Основы лабораторной диагностики гельминтозов

Для обнаружения гельминтов, их фрагментов (проглоттид, сколексов), личинок или яиц исследуют кал, мочу, мокроту, дуоденальное содержимое, кровь.

Исследование испражнений (копрологическое исследо­вание) является наиболее распространенным, так как боль­шая часть гельминтов паразитирует у человека в кишеч­нике или органах, связанных с ним протоками, поэтому их яйца или части тела выделяются с испражнениями.

При копрологическом анализе необходимо строго соблю­дать правила личной гигиены, обжигать петли и стеклян­ные палочки, стерилизовать посуду, стекла и инструмен­тарий, содержать в чистоте рабочее место.

Испражнения исследуют макроскопически или микроско­пически для обнаружения в них паразитических червей или их частей (гельминтоскопия), а главным образом – яиц гельминтов (гельминтоовоскопия).

Макроскопические методы

Осмотр испражнений. При осмотре испражнений в них можно обнаружить гельминтов, их сколексы, обрывки стро­билы, проглоттиды, выделяющиеся самостоятельно или после дегельминтизации. Этот метод особенно рекоменду­ется для выявления энтеробиоза, тениоза и тениаринхоза.

Испражнения доставляют в лабораторию в чистой стек­лянной посуде или в спичечных коробках. На каждой ко­робке должна быть этикетка с указанием фамилии, име­ни, возраста и места жительства обследуемого.

Небольшие порции испражнений перемешивают с водой в плоской ванночке или в чашке Петри. Их просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимо­сти пользуясь лупой. Пинцетом или пипеткой извлекают все подозрительные образования, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина или изотоничес­кого раствора хлорида натрия для дальнейшего изучения.

При методе отстаивания всю исследуемую порцию ис­пражнений нужно размешать с водой и дать отстояться в стеклянном цилиндре, затем осторожно слить верхний слой жидкости. Так повторяют несколько раз. После того, как жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просмат­ривают в стеклянной ванночке или чашке Петри, как было указано выше.

Микроскопические методы

Микроскопия – основной метод исследования испраж­нений для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Ис­пражнения для анализа должны быть доставлены не поз­же суток после их выделения. При нарушении этого пра­вила диагноз поставить затруднительно или невозможно в связи с разрушением яиц и личинок. Для повышения до­стоверности исследования анализы нужно повторять не­сколько раз ежедневно или с промежутками в 1-3 дня.

Нативный мазок.Небольшой кусочек испражнений пе­реносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% вод­ного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество дистиллированной воды и глицерина) и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка.

При небольшом количестве яиц в испражнениях их не всегда удается выявить, поэтому применение только этого метода не является полноценным и достоверным.

Толстый мазок с целлофаном (метод Като).Принцип метода: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке ис­пражнений, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовой зеленью. Предварительно гидрофильный цел­лофан толщиной 22 мкм нарезают пластинками с разме­ром сторон 20x40 мм и погружают на сутки в раствор сле­дующего состава: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола. 3-5 мл указанной смеси достаточно для обработ­ки 100 пластинок, которые затем можно хранить в этом же растворе в хорошо закрытом сосуде.

Ход исследования. 100 мг испражнений наносят на пред­метное стекло, покрывают обработанной, как описано выше, пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы испражнения не растекались из-под целлофана. Микроскопирование при малом или большом увеличении необходимо проводить не позже, чем через час после приготовления мазка, а в жаркую погоду – через 30-40 минут. Высыхание препарата и длительное просвет­ляющее действие глицерина затрудняют микроскопирование.

Метод Като позволяет исследовать значительный объем испражнений и с большей эффективностью, чем при обыч­ном нативном мазке. Этим методом можно выявить яйца аскариды, власоглава, лентеца, трематод, тениид. Однако для выявления яиц анкилостомид и карликового цепня, особенно при малой интенсивности инвазии, метод Като не­достаточно эффективен.

Метод закручивания по Шульману.2-3 г испражнений размешивают стеклянной палочкой круговыми движени­ями с 3-5-кратным количеством физиологического ра­створа, не касаясь стенок сосуда. Яйца и личинки гельмин­тов скапливаются в центре. После окончания перемешива­ния каплю на конце палочки быстро переносят на предметное стекло, закрывают ее покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Этим методом хорошо выяв­ляются личинки гельминтов.

Методы обогащения

Методы обогащения основаны на разности удельного веса яиц и применяемого солевого раствора, что позволяет обна­руживать небольшое их количество. Если удельный вес яиц бóльше удельного веса жидкости, то яйца концентрируют­ся в осадке, который исследуют под микроскопом. Этот ме­тод осаждения (седиментации) применяют для яиц трема­тод. При бóльшем удельном весе раствора яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Это методы всплывания (флотации). Они наиболее эффективны для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карли­кового цепня.

Метод Фюллеборна основан на всплывании яиц гель­минтов в насыщенном растворе NaCl с высокой относитель­ной плотностью. Для этого растворяют 400 г NaCl в 1 л воды при кипячении. Относительная плотность раствора 1,18-1,22. Раствор хранят в закрытой бутыли.

Для проведения анализа в банку объемом 30-50 мл по­мещают 2-3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор хлорида на­трия. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие круп­ные частицы. Через 45-60 мин. отстаивания проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глице­рина. Готовят несколько препаратов. Дополнительно про­сматривают 2-4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла. Необходимость иссле­дования осадка обусловлена тем, что яйца трематод и тениид всплывают очень плохо и могут остаться в осадке. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неопло­дотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца.

К достоинствам этого метода относится его дешевизна и доступность, к недостаткам – необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.

Метод Калантарян. Вместо насыщенного раствора поваренной соли используют насыщенный раствор азотнокислого натрия (1 кг селитры заливают 1 литром дистиллированной воды и кипятят до полного растворения). Удель­ный вес раствора около 1,4.

Достоинства метода: быстро всплывают и обнаружива­ются в поверхностной пленке яйца большинства гельмин­тов, что исключает необходимость исследования осадка. Не всплывают онкосферы тениид и яйца трематод, что следу­ет учитывать при исследованиях с целью диагностики ука­занных гельминтозов. Высокая стоимость нитрата натрия ограничивает применение данного метода.

Метод Красильникова. Под действием поверхностно-ак­тивных веществ, входящих в состав моющих средств (де­тергентов), яйца гельминтов освобождаются от испражне­ний и концентрируются в осадке.

Предварительно готовят 1% раствор стирального порош­ка. Для этого высушивают порошок в сушильном шкафу при 100 °С в течение 1-2 часов, затем 10 г порош­ка растворяют в 1 л водопроводной воды. При отсутствии «Лотоса» можно использовать и другие стиральные по­рошки, но каждого из них нужно брать столько, сколько растворится без образования осадка в 1 л водопроводной воды.

В стеклянный сосуд, емкостью 30-50 мл, наливают 20-30 мл раствора детергента, туда же помещают небольшую порцию испражнений и хорошо перемешивают. Соотноше­ние испражнений и раствора должно быть примерно 1:20. Испражнения должны находиться в растворе не менее су­ток. За это время на дне образуется осадок из 2-3-х сло­ев. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое собираются яйца гельминтов, верхний слой представляет собой беловато-серые хлопья.

Пастеровской или глазной пипеткой набирают 2-3 кап­ли жидкости из среднего слоя и переносят на предметное стекло. На одном стекле готовят 2 препарата, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Метод Красильникова позволяет обнаружить яйца всех видов гельминтов, выделяемые с испражнениями.

Метод Горячева (метод осаждения) используется для ди­агностики описторхоза. Удельный вес яиц описторха вы­сок, поэтому они не всплывают в солевых растворах. В цилиндр диаметром 2-3 см наливают 70-100 мл насыщен­ного раствора хлорида натрия. Отдельно тщательно размешивают 0,5 г испражнений в 20-25 мл воды и осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в^: цилиндр на солевой раствор, избегая перемешивания. Яйца описторхов медленно оседают на дно цилиндра. Через 2-3 часа верхний слой с калом отсасывают пипеткой, а остав­шийся солевой раствор оставляют стоять на 12-20 часов или центрифугируют. Осадок пипеткой переносят на пред­метное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Этот метод применим и для диагностики других трематодозов.

Метод липкой лентыиспользуется для диагностики энтеробиоза. Кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4-5 см липким слоем прикладывают через анус к перианальным складкам, сразу же снимают и при­клеивают на предметное стекло. Полученные таким обра­зом препараты микроскопируют. Преимущества этого ме­тода перед соскобом с перианальных складок заключается в быстроте и возможности довольно долгого хранения пре­паратов.

Основные отличительные особенности различных яиц гельминтов даны в табл. 6.