Методы диагностики вирусных заболеваний.

1. Вирусоскопический – в исследуемом материале с помощью электронной микро-скопии обнаруживаются вирионы, а с помощью светооптической – внутриклеточные включения (недостаток светооптической микроскопии – не специфичность).

2. Метод иммунной электронной микроскопии – специфичный, чувствительный и надежный метод. В основе лежит взаимодействие антител (Ат) с вирусами при смешивании материала со специфической сывороткой. В результате образуются микропреципитаты, состоящие из вирусных частиц, покрытых «венчиком» (метод громоздкий и не применяется для массовых исследований).

3. Вирусологический – выделение и идентификация вирусов с использованием клеточных культур или куриных эмбрионов, заражением лабораторных животных.

Методы идентификации вирусов:

(a) нейтрализации цитопатического действия (ЦПД);

(b) нейтрализация реакции гемадсорбции;

(c) торможение реакции гемагглютинации;

(d) нейтрализация в опытах на животных.

Для идентификации применяется типоспецифические сыворотки.

4. Серологические – для обнаружения как специфических Ат, так и вирусных Аг:

(a) РСК;

(b) РПГА;

(c) РТГА;

(d) реакция гемагглютинации иммунного прилипания (Аг+Ат в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах);

(e) РН вирусов;

(f) радиоиммунный метод;

(g) ИФА.

5. Иммунофлуоресцентный метод (ускоренная диагностика).

6. Биологический метод.

7. Иммунохроматографический анализ.

8. Метод ДНК-зондов (гибридизация) в основе лежит способность однонитевых молекул нуклеиновых кислот вступать во взаимодействие с комплементарными нитями и образовывать двунитевые гибридные молекулы. Гибридизация осуществляется на нитроцеллюлозной мембране (твердая подложка). Исследуемую клеточную суспензию лизируют для высвобождения нуклеиновых кислот. ДНК денатурируют, а образовавшиеся одноцепочечные молекулы переносят на мембрану, где они ковалентно связываются с ДНК-зондом, который представляет собой меченные изотопом или ферментом денатурированные молекулы нуклеиновой кислоты. Гибридизация (спаривание) произойдет, если между зондом и нитью ДНК есть гомология.

9. ПЦР (полимеразная цепная реакция) - данный метод основан на выявлении в исследуемом образце специфического фрагмента ДНК возбудителя и на принципе естественной репликации ДНК, включающем расплетение двойной спирали ДНК, расхождение нитей ДНК и комплементарное достраивание обеих нитей.

Конкретные цели:

Ø Трактовать морфологию и ультраструктуру вирусов.

Ø Ознакомиться с классификацией вирусов.

Ø Анализировать особенности взаимодействия вирусов с живыми системами.

Ø Оценивать результаты репликации вирусов в живых системах.

Ø Анализировать методы культивирования вирусов в лабораторных условиях.

Ø Трактовать современные методы лабораторной диагностики вирусных заболеваний.

Уметь:

● Проводить алгоритм репликации вирусов с различными типами взаимодействия их с живыми системами.

● Оценить цветную пробу Солка, реакцию гемагглютинации и гемадсорбции.

● Проводить микроскопию препаратов культуры клеток с разными видами ЦПД вирусов с помощью иммерсионного микроскопа.

Теоретические вопросы:

1. Общая характеристика вирусов, их основные свойства.

2. Морфология и ультраструктура вириона.

3. Классификация вирусов. Принципы, положенные в основу.

4. Методы культивирование вирусов.

5. Методы индикации и идентификации вирусов (характер ЦПД в культуре ткани, реакция гемадсорбции и гемагглютинации и др.)

6. Современные методы лабораторной диагностики вирусных заболеваний.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

1. Микроскопия интактных пробирочных культур фибробластов и пораженных различными вирусами клеток.

2. Овоскопия куриных эмбрионов.

3. Зарисовка демонстрационных препаратов с ЦПД вирусов в протокол занятия.

4.Оформление протокола.

Литература:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник /Под ред. А.А. Воробьёва.– М.: МИА, 2004.– 691с.: ил.

2. Букринская А.Г. Вирусология.– М.: Медицина, 1986.– 336 с.: ил.

3. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, Санкт-Петербург «Специальная литература», 1998. - 592с.

4. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.-М.:Медицина, 1983,- 512с.

5. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.- Киев: Вища школа, 1992.- 431с.

6. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.- 768с.

7. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. /Под ред. М.П. Зыкова.- М.: «Медицина», 1977.– 288 с.

8. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес.– М.: Медицина, 1986.– 512 с.

9. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология. Алма-Ата: «Казахстан», 1974.– 372 с.

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559 с.

4. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов.– Мн.: Выш. шк., 1986.– 255 с.