________________

Дополнительный материал

Классификация Ag опухолей по локализации :

• сывороточные,секретируемые в межклеточную среду(ракоэмбриональный Ag; сывороточный специфический Ag простаты (PSA), хорионический гонадотропин; модифицированные муцины (MUC1, 2 и др.);

• мембранные -опухолеспецифические трансплантационные Ag или TSTA (Tumor-Specific Transplantation Antigen):вирусные опухоли, ме-ланома, рак почки, рак молочных желез и т.д.

Классификация Ag опухолей по генезу:

• вирусные (продукты онковирусов):папилломавирус, вирус Эпштейн-Барр; вирус саркомы Капоши; Hepadnavirus, Adenoviruses (12,18,31), полиомавирус, Т-лимфотропный вирус человека (HTLV-1) и вирус гепатита С (HCV).

• эмбриональные (ракоэмбриональный Ag );

• нормальные гиперэкспрессируемые (HER-2/neu, BIRC, циклины B1 и D1, Bcr/Abl);

• мутантные опухолеассоциированные Ag (p53, Cdk4, Cas8, β- катенин);

• Дифференцировочные (Melan A/VART-1, тирозиназа, gp100, PSA, ANKRD30A/NY-BR-1, GF-AP, TG);

• трансплантационные или TSTA (Tumor-Specific Transplantation Ag) - (Tumor-SpeHER-2/neu, BIRC, циклины B1 и D1, Bcr/Abl);

• Ракосеменниковые (MAGE (1-12), BAGE, GAGE, NY-ESO-1, SSX2).

Дата _____________

Занятие 5

Тема: Иммунный ответ при бактериальных инфекциях. Реакция связывания комплемента (РСК).

Вопросы для обсуждения:

1. Особенности иммунитета при бактериальных инфекциях.

2. Методы оценки напряженности специфического антибактериального иммунитета.

3. Реакция гемолиза, ее практическое применение.

4. Ингредиенты, необходимые для постановки РСК, их получение.

5. С какой целью применяют индикаторную систему в РСК?

6. Техника постановки РСК

7. Практическое применение РСК.

Практические задания:

1. Изучить ингредиенты, необходимые для постановки реакции связывания комплемента, их получение и предшествующую подготовку.

2. Изучить схему постановки РСК.

3. Поставить по схеме реакцию связывания комплемента и произвести предварительный учет ее результата.

Таблица 1.

Занятие 6

Тема: Иммунный ответ при вирусных инфекциях. Реакции гемагглютинации (РГА) и торможения гемагглютинации (РТГА), реакции нейтрализации.

Вопросы для обсуждения:

1. Особенности иммунитета при вирусных инфекциях.

2. Определение напряженности противовирусного иммунитета.

3. Реакция гемагглютинации (РГА), ее практическое применение.

4. Реакции торможения гемагглютинации (РТГА),

5. Реакции нейтрализации вирусов.

Практические задания:

1. Изучить схему постановки реакции гемагглютинации.

2.Изучить компоненты и схему постановки РТГА.

Занятие 7

Тема: Особенности противогрибкового иммунитета и иммунитета при протозойных инвазиях. Иммунный статус человека и его оценка.

Вопросы для обсуждения:

1. Особенности противогрибкового иммунитета.

2. Характеристика иммунитета при протозойных инвазиях.

3. Значение биологических особенностей простейших в формировании иммунитета.

4. Иммунный статус организма и факторы, влияющие на него.

5. Этапность иммунологического обследования человека.

6. Оценка иммунного статуса организма: тесты 1-го и 2-го уровней.

7. Метод проточно-лазерной цитофлуориметрии и его применение в иммунологии.

Практические задания:

1. Написать тесты оценки иммунного статуса 1-го и 2-го уровней (таблица).

Занятие 8

Тема: Патологические иммунные реакции. Аллергия. Гиперчувствительность I типа. Методы аллергодиагностики.

Вопросы для обсуждения:

1. Аллергены. Классификация аллергенов по происхождению.

2 Аллергия. Классификация аллергических реакций по патогенезу.

3. Иммунопатологический механизм анафилактического шока и атопий.

4. Методы предупреждения анафилаксии.

Практические задания:

1.Ознакомиться с диагностическими препаратами – аллергенами инфекционной и неинфекционной природы, методами их получения.

2. Изучить схему реакции гиперчувствительности 1-го типа:

3. Перечислить биологические активные вещества клеток, участвующих в патохимической стадии реакции гиперчувствительности 1-го типа.

4.Описать клинические проявления анафилаксии.

Подпись преподавателя ______________

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФГАОУ ВО «КРЫМСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени В. И. ВЕРНАДСКОГО»

МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ С.И.ГЕОРГИЕВСКОГО

Практические задания

По иммунологии

(учебно-практическое пособие)

Ф.И.О. _______________________________________________________

Факультет _____________________________________________________

Курс______________________________________________________

Группа _______________________________________________________

Симферополь – 2017 г.

УДК 579 : 578 : 577.27 (075)

ББК 52.64

П 69

Практические задания по иммунологии (учебно-практическое пособие к практическим занятиям студентов) / Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии медицинской академии им. С.И Георгиевского «Крымского Федерального университета имени В. И. Вернадского»

- Симферополь, 2017 г. - 90 с.

Учебно-практическое пособие «Практические задания по иммунологии» составлено доцентом, к.м.н. Л.В. Тышкевич, доцентом, к.м.н. Н.В. Павловой, доцентом, к.б.н. И.Б. Андроновской, старшим преподавателем, к.м.н. Т.А. Сарачан, ассистентами О.Н. Постниковой, М.А. Кирсановой.

Пособие предназначено для студентов медицинских факультетов и включает 17 тем занятий по иммунологии, в которых данные представлены и структурированы таким образом, чтобы обеспечить самостоятельную подготовку студентов и повысить эффективность освоения материала в процессе проведения практического занятия.

Пособие составлено в форме, которая поможет студенту после освоения теоретического материала и овладения практическими навыками самостоятельно создать конспект по иммунологии. Такой конспект облегчит подготовку студентов к контрольным работам по иммунологии и при подготовке к зачету по специальности «иммунология».

Пособие включает перечень вопросов, ответы на которые студент должен знать, и список практических навыков, которыми студент должен обладать.

Рекомендовано к изданию учебно-методической комиссией Медицинской Академии им С.И. Георгиевского.

ISBN 5 – 89481 – 118 – Х

Дата _____________

Занятие 1

Тема: Естественный (врожденный) иммунитет. Механизмы распознавание патогенов: паттерны микроорганизмов и «изменённое своё». Паттерн-распознающие рецепторы. Механические и физиологические факторы врожденного иммунитета

Вопросы для обсуждения:

1. Факторы неспецифической защиты организма (внешние барьеры, клеточные и гуморальные факторы).
2. Защитные свойства кожи и слизистых.

3. Фагоцитоз. Характеристика клеток, участвующих в реакциях фагоцитоза.

4. Стадии фагоцитоза. Завершенный и незавершенный фагоцитоз.

5. Естественные киллеры (ЕК): характеристика функций. Распознавание естественными киллерами клеток мишеней и механизмы цитотоксичности.

6. Воспаление как универсальная защитная реакция организма от патогенов.

1. Понятие о паттернах («образы», «маркеры»):

а) РАМР (pathogen associated molecular pattern) – патоген- ассоциированные молекулярные структуры – «чужое»;

б) DAMP (damage- associated molecular pattern)- молекулярные структуры, ассоциированные с повреждением собственных клеток и тканей – « изменённое своё».

8. Паттерн- распознающие рецепторы- PRRs (pattern recognition receptors): Toll-подобные, эндоцитозные, растворимые.

9. Toll-like рецепторы (TLRs) гранулоцитов, макрофагов, их роль в распознавании патогенов и активации механизмов врожденного иммунитета.

10. Система белков комплемента. Пути его активации и эффекторные биологические функции.

11. Антимикробные пептиды (лизоцим, дефензины, кателициды).

12. Интерфероны. Классификация и свойства.

13. Механизм противовирусного действия альфа-интерферона. Применение интерферонов в медицине.

Практические задания:

1. Демонстрация незавершенного фагоцитоза. Промикроскопировать препараты из гнойного отделяемого уретры больного гонореей, окрашенные щелочным метиленовым синим и по Граму. Препараты зарисовать.

Рис. 1. Фагоцитоз гонококков. Окраска по Грамму	Рис. 2. Фагоцитоз гонококков. Окраска щелочным метиленовым синим

2. Изучить основные мембранные рецепторы макрофага и указать их функции.

3. Изучить основные паттерны микроорганизмов и толл-подобные рецепторы для их распознавания.

}   }

Паттерн- распознающие рецепторы.     Паттерны микроорганизмов

4. Изучить схему строения TOLL-подобных рецепторов и их клеточную локализацию.

	Строение TOLL-подобных рецепторов Внешний домен содержит повторяющиеся последовательности с высоким содержанием лейцина и цистеина; он обеспечивает взаимодействие рецептора с компонентом м/о.   TIR-домен (Toll/IL-1 receptor and resistance domain)- цитоплазматический (C-концевой) или внутренний домен – проводит сигнал от активированного TLR внутрь клетки
	Локализация Toll-подобных рецепторов	Мембранные Toll-подобные рецепторы.   Эндосомные (внутренние) Toll-подобные рецепторы)

5. Изучить схему механизмов действия ЕК на клетки-мишени.

KIR – killer cell immunoglobulin-like receptor

6. Изучить схемы классического и альтернативного путей активации комплемента.

Классический путь Альтернативный путь

Лектиновый путь активации С

Маннансвязывающий лектин взаимодействует с маннозой на поверхности микробных клеток и приобретает способность активировать протеазы, расщепляющие С4 и С2, что инициирует каскад С.

6. Написать группы провоспалительных и противовоспалительных цитокинов.

Провоспалительные: Противовоспалительные:

______________________________|________________________________________
______________________________|________________________________________
______________________________|________________________________________
______________________________|________________________________________

7. Изучить схему противовирусного действия интерферонов I типа.

Подпись преподавателя _________________

Дополнительный материал.

Микробные паттерны и PRRs

Защита организма от патогенов осуществляется за счет скоординированной работы систем врожден