Количественное определение креатинина в моче по Яффе.
Принцип метода.Метод основан на способности креатинина в щелочной среде взаимодействовать с пикриновой кислотой с образованием пикрата креатинина оранжево-красного цвета.
Ход работы.Приготовить опытную пробу:в цилиндр объемом 100 мл внести 0,5 мл мочи и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Смесь тщательно встряхнуть и добавить 0,2 мл 10% раствора едкого натра, выдержать 10 мин при комнатной температуре и довести дистиллированной водой до 100 мл. Приготовить контрольную пробу: к 3 мл раствора пикриновой кислоты добавить 0,2 мл 10% раствора едкого натра и довести объем смеси дистиллированной водой до 100 мл. Приготовить стандартную пробу: к 0,5 мл стандартного раствора (содержит 8,8 ммоль/л, или 1 г/л креатинина) прилить 3 мл раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 10% раствора едкого натра, выдержать 10 мин при комнатной температуре и довести дистиллированной водой до 100 мл. Интенсивность окраски опытной и стандартной проб измерить на ФЭКе против контрольного раствора в кювете с толщиной слоя 10 мм при зеленом светофильтре.
Расчет:концентрация креатинина(моль/сут) = (Еоп/Ест) × 8,8
Норма:4,4 – 17,6 моль/сут, или 0,5 – 2 г/сут.
Клинико-диагностическое значение.Содержание креатинина в моче зависит от характера питания, увеличиваясь при употреблении мясной пищи. Повышение его экскреции с мочой наблюдается при усиленной мышечной работе, лихорадочных состояниях, пневмонии авитаминозе Е, тиреотоксикозе и др.; понижение экскреции с мочой наблюдается при мышечной атрофии, лейкемии, амилоидозе почек, голодании.
Принцип определения креатинина методом Поппера
В щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски (реакция Яффе — образование таутомера пикрата креатинина), которую измеряют фотометрически. Определение в сыворотке крови проводят после депротеинизирования, в моче — после разведения водой. Определение не совсем специфично, интерферируют вещества с активной метиленовой группой и некоторые восстанавливающие вещества, например глюкоза, ацетон, ацетоуксусная и пировиноградная кислоты.
12. Количественное определение мочевой кислоты в крови.
Количественное определение мочевой кислоты в сыворотке крови по методу Мюллера-Зейферта.
Определение мочевой кислоты в сыворотке крови производится с диагностической целью. При подагре, пневмонии, анемии, почечной недостаточности, лечение опухолей рентгенотерапией наблюдается повышение содержания мочевой кислоты. Снижение уровня мочевой кислоты возможно при акромегалии, применении дикумарола, кортизона, салицилатов и инъекций инсулина.
В норме содержание мочевой кислоты в сыворотке крови взрослых составляет у мужчин - 0,24 – 0,50 млмоль/л (4,0-8,5мг/дл), у женщин – 0,16 – 0,40 млмоль/л (2,8-7,5 мг/дл).
Принцип метода.Мочевая кислота определяется в безбелковых фильтратах сыворотки крови по интенсивности синей окраски, развивающейся при восстановлении фосфорновольфрамого реактива.
Техника выполнения работы.
В центрифужные пробирки вносят 1 мл сыворотки крови, добавляют 8 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 0,35М серной кислоты, перемешивают. Затем добавляют 0,5 мл 10% раствора вольфрамата натрия, опять переемешивают и через 10 мин. Центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин. После осаждения белков сыворотки крови центрифугированием ставят опытную, стандартную и контрольную пробы.
Опытная проба: 3 мл надосадочной жидкости переносят в чистую прбирку.
Стандартная проба: 3 мл 0,03М стандартного раствора мочевой кислоты (1 мл содержит 0,006 ммоль мочевой кислоты) налить в чистую пробирку.
Контрольная проба: В чистую пробирку прилить 3 мл дистиллированной воды.
Во все три пробирки добавляют 1,5 мл 10,3% раствора карбоната натрия, 1 мл фосфорновольфрамового реактива, тщательно перемешивают и через 30 мин опытную и стандартную пробы фотометрируют при длине волны 590-700 нм (красный светофильтр) в кювете длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы.
Расчет:концентрацию мочевой кислоты рассчитывают по формуле:
С= Еопыт./Естанд.×Естанд.×10, где
С – концентрация мочевой кислоты, ммоль/л;
Еопыт. – экстинкция опытной пробы;
Естанд.- экстинкция стандартной пробы;
Сстанд. – концентрация стандартного раствора мочевой кислоты,
0,03 ммоль/л;
10 – коэффициент пересчета на объём сыворотки крови.
13. Общий анализ мочи: физико-химические свойства, химический состав мочи, определение патологических компонентов мочи.