Лабораторные исследования крови

Важнейшим звеном диспансеризации кур является лабораторный анализ крови, особенно определение наиболее информативных диагностических биохимических показателей.

Для оценки состояния обмена веществ, иммунного статуса и естественной резистентности организма, функции отдельных органов проводят анализ 10–15образцов крови. Каждый образец крови берут в один или два одноразовых шприца из подкрыльцевой (плечевой) вены от двух-трех взрослых кур или четырех-пяти цыплят контрольных клеток. Перед взятием образца крови для подсчета форменых элементов, определения гемоглобина, фагоцитарной активности нейтрофилов иглу шприца увлажняют 4%-ым раствором гепарина. В шприц для получения сыворотки крови антикоагулянт не вносят. Взятую кровь исследуют по общепринятым, унифицированным методам [1].

Общий клинический анализ крови.

Общий клинический анализ крови включает подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, определение содержания гемоглобина, гематокритной величины и др.

Так как у птиц эритроциты и тромбоциты содержат ядра, поэтому раздельный способ подсчета эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов не приемлем. Вначале определяют общее количество форменных элементов крови в 1 мкл крови, затем в окрашенном мазке подсчитывают 1000 клеток и вычисляют процентное соотношение эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в общем объеме крови. Зная процентное соотношение форменных элементов крови, вычисляют их абсолютное содержание в 1 мкл или 1 л. В ветеринарной практике к подсчету форменных элементов крови у птиц прибегают редко.

Гемоглобин крови определяют гемиглобинцианидным методом. Синтез этого пигмента происходит в печени путем образования хелатного комплекса протопорфирина с двухвалентным железом. Содержание гемоглобина в крови взрослых кур составляет 80–120 г/л.

Снижение количества гемоглобина отмечают при дефицитных анемиях вследствие недостатка железа, меди, кобальта, витамина В₁₂, фолиевой кислоты, белков, при хронических интоксикациях, гепатите, гепатодистрофии, расклеве, внутренних кровотечениях. Повышение уровня гемоглобина отмечается при сгущении крови (перегревание, диарея, недостаток питьевой воды).

Гематокрит – соотношение объема плазмы и форменных элементов крови, выраженное в процентах по объему (или л/л). Нормативы гематокрита у взрослых кур составляют – 39–43%.

Уменьшение гематокритной величины отмечают при анемиях и кровопотерях (расклев), увеличение – при сгущении крови. Для объективной оценки лабораторных показателей крови определение гематокрита обязательно.

Показатели фагоцитоза лейкоцитов крови кур. Для оценки естественной резистентности организма кур определяют в крови фагоцитарную активность (ФА) и фагоцитарный индекс (ФИ) фагоцитов (нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов).

Фагоцитарная активность (ФА) – процентное отношение активных клеток к общему числу сосчитанных лейкоцитов. Фагоцитарный индекс (ФИ) показатель, отражающий интенсивность фагоцитов, то есть среднее число микроорганизмов фагоцитированных одной активной клеткой.

Фагоцитарную активность выражают в процентах, фагоцитарный индекс – количеством микробных тел (мт). Фагоцитарную активность и фагоцитарный индекс определяют по методике профессора В.Е. Чумаченко [3]. По данным В.В. Мельник (ЮФ «КАТУ» НАУ) у клинически здоровых кур-несушек высокопродуктивных кроссов фагоцитарная активность нейтрофилов крови составляет 20–22%, фагоцитарный индекс – 10–12 микр. тел.

Биохимический анализ крови.

Биохимические исследования проводят преимущественно в сыворотке крови. Для получения сыворотки пробирки с кровью (одноразовые шприцы) помещают в термостат на 1–2 ч при температуре 37ºС. Отстоявшуюся сыворотку переносят в центрифужные пробирки, нумеруют и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об./мин. Сыворотка крови должна быть без гемолиза и не обогащенная фосфолипидами. Гемолизированная сыворотка крови не пригодна для биохимических исследований, так же как и содержащая высокую концентрацию фосфолипидов.

В сыворотке крови определяют общий белок рефрактометром или биуретовым методом фирменным стандартным набором реактивов; фракции белков – турбидиметрическим (нефелометрическим) методом; мочевую кислоту – по Фолину фирменным набором реактивов; общий билирубин, общий холестерин, общие фосфолипиды – наборами реактивов, общий кальций – с комплексоном Арсеназо ІІІ, неорганический фосфор – с аскорбиновой кислотой, белково-осадочную пробу – с 120 мг% раствором цинка сульфата по И.П. Кондрахину, резервную щелочность с помощью сдвоенных колб – по И.П. Кондрахину [1,4].

Перечень биохимических показателей может варьировать в зависимости от целей исследования и условий лаборатории.

Полученные результаты исследования крови сравнивают с нормативными (Приложение 1), на основании этого делают соответствующее заключение о состоянии обмена веществ и функций отдельных органов.

Белки крови выполняют многочисленные функции: поддержание постоянства онкотического давления, рН крови, уровень катионов крови, играют важную роль в формировании иммунитета. Альбумины образуются в печеночных клетках, глобулины – в клетках ретикулоэндотелиальной системы костного мозга и ретикулоэндотелиальных (купферовских или звездчатых) клетках печени. Поэтому содержание сывороточных белков во многом зависит от состояния печени. При болезнях печени снижается уровень альбуминов, увеличивается содержание глобулинов (за исключением цирроза печени), нарастает диспротеинемия. Эти изменения положены в основу белково-осадочных проб.

Содержание общего белка сыворотки крови меняется с возрастом. У 50–70 суточных цыплят оно составляет 41–44 г/л, к началу яйценоскости (100–150 суток) достигает 50–55 г/л, у взрослых кур в фазу максимальной яйценоскости уровень общего белка сыворотки крови составляет 43–59 г/л. Содержание общего белка сыворотки крови, определенное рефрактометром, примерно на 15% выше, чем при определении биуретовым методом.

Снижение общего белка сыворотки крови (гипопротеинемия) отмечается при длительном недокорме птицы, хронических расстройствах желудочно-кишечного тракта, циррозе печени, туберкулезе, возникновении искусственной линьки.

Повышение уровня белка в сыворотке крови (гиперпротеинемия) бывает при белковом перекорме, токсикозах и болезнях, сопровождающихся дистрофией или воспалением печени. Повышение общего белка сыворотки крови в этих случаях бывает за счет глобулиновых фракций при одновременном снижении альбумина. Снижение содержания альбуминов наблюдается при уменьшении его синтеза, обусловленном поражением печени. Увеличение содержания альбуминов встречается очень редко и чаще связано с дегидратацией организма, недостатком поения. Уровень гамма-глобулинов (иммунных белков) повышается при инфекционном воспалительном процессе, а также за счет патологических белков – парапротеинов, относящихся к иммуноглобулинам. Увеличение содержания γ-глобулинов, умеренное повышение уровня β-глобулинов при заметном снижении альбуминов присуще гепатиту, токсической гепатодистрофии печени, злокачественным новообразованиям, лейкопении.

Снижение γ-глобулинов отмечается при белковом недокорме, гипофункции иммунной системы, истощении, воздействии на организм ионизирующего излучения. При соблюдении схемы вакцинации кур существенных колебаний в содержании γ-глобулинов в крови не наблюдается.

Белково-осадочная (печеночная) проба.Сыворотка крови обладает определенной коллоидной устойчивостью, степень которой зависит от содержания альбуминов и глобулинов. Альбумины обладают более высокой коллоидной устойчивостью, чем глобулины. При поражении печени происходит снижение содержания в сыворотке крови альбуминов и повышение глобулинов, падает коллоидная устойчивость.

Печеночную пробу проводят в сыворотке крови кур яйценоского возраста, то есть со 170 дней и старше.

Нормальные величины – 1,6–2,6 мл. Показатель ниже 1,6 мл свидетельствует о нарушениях белковосинтезирующей функции печени. Чем меньше показатель белково-осадочной пробы, тем тяжелее патологический процесс в печени (приложение 7).

Билирубин сыворотки крови. Билирубин – желчный пигмент, который образуется в клетках печени и селезенке при распаде гемоглобина, миоглобина, цитохромов. Свободный билирубин обезвреживается в печени путем соединения с глюкуроновой кислотой. В сыворотке крови птиц содержится связанный и свободный билирубин. Повышение содержания билирубина отмечается при гепатите, циррозе печени, острой токсической гепатодистрофии, опухолях печени.

Мочевая кислота сыворотки крови. Мочевая кислота у птиц является конечным продуктом обмена пуриновых нуклеиновых оснований. Мочевая кислота плохо растворяется в воде, ее соли – ураты – откладываются на висцеральных оболочках брюшины, внутренних органов, в суставах и мочевыводящих путях, вызывая мочекислый диатез, а при отложениях в суставах – подагру. Мочевую кислоту в сыворотке крови определяют с помощью заводского (фирменного) набора реактивов.

Уровень мочевой кислоты в сыворотке крови не имеет существенной возрастной динамики. В норме мочевой кислоты у кур и цыплят содержится 4–8 мг/100 мл (0,213–0,47 ммоль/л). Повышение ее уровня в сыворотке крови отмечается при избыточном протеиновом и аминокислотном кормлении, избытке нитратов, недостатке витамина А (Кондрахин И.П., Семенов А.В. и др.).

Общий кальций сыворотки крови. В крови кальций циркулирует в трех формах: 45–50% находятся в ионизированном состоянии, 40–45% – связано с белками, остальное количество образует комплексные соединения с различными низкомолекулярными анионами. Физиологически активным является именно ионизированный кальций. В лабораториях ветеринарной медицины определяют уровень общего кальция в сыворотке крови. Преимущественно кальций – внеклеточный элемент. Около 99% его находится в костной ткани, остальное количество – во внеклеточной жидкости. Кальций – один из важнейших компонентов системы, регулирующей проницаемость мембран. Его ионы способствуют взаимодействию актина и миозина, то есть сокращению мышечных волокон. Всасывание, транспортировка, распределение в тканях и выделение кальция протекает с участием активных форм витамина D и паратгормона.

Содержание общего кальция в сыворотке крови имеет четкую возрастную динамику. Стабильное его содержание (9–12 мг/100 мл, или 2,25-3,0 ммоль/л) наблюдается у цыплят и кур-несушек до начала яйцекладки. С началом яйцекладки уровень общего кальция возрастает, достигая к 250–300 дневному возрасту 24–27 мг/100 мл (6,00-6,75 ммоль/л), затем постепенно снижается до 18–20 мг/100 мл (4,5-5,0 ммоль/л).

Снижение содержания кальция в сыворотке крови отмечается при недостаточном длительном поступлении его кормом, плохом усвоении вследствие дефицита витамина D и паратгормона, которые обеспечивают его всасывание в кишечнике и препятствуют выделению с мочой. Причиной гипокальциемии может быть гипофункция околощитовидных желез. Так как кальций участвует в нервно-мышечном возбуждении, то при его резком снижении появляются судороги и парезы мышц. Повышение содержания кальция в крови может быть при передозировке витамина D, гиперфункции паращитовидных желез.

Неорганический фосфор. Фосфор – один из основных структурных элементов организма. Все виды обмена в организме связаны с превращением фосфорной кислоты. В крови фосфор присутствует в неорганической и органической формах. Органический фосфор связан с белками и липидами. Всего в организме содержится около 10 фракций фосфорных соединений.

В клинической практике диагностическое значение имеет неорганический фосфор.

У кур уровень неорганического фосфора не имеет четкой возрастной динамики и составляет от 6,8–8,4 мг/100 мл (2,19-2,71 ммоль/л) у цыплят и 6–7 мг/100 мл (1,94-2,26 ммоль/л) у кур-несушек.

Снижение уровня фосфора в крови отмечается при длительном недостатке его в рационе, плохом усвоении вследствие расстройства желудочно-кишечного тракта (хронический энтерит, колибактериоз и др.), дефиците витамина D, гиперфункции паращитовидных желез, гипофункции щитовидной железы. Отмечается оно при рахите цыплят.

Повышение уровня неорганического фосфора в крови может быть вызвано уменьшением секреции паратгормона, когда тормозится реабсорбция фосфора в почках. Гиперфосфатемия может быть вызвана передозировкой витамина D.

Резервная щелочность крови. Под резервной щелочностью понимают запас бикарбонатов крови. Это один из доступных для исследования показателей буферной системы крови, характеризующих состояние кислотно-щелочного равновесия в организме. Величину его выражают в объемных процентах СО₂ (об.% СО₂) или ммоль/л. Этот показатель не имеет существенной возрастной динамики: у здоровой птицы составляет 48–55 об.% СО₂ или 21,4-24,5 ммоль/л бикарбонатов (NaHCO₃).

Значительное снижение резервной щелочности крови свидетельствует о развитии ацидотического состояния в организме птицы. Его наблюдают при избытке в рационах протеина, развитии мочекислого диатеза, диарейном синдроме различной этиологии. Повышение резервной щелочности отмечается крайне редко и может быть вызвано избытком назначаемого с лечебно-профилактической целью натрия гидрокарбоната.

Витамин А и каротиноиды. У цыплят и кур-несушек часто встречается гиповитаминоз А. Для его диагностики используют результаты клинического обследования, определения в желтке яиц, печени каротиноидов и витамина А, учитывают патологоанатомические изменения органов.

У цыплят при А-гиповитаминозе наблюдают сонливость, задержку роста, взъерошенность перьев, появление творожистых скоплений в углах глаз, опухание век. У взрослых кур наблюдается исхудание, выпадение перьев, бледность гребешка и сережек, в ротовой полости появление бляшек бело-серого или серо-желтого цвета, сухость слизистой глаз, помутнение, изъязвление роговицы (ксерофтальмия). При вскрытии трупов находят дистрофические изменения слизистых оболочек, полость подглазничного синуса и носовые ходы заполнены экссудатом, у входа в гортань – мелкие беловатые пустулы, в трахее и бронхах – наличие фибрина. Признаки конъюнктивита проявляются поражением эпителия слизистых оболочек глаз. У цыплят и взрослых кур выявляют признаки ксерофтальмии.

При гиповитаминозе А количество витамина А в 1 г печени суточных цыплят ниже 30-40 мкг, 10-ти суточных – 40-60, 30-ти суточных – 100-150, 60-120 суточных – менее 200-300, у взрослых кур – менее 300-350 мкг/г (11). Для оценки качества инкубационных яиц общепринято исследовать желток на содержание витамина А и суммы каротиноидов. В 1 г желтка полноценных куриных яиц должно быть витамина А – 8-10 мкг, суммы каротиноидов – 15-20 мкг. Содержание витамина А и каротиноидов ниже приведенных данных свидетельствует о гиповитаминозе.

Холестерол. Холестерин в сыворотке крови находится в двух формах: свободной (1/3) и эфиросвязанной с различными жирными кислотами (2/3). С возрастом количество холестерол возрастает. У цыплят его уровень в сыворотке крови составляет 70-130 мг/100 мл (1,82-3,38 ммоль/л), у кур-несушек – 80-200 мг/100 мл (2,08-5,20 ммоль/л).

Гиперхолестеролемия отмечается при перекорме птицы, избытке в рационе жиров, в начале голодания. Значительное снижение содержания холестерола указывает на острую желтую атрофию печени, или острое отравление.

Фосфолипиды сыворотки крови. Содержание фосфолипидов в сыворотке крови определяют по количеству неорганического фосфора, выделенного после минерализации липидов. Фосфолипиды стабильны в сыворотке крови или в плазме крови в течение суток при комнатной температуре или одной недели при хранении в холодильнике.

Фосфолипиды поступают в кровь главным образом из печени, поэтому их уровень тесно связан функциональным состоянием этого органа.

Концентрация общих фосфолипидов в норме у кур зависит от возраста и интенсивности яйцекладки.

По нашим данным у цыплят 80-90-дневного возраста содержание фосфолипидов в сыворотке крови составляет 270-330 мг/100 мл (3,49-4,26 ммоль/л), у кур в период наивысшей яйценоскости – 560-1200 мг/100 мл (7,2-15,50 ммоль/л) и выше.

Повышение концентрации фосфолипидов в сыворотке крови отмечается при жировой гепатодистрофии и гломерулонефрите.

Снижение уровня фосфолипидов – частый признак острого и хронического гепатита различной этиологии, оно отмечается также при неполноценном кормлении, особенно белково-витаминной недостаточности, истощении, анемиях.