Анализ цитокинов молочного молока

Результаты анализа картины цитокинов грудного молока как у плацебо, так и у женщин, страдающих пробиотиками, показаны на рисунке 2 .

Мы не обнаружили статистически значимых различий в IL-1β между группой плацебо и группой матерей, дополненных пробиотиками. ( Рисунок 2 A). В обеих группах мы наблюдали небольшое снижение IL-1β с течением времени (эффект времени: F = 4,41, p = 0,05, эффект лечения: F = 1,28, p= 0,28, эффект взаимодействия: F = 1,12, p = 0,31).

Значения IL10 значительно выше в грудном молоке пробиотиков, дополненных матерями в отношении контрольных матерей ( Рисунок 2 B). Значения IL10 уменьшались в обеих группах от T0 до T30 (временной эффект: F = 145,72, p <0,001, эффект лечения: F = 6,63, p = 0,02, эффект взаимодействия: F = 2,04, p = 0,17).

Значения IL6 в молозиве значительно отличались между этими двумя группами. ( Фиг. 2С). Концентрации IL-6 были значительно выше в молозиве матери, получавших пробиотики. У матерей, дополненных пробиотиками, значения IL-6 снижались от T0 до T30, достигая примерно тех же значений, что и у зрелого молока контрольных матерей. (Эффект времени: 48,13, p <0,001; Эффект лечения: F = 24,35, p <0,001, эффект взаимодействия: F = 76,82, p <0,001). Никаких существенных изменений в контрольных значениях молока не наблюдалось.

Средние значения TGF-β1 были значительно выше в зрелом грудном молоке дополненных матерей в отношении контрольного грудного молока ( рисунок 2 D).

Значения средних значений TGF-β1 значительно увеличились в группе с добавкой от T0 до T30, тогда как значения уменьшались в контрольной группе (временной эффект: F = 5,21, p = 0,04, эффект лечения: F = 11,76, p = 0,004, эффект взаимодействия: F = 20,63, p <0,001).

Логистический регрессионный анализ показал, что единственным фактором, оказывающим значительное влияние на цитокины грудного молока, является потребление пробиотиков матери. Разница не была найдена на основе способа доставки (данные не показаны).

Анализ sIgA

Анализ sIgA в грудном молоке и образцы новорожденных стула показаны на рисунке 3 .

В грудном молоке средние значения sIgA уменьшались от T0 до T30 в обеих группах без каких-либо статистически значимых различий ( рисунок 3 A) (временный эффект: F = 22,69, p <0,001, эффект лечения F = 3,57, p = 0,08, эффект взаимодействия F = 1,35, p = 0,26).

В новорожденных табуретах sIgA увеличился с T0 до T30 в обеих группах. Средние значения были выше у новорожденных, чьи матери взяли пробиотический продукт, чем в контрольной группе ( Рисунок 3 B) (Временной эффект: F = 15, p = 0,02, лечебный эффект: F = 10,62, p = 0,005, эффект взаимодействия: F = 15, p = 0,69).

Анализ фекального лактоферрина

Анализ фекального лактоферрина показан на рисунке 4 .

Концентрация фекального лактоферрина значительно повышалась от T0 до T30 в обеих группах без существенных различий у новорожденных, чьи матери взяли пробиотический продукт по отношению к контрольной группе (эффект времени: F = 54,76, p <0,001; p = 0,39, эффект лечения: F = 0,03, p = 0,87, эффект взаимодействия: F = 0,73).

Безопасность, шаблон роста и младенческие FGID

Пробиотические добавки хорошо переносились как у матерей, так и у новорожденных, и никаких побочных эффектов не сообщалось.

Аналогичная картина роста была обнаружена в двух группах, согласно ИМТ ( рис. 5 ). (Эффект времени: F = 118,95, p <0,001, лечебный эффект: F = 0,01, p = 0,92, эффект взаимодействия: F = 1,43, p = 0,24).

Концентрация IL-6 в грудном молоке в первые месяцы жизни может сыграть решающую роль в накоплении жира и скудной массы тела. Мы обнаружили нестатистически значимую тенденцию к снижению между концентрацией молока IL-6 и младенческим ИМТ на Т30.

Колич и регургитация чаще встречались в группе плацебо, чем в пробиотической группе ( рис. 6 ) (колики: χ ² = 7,2, p = 0,007, относительный риск = 4 (95% ДИ: 1,21-17,10), регургитация: χ ² = 6.944, p = 0.008, относительный риск = 2.43 (95% ДИ: 1.14-5.62). Логистический регрессионный анализ показал, что единственным фактором, оказывающим значительное влияние на колик и регургитацию, является потребление пробиотиков матери (данные не показаны). Новорожденные с более низкой частотой от регургитации получали молоко с более высокими концентрациями TGF-β1 по сравнению с новорожденными с более частым регургитацией (1432,30 против 265,57 пг / мл, t = 3,91, p = 0,004).

Никаких существенных различий в количестве движений кишечника (3,7 против 4,2, t = 1,17, p = 0,246) и консистенции стула ( χ ² = 3,53, p = 0,317) были обнаружены между этими двумя группами.

Идти к:

Дискуссия

В этом исследовании мы оценили средние значения в молозиве и зрелом молоке двух противовоспалительных цитокинов, TGF-β1 и IL-10 и два провоспалительных цитокина, IL-1β и IL-6.

Наши данные показывают значительное временное увеличение грудного молока TGF-β1 у матерей, дополненных пробиотиками, по отношению к контрольной группе ( рисунок 2 D). Кроме того, среднее значение IL-10 как в молозиве, так и в зрелом молоке было выше у дополненных матерей, чем в контрольной группе ( рисунок 2 B). Благотворный эффект этого пробиотического препарата на профили противовоспалительных цитокинов грудного молока не зависит от способа доставки, а только от пробиотического введения матерям.

В раннем детстве TGF-β1, вероятно, оказывает решающее влияние на развитие незрелого желудочно-кишечного тракта, влияя на продукцию IgA и индукцию толерантности к ротовой полости [ 15 ]. На основании известной роли TGF-β1 на уровне sIgA [ 16 ], которая служит в качестве первой линии защиты при иммунитете слизистой оболочки кишечника [ 17 ], можно предположить, что увеличение уровней TGF-β1 в грудное молоко, вызванное этим препаратом пробиотика с высокой дозой, может быть ответственным за значительно более высокие уровни sIgA, обнаруженные в стуле младенцев, чьи матери взяли пробиотический продукт при T30 ( рисунок 3 B).

Поскольку уровни грудного молока TGF-β1 при T0 не различаются между двумя группами ( рисунок 2 D), более высокие концентрации sIgA при T0 в образцах новорожденных стула с добавленной группой ( рис. 3 B) могут быть ранним выражением слизистой оболочки иммунной системы у развивающегося плода. Амниотическая жидкость содержит уровни IgA, происхождения плода, поддерживая гипотезу о том, что новорожденные проникают в мир, который впервые был омыт в среде, созданной матерью, и, по нашему опыту, под влиянием нашего пробиотического дополнения [ 18 ].

Более того, среднее значение sIgA в материнском молоке выше у обработанных матерей, хотя оно не совсем достигла статистической значимости ( рисунок 3 A).

В недавней статье показано, как цитокины оказывают дифференциальное воздействие на мускариновый рецептор на продольную гладкую мышцу кишечника и объясняют основу для изменения подвижности кишечника и сократимости мышц кишечным воспалением. В этом случае TGF-β1, по-видимому, увеличивает сократимость продольной гладкой мышцы кишечника, что говорит о эффектах против регургитации [ 19 ].

В соответствии с этими результатами наши данные показывают, что новорожденные с более низкой частотой регургитации получали молоко с более высокими концентрациями TGF-β1 по сравнению с новорожденными с более высокой частотой регургитации.

IL-10 играет ключевую роль в поддержании гомеостаза, и на протяжении многих лет хорошо известно, что повышенные уровни IL-10 подавляют воспаление [ 20 ]. Наши данные показывают более высокие средние значения IL-10 как в молозиве, так и в зрелом молоке у матерей, дополненных пробиотиками, по сравнению с контрольной группой ( рисунок 2 D). Другие исследования продемонстрировали эффективность некоторых штаммов бактерий, выбранных для их способности повышать уровни IL-10 цитокинов, в профилактике и / или лечении коликов [ 5 ].

Мы можем предположить, что повышенный уровень ИЛ-10 в материнском грудном молоке, вызванный нашим пробиотическим препаратом, может быть причиной уменьшения симптомов колики у младенцев.

При оценке профиля провоспалительных цитокинов наши данные показывают значительное временное снижение ИЛ-6 в материнском молоке у матерей, дополненных пробиотиками, хотя среднее значение в молозиве было значительно выше у матерей, дополненных пробиотиками, по сравнению с контрольной группой , В зрелом молоке уровни IL-6 достигали примерно одинаковых значений контрольной группы. ( Фиг. 2С).

Предыдущее пилотное исследование показало, что концентрация IL-6 в грудном молоке в первые месяцы жизни может сыграть решающую роль в накоплении жира и массы тела [ 21 ]. По мнению авторов, концентрация IL-6 в грудном молоке имела повсеместные отрицательные ассоциации с ростом младенцев и ожирением. Наши данные не дают убедительных доказательств корреляции между концентрацией IL-6 в грудном молоке и младенческим BMI, хотя тенденция снижения, не статистически значимая, наблюдается на T30. Дальнейшие исследования с более длительным наблюдением необходимы для лучшего уточнения этой гипотезы.

Что касается среднего значения IL-1β, мы обнаружили небольшое снижение значения между молозивом и зрелым молоком без статистически значимых различий между пробиотическими добавленными матерями и контрольной группой ( рисунок 2 A).

Наконец, наши результаты показывают, что вводимые пробиотические микроорганизмы не влияют на концентрацию фекального лактоферрина в исследуемых временных точках ( рис. 4 ). Согласно нашим предыдущим данным [ 22 ], концентрация фекалий лактоферрина чрезвычайно высока у младенцев и значительно возрастает от T0 до T30. Этот рост происходит, когда концентрация лактоферрина в грудном молоке уменьшается в продольном направлении [ 5 ].

Наши результаты, наконец, указывают на то, что устные добавки пробиотиков к матерям в перинатальный период могут также иметь последствия для безутешного плач и регургитации в первый месяц жизни, однако эти данные нельзя считать окончательными, поскольку мощность расчета размера выборки не была адекватной для оценки различий между групп.

В нашем предыдущем исследовании мы не наблюдали каких-либо существенных различий в составе микробиоты новорожденных кишечников между плацебо и контрольными группами, что указывает на то, что добавление пробиотиков для матери не изменяет количество полезных для кишечника полезных бактерий у новорожденных. Это также подтверждает гипотезу о том, что колонизация кишечника не может быть существенной для пробиотических биологических эффектов.

Благотворное влияние материнской пробиотической добавки на неонатальный желудочно-кишечный дискомфорт, по-видимому, зависит от различий в профиле цитокинов в грудном молоке.

Идти к:

Выводы

Наше исследование демонстрирует, что добавление к матери с этим специфическим высококонцентрированным пробиотическим препаратом модулирует цитокины в молочной железе и синтез sIgA в слизистой оболочке новорожденных. Было также продемонстрировано, что эта добавка к матерям может снизить начало функциональных симптомов желудочно-кишечного тракта.

Однако стандартное добавление пробиотиков с высокими дозами во время беременности и лактации не может быть рекомендовано. Дальнейшие исследования в этой области необходимы для подтверждения наших результатов и выявления матерей, которые могут получить преимущества от перинатальной добавки. Недавно было продемонстрировано, что мать с FGID может предрасполагать своих детей к FGID [ 23 ]. Основываясь на наших результатах, было бы интересно проверить, можно ли предложить раннее добавление пробиотиков с высокими дозами для матерей, страдающих от FGID.

Идти к:

Подтверждения

Авторы с благодарностью признают финансовую поддержку NOPAIN ONLUS для покрытия расходов на публикацию. Кроме того, мы хотим поблагодарить Клаудио Де Симоне, который одарен активным учебным продуктом без какой-либо роли в разработке и проведении исследования; сбор, управление, анализ или интерпретация данных; подготовка, рассмотрение или утверждение рукописи и решение о представлении рукописи для публикации.

Идти к:

Сокращения

В этой рукописи используются следующие сокращения:

Ig	иммуноглобулин
LAB	Молочнокислые бактерии
переменный ток	Аккремовая целлюлаза
сИгА	Секреторный IgA
Иллинойс	Интерлейкин
TGF-β1	Трансформирующий фактор роста-β1
Hb	гемоглобин
FGIDs	Функциональные желудочно-кишечные расстройства
BMI	Индекс массы тела

Идти к:

Авторские вклады

Мария Элизабетта Бальдассарр концептуализировала и разработала исследование; сбор, анализ и интерпретация данных; и рассмотрел первоначальную рукопись. Она имела полный доступ ко всем данным в исследовании и берет на себя ответственность за целостность данных и точность анализа данных. Антонио Ди Мауро внес существенный вклад в интерпретацию данных, подготовил первоначальную рукопись и пересмотрел рукопись; Доменико Мартинелли, Флавия Урбано, Паола Мастромарино и Даниэле Капобианко внесли существенный вклад в разработку и разработку исследования, а также за сбор и интерпретацию данных, а также рассмотрели и пересмотрели рукопись; Маргерита Фанелли внес существенный вклад в концепцию и дизайн исследования, а также за проведение анализа и интерпретации данных. Никола Лафоргия внес существенный вклад в разработку концепции и дизайна исследования, а также за проведение интерпретации данных, пересмотра и пересмотра рукописи. Все авторы утвердили окончательную рукопись, представленную.