Работа № 1. Принципиальная схема лабораторной диагностики клостридиальных инфекций
Модульная единица 2.2.
«Частная микробиология. Анаэробные инфекции. Туберкулез. Дифтерия. Коклюш. Спирохетозы. ООИ»
Принципиальная схема лабораторной диагностики бактериальных инфекций
Забор материала:
1) от больного (в зависимости от входных ворот инфекции и локализации возбудителя в организме) до приема химиотерапевтических препаратов
2) от трупа – в зависимости от патогенеза заболевания
3) из очага – источник зависит от механизма циркуляции возбудителя в абиотической среде
| Микроскопия | Бактериологический | Серодиагностика |
| Цель:изучение морфологических и тинкториальных свойств возбудителей. Выдача ориентировочного или окончательного ответа. Методы: 1.Экспресс-метод: прямая РИФ с применением для диагностики люминесцирующих сывороток. 2.Основной метод: окраска по Граму. 3.Изучение подвижности в препаратах «раздавленная» капля, «висячая» капля. 4.Сложные и простые методы для выявления морфологических особенностей возбудителя. | Цель:выделение возбудителя в чистом виде при посеве на специальные среды с последующей идентификацией. I этап – Посев и получение изолированных колоний.  Плотные питат.ср. Жидкие питат.ср. II этап – изучение изолированных колоний. 1)изучение культуральных свойств «подозрительных» колоний 2)изучение морфологических и тинкториальных свойств м/о из «подозрительных» колоний 3)отсев на скошенный агар (Ресселя, Клиглера) Накопление чистой культуры (с контролем при микроскопии) III этап – идентификация (определение рода, вида, серовара, биовара, фаговара и т.д.) 1.Изучение культуральных свойств Плотные питат.ср. Жидкие питат.ср. 2.Изучение морфологии микробной клетки 3.Изучение биохимических свойств (по набору ферментов) 4.Изучение антигенной структуры возбудителя в РА при помощи иммунных диагностических сывороток (Сероидентификация) 5.Изучение фаголизабельных свойств 6.Изучение вирулентных свойств возбудителя, выделенной чистой культуры, обнаружение токсинов возбудителя. 7.Антибиотикочувствительность. IV этап – выдача окончательного ответа из баклаборатории. | Цель:изучение сывороток больного с целью выявления динамики нарастания титра специфических иммуноглобулинов. Реакции: 1.РА 2.РПГА 3.РСК 4.Непрямая РИФ 5.ИФА 6.РП 7.РН Биопроба – обнаружение экзотоксинов возбудителей, воспроизведение инфекций (туляремия, чума). Аллергическая проба (на макроорганизме) |
Занятие № 2.2.1
Анаэробы. Лабораторная диагностика клостридиальных и неклостридиальных анаэробных инфекций
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
изучить биологические свойства возбудителей анаэробных инфекций и принципы лабораторной диагностики клостридиальных и неклостридиальных анаэробных инфекций. Классифицировать препараты для идентификации, лечения и профилактики анаэробных инфекций.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
1. Характеристику биологических свойств возбудителей.
2. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при
анаэробных инфекциях.
3. Основные клинические проявления заболеваний при анаэробных
инфекциях.
4. Принципы лабораторной диагностики.
5. Препараты для идентификации, лечения и профилактики заболеваний.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
· дифференцировать возбудителей анаэробных инфекций по
морфологическим, биохимическим, агглютинабельным,
фаголизабельным свойствам;
· интерпретировать результаты серологических реакций;
· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;
методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей анаэробных инфекций.
РН на белых мышах
I. Этап: Подготовка исследуемого материала.
экстракт
II. Этап: Обнаружение токсина
экстракт
экстракт+
поливалентная
противоботулиническая
сыворотка
Экспозиция 30-40 мин
По 0,5 млПо 0,5 мл
Лабораторные животные
Лабораторные животные
выживают погибают
Результат: обнаружен ботулинический токсин
БАКТЕРИОСКОПИЯ
Cl. septicum)
Результат:______________________________________________________________________________________________________________
б) Возбудитель столбняка (Cl. tetani)
Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
в) Возбудитель ботулизма (Cl. botulinum)
Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
БАКТЕРИОЛОГИЯ
ГАЗОВАЯ ГАНГРЕНА
Таксономия возбудителя:
Семейство__________________________________________________________________
Род________________________________________________________________________
Вид________________________________________________________________________
Морфологические и тинкториальные свойства_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Культуральные и биохимические свойства____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Антигенная структура______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Резистентность_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Эпидемиология
Источник инфекции_____________________________________________________________________
Механизм передачи______________________________________________________________________
Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Патогенез и клиника
Входные ворота________________________________________________________________________
Инкубационный период_______________________________________________________________________
Основные факторы патогенности ________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Основные фазы патогенеза________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Клинические симптомы_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Иммунитет___________________________________________________________________
Основные направления лабораторной диагностики_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Специфическая профилактика (препараты)____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лечение (препараты)_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
СТОЛБНЯК
Таксономия возбудителя:
Семейство__________________________________________________________________
Род________________________________________________________________________
Вид________________________________________________________________________
Морфологические и тинкториальные свойства_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Культуральные и биохимические свойства____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Антигенная структура_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Резистентность_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Эпидемиология
Источник инфекции_____________________________________________________________________
Механизм передачи______________________________________________________________________
Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Патогенез и клиника
Входные ворота________________________________________________________________________
Инкубационный период_______________________________________________________________________
Основные факторы патогенности ________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Основные фазы патогенеза_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Клинические симптомы____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Иммунитет________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Основные направления лабораторной диагностики______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Специфическая профилактика (препараты)_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лечение (препараты)____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
БОТУЛИЗМ
Таксономия возбудителя:
Семейство__________________________________________________________________
Род________________________________________________________________________
Вид________________________________________________________________________
Морфологические и тинкториальные свойства__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Культуральные и биохимические свойства_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Антигенная структура___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Резистентность______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Эпидемиология
Источник инфекции_____________________________________________________________________
Механизм передачи______________________________________________________________________
Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Патогенез и клиника
Входные ворота________________________________________________________________________
Инкубационный период_______________________________________________________________________
Основные факторы патогенности ________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Основные фазы патогенеза_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Клинические симптомы____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Иммунитет___________________________________________________________________
Основные направления лабораторной диагностики______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Специфическая профилактика (препараты)_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лечение (препараты)____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ситуационные задачи
1. В инфекционную больницу поступил больной с подозрением на пищевой ботулизм. Для диагностики в целях обнаружения в крови больного токсина был использован биологический метод. Для выявления источника инфекции проведено бактериологическое исследование остатков рыбных консервов, которые употреблялись пострадавшим в пищу. Учесть результаты бактериологического метода и биологической пробы. Дать диагностическую оценку методов.
Выделяется следующий материал для учета результатов исследования: пробирка с исследуемым материалом; рисунок с результатом биологического метода; микропрепарат чистой культуры С. botulinum; пробирка с ростом палочки ботулизма на тиогликолиевой среде.
Вопросы 1. Подтверждается ли диагноз? Если да, то почему? 2. Какая иммунологическая реакция определяет результат биологической пробы? 3. Достаточно ли представленных данных бактериологического метода, чтобы считать консервы источником заболевания? Ответ объяснить. 4. Что необходимо обнаружить в пищевых продуктах, чтобы доказать, что они явились источником заболевания?
2. Больной поступил в хирургическое отделение с проникающим ранением брюшной полости. После операции на 2-е сутки развились симптомы перитонита. Для определения этиологии перитонита проведено микроскопическое, бактериологическое исследование перитониального экссудата путем посева на питательные среды (Эндо, ЖСА, МПА).
При микроскопии перитониального экссудата обнаружены Гр- палочки. Роста микрофлоры на питательных средах не выявлено. Учитывая наличие клинических симптомов, характерных для неклостридиальных анаэробов, проведено повторное бактериоскопическое исследование экссудата на кровяном агаре. Учтите результат бактериологического исследования.
Вопросы 1. Установить этиологию перитонита. 2. Чем объясняется отсутствие роста микрофлоры на питательных средах Эндо, ЖСА, МПА. 3. Укажите возможные пути проникновения.
Пример решения задачи
Пострадавшему в автомобильной катастрофе больному С, 45 лет, после оказания экстренной хирургической помощи было введено 3000 ME противостолбнячной антитоксической сыворотки. Вопрос о давности вакцинации против столбняка не был выяснен. Спустя два месяца С. был доставлен в инфекционное отделение с диагнозом столбняка. В течение указанного срока никаких других травм не было.
| Вопросы для студентов | Ответы |
| Мог ли развиться столбняк у данного больного в результате автокатастрофы? | Да, мог (так называемый «поздний» столбняк) |
| Основные клинические симптомы, позволяющие поставить диагноз столбняка | Тризм (тоническое напряжение жевательных мышц); спазм мимической мускулатуры (сардоническая улыбка); тоническое напряжение мышц затылка; опистотонус |
| Возможная причина развития столбняка у данного больного? | Введение пострадавшему только противостолбнячной сыворотки, создающей кратковременный пассивный иммунитет (до 2 месяцев); возбудитель мог сохраниться в организме и в дальнейшем вызвать это заболевание. |
| Укажите врачебные ошибки, которые могли способствовать развитию заболевания | Необходимо было ввести столбнячный анатоксин. Не выяснено, проводилась ли и в какие сроки активная иммунизация против столбняка - противостолбнячным анатоксином |
| Какой препарат используется для создания активного иммунитета против столбняка, какой иммунитет по направленности он создает и на какой срок (при однократном введении)? | Анатоксин; иммунитет - антитоксический; срок полгода - год |
Теоретическая справка
К работе № 1
Clostridium perfringens
К работе № 4
Схема патогенеза ботулизма
Ведущую роль патогенеза ботулизма играет токсин. На сегодняшний день патогенез ботулизма ещё недостаточно изучен, существуют разногласия по вопросу действия токсина на центральную нервную систему, вегетативную нервную систему и другие структуры. При обычном заражении он попадает в организм вместе с пищей, содержащей также и вегетативные формы возбудителей — продуцентов яда. Ботулотоксин всасывается из слизистой оболочки или лёгких. В желудке под действием соляной кислоты желудочного сока ботулотоксин не разрушается. Наиболее значимо поступлениетоксина через слизистую оболочку желудка и тонкой кишки, откуда он попадает в кровь и разносится по всему организму, нарушая деятельность нервных клеток, ответственных за передачу возбуждения к мышцам. При ботулизме поражаются все черепные нервы, кроме чувствительных, таких как обонятельный, зрительный, преддверно-улитковый нервы. В первую очередь, страдают мышцы глаз, глотки и гортани, затем дыхательные мышцы. Особой чувствительностью к ботулотоксину обладают мотонейроны спинного и продолговатого мозга, что проявляется развитием бульбарного и паралитического синдромов. Ботулотоксин блокирует освобождение ацетилхолина в холинергических синапсах, что обусловливает развитие периферических параличей. Холинэстеразная активность в синапсах практически не изменяется.
Также в патогенезе ботулизма большую роль играет гипоксия. Развитие прогрессирующей острой дыхательной недостаточности обусловлено угнетением активности больших мотонейронов передних рогов спинного мозга, иннервирующих дыхательную мускулатуру. Гипоксическая гипоксия нарастает при обтурации бронхов аспирационными рвотными массами, слюной и пищей, что связано с парезами мышц гортани, глотки и надгортанника. Из-за гипосаливации воспаляется слизистая оболочка ротоглотки, может развиваться гнойный паротит вследствие восходящей инфекции. Гибель обычно наступает от вентиляционной дыхательной недостаточности и иногда от внезапной остановки сердца. Токсинемия вызывает угнетение ферментов пентозофосфатного шунта, ингибирование клеточных Na+/K+ насосов и обусловливает развитие гемической гипоксии.
Фармакологическое действие токсинов включает связывание Н-цепи с мембраной, поглощение токсина и расщепление L-цепью белка SNAP-25 — одного из белков семейства SNARE — на мембране синаптических пузырьков, что блокирует слияние синаптических пузырьков с пресинаптической мембраной нервного окончания.
Модульная единица 2.2.
«Частная микробиология. Анаэробные инфекции. Туберкулез. Дифтерия. Коклюш. Спирохетозы. ООИ»
Принципиальная схема лабораторной диагностики бактериальных инфекций
Забор материала:
1) от больного (в зависимости от входных ворот инфекции и локализации возбудителя в организме) до приема химиотерапевтических препаратов
2) от трупа – в зависимости от патогенеза заболевания
3) из очага – источник зависит от механизма циркуляции возбудителя в абиотической среде
| Микроскопия | Бактериологический | Серодиагностика |
| Цель:изучение морфологических и тинкториальных свойств возбудителей. Выдача ориентировочного или окончательного ответа. Методы: 1.Экспресс-метод: прямая РИФ с применением для диагностики люминесцирующих сывороток. 2.Основной метод: окраска по Граму. 3.Изучение подвижности в препаратах «раздавленная» капля, «висячая» капля. 4.Сложные и простые методы для выявления морфологических особенностей возбудителя. | Цель:выделение возбудителя в чистом виде при посеве на специальные среды с последующей идентификацией. I этап – Посев и получение изолированных колоний. Плотные питат.ср. Жидкие питат.ср. II этап – изучение изолированных колоний. 1)изучение культуральных свойств «подозрительных» колоний 2)изучение морфологических и тинкториальных свойств м/о из «подозрительных» колоний 3)отсев на скошенный агар (Ресселя, Клиглера) Накопление чистой культуры (с контролем при микроскопии) III этап – идентификация (определение рода, вида, серовара, биовара, фаговара и т.д.) 1.Изучение культуральных свойств Плотные питат.ср. Жидкие питат.ср. 2.Изучение морфологии микробной клетки 3.Изучение биохимических свойств (по набору ферментов) 4.Изучение антигенной структуры возбудителя в РА при помощи иммунных диагностических сывороток (Сероидентификация) 5.Изучение фаголизабельных свойств 6.Изучение вирулентных свойств возбудителя, выделенной чистой культуры, обнаружение токсинов возбудителя. 7.Антибиотикочувствительность. IV этап – выдача окончательного ответа из баклаборатории. | Цель:изучение сывороток больного с целью выявления динамики нарастания титра специфических иммуноглобулинов. Реакции: 1.РА 2.РПГА 3.РСК 4.Непрямая РИФ 5.ИФА 6.РП 7.РН Биопроба – обнаружение экзотоксинов возбудителей, воспроизведение инфекций (туляремия, чума). Аллергическая проба (на макроорганизме) |
Занятие № 2.2.1
Анаэробы. Лабораторная диагностика клостридиальных и неклостридиальных анаэробных инфекций
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
изучить биологические свойства возбудителей анаэробных инфекций и принципы лабораторной диагностики клостридиальных и неклостридиальных анаэробных инфекций. Классифицировать препараты для идентификации, лечения и профилактики анаэробных инфекций.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
1. Характеристику биологических свойств возбудителей.
2. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при
анаэробных инфекциях.
3. Основные клинические проявления заболеваний при анаэробных
инфекциях.
4. Принципы лабораторной диагностики.
5. Препараты для идентификации, лечения и профилактики заболеваний.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
· дифференцировать возбудителей анаэробных инфекций по
морфологическим, биохимическим, агглютинабельным,
фаголизабельным свойствам;
· интерпретировать результаты серологических реакций;
· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;
методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей анаэробных инфекций.
Работа № 1. Принципиальная схема лабораторной диагностики клостридиальных инфекций
Самостоятельная работа:разобрать особенности лабораторной диагностики газовой гангрены, столбняка и ботулизма
Исследуемый материал:
____________________
____________________
____________________
Работа № 2. Метод выявления токсинов возбудителей (на примере ботулинического токсина)
Цель:определить наличие и тип ботулинического токсина в исследуемом материале.
РН на белых мышах
I. Этап: Подготовка исследуемого материала.
экстракт