Бактериологический метод исследования. Проведение 2 этапа бактериологического метода выделения аэробов. Культуральные свойства бактерий.

Цель второго этапа бактериологического метода: получение чистой культуры микроорганизмов и ее накопление. Для этого проводят:

· Макроскопическое изучение колоний в проходящем и отраженном свете (характеристика величины, формы, цвета, прозрачности, консистенции, структуры, контура, поверхности колоний).

· Микроскопическое изучение изолированных колоний. Приготовление, окраска и просмотр мазков из этих колоний.

· Посев колоний, характерных для определенного вида, на среды накопления чистой культуры или элективные среды и инкубация в оптимальных условиях.

Культуральные признаки микробов определяются харак­тером роста их на питательных средах. Будучи постоянными, для каждого вида микроба, они являются важным диагно­стическим признаком.

Выделяя чистую культуру микроорганизма, следует обращать внима­ние на характер роста микроба, т.е. на культуральные особенности как на один из признаков, позволяющий идентифицировать род, вид микроорга­низма. При культивировании микроба на жидких средах, можно видеть рост бактерий в виде:

а) диффузного помутнения;

б) придонного и пристеночного роста в прозрачной среде;

в) поверхностной пленки;

г) «комочка ваты».

В полужидких средах можно наблюдать:

а) диффузный рост вокруг посева уколом (подвижные бактерии);

б) рост по ходу укола (неподвижные бактерии);

в) разрыв среды или образование пузырьков газа.

На плотных средах наблюдается:

а) рост отдельными колониями;

б) рост сплошным налетом.

Рост микробов на плотной питательной среде. Для изуче­ния свойств колоний микробы культивируют на плотных пи­тательных средах в чашках Петри. При посеве материала стараются получить изолированный рост колоний.

По характеру колоний выделяют следующие типы:

· S-тип (от англ. smooth — гладкий) — колонии характеризуются круглой и выпуклой формой, гладкой поверхностью, влажной консистенцией;

· R –тип (от англ. rough — шероховатый) колонии характеризуются шероховатой поверхностью, неправильными краями, сухой консистенцией. Образуются из гладких S -форм в результате мутаций. Переход S-форм в R-формы наблюдается при диссо­циации. Явление диссоциации у патогенных микробов на­блюдается под действием антибиотико — и химиотерапии, фак­торов специфического иммунитета, формирующихся в течение инфекционного процесса, а также факторов внешней среды.

· Помимо этих двух основных типов колоний существует слизистый М-тип (от лат. mucus — слизистый), характеризующийся тягучей слизистой консистенцией. Образуется в процессе диссоциаций бактериальных культур.

Бактерии каждого вида формируют колонии с различными признаками. Их характер изучают невооруженным глазом в проходящем и отраженном свете, а также с помощью лупы или микроскопа с малым увеличением. В начале исследования чашку поворачивают дном к себе и рассматривают чашки в проходящем свете. При наличии разных колоний каждую из них нумеруют и описывают в отдельности. В протоколе отмечают следующие характеристики.

1. Величина колоний определяется ее диаметром (крупные — диаметром 4-6 мм и более, средние — 2-4мм, мелкие — 1-2мм и точечные — менее 1мм).

2. Форма колоний (правильная круглая, неправильная амебовидная, розеткообразная, ризоидная — корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев и т.п.).

3. Степень прозрачности (непрозрачная, полупрозрачная, прозрачная).

4. Структуру колоний. По характеру структуры различают следующие виды ко­лоний:

· гиалиновые — бесцветные, прозрачные, без видимой определенной структуры;

· зернистые, которые в зависимости от величины зерен разделяются на мелко — и грубозернистые;

· нитевидные или волокнистые, характеризующиеся на­личием длинных, густо переплетающихся нитей в толще ко­лонии. Колонии бывают однородные и неоднородные. Строение первых одинаково во всех частях, у вторых центральная часть отличается от периферической или отдельные сектора имеют строение, неодинаковое с остальной массой.

5. Цвет колонии определяется пигментом, который проду­цирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует, вследствие чего колонии их бесцветны или молочно-мутного цвета, похожи на опал. В проходящем свете такие колонии в большей или меньшей степени прозрачны. Пигментообразующие виды мик­робов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.

6. Характер поверхности (шероховатая, блестящая, матовая, сухая, влажная, гладкая, радиально или концентрически исчерченная).

7. Характер контура края. Различают ровные края в виде четко выраженной ли­нии и неровные. Последние делят на:

·фестончатый край, состоящий из крупных, слегка округ­лых или уплощенных зубцов правильной формы;

·волнистый край, который несколько отличается от фе­стончатого тем, что крупные зубцы его выражены нечетко;

·эрозированный, или зазубренный, край, состоящий из острых зубцов различной величины и формы;

·бахромчатый край, имеющий нежные ворсинки. В некоторых случаях четко выраженная линия, отграни­чивающая колонию от поверхности среды, отсутствует. Такой край колонии называется расплывчатым.

8. Рельеф характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе. Различают рельеф выпуклый, вдавленный, плоский, конусообразный, куполообразный, плоский с конусовидным центром, с утолщенными валикообразными краями и т. п.

9. Консистенцию колонии, определяющую ее физиче­ское состояние, исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериальной петлей. По характеру консистенции колонии бывают:

· пастообразные, легко снимающиеся и размывающиеся по поверхности питательной среды наподобие сливочного масла;

· вязкие или слизистые, прилипающие и тянущиеся за петлей

· волокнистые или кожистые, плотные, снимающиеся с поверхности питательной среды в виде упругой пленки, соот­ветствующей величине и форме колонии;

· хрупкие, сухие, рассыпающиеся при прикосновении петли.

Колонии некоторых видов бактерий врастают в толщу питательной среды, что также определяют бактериологической петлей.

10. Запах — менее важный признак колоний, поскольку вызываемые им ассоциации носят субъективный характер. Многие виды бактерий в процессе роста на питательных средах выделяют специфические ароматические вещества. В частности, культуры синегнойной палочки имеют запах карамели, культуры листерий — молочной сыворотки, нокардий — свежевскопанной земли, протеев — гнилостный запах.

III. План практической работы

1. Изучить культуральные свойства колоний, выросших на МПА (просмотр посевов сделанных на предыдущем занятии)

2. Изолированную колонию (чистую культуру) отсеять (штрихами) на среду накопления (скошенный МПА)

3. Изучить и зарисовать характер роста различных бактерий на простых и сложных питательных средах

4. Заполнить таблицу « Классификация микроорганизмов по типам дыхания»

5. Решить ситуационные задачи

IV. Примеры ситуационных задач

Ситуационная задача № 1

Возбудитель туберкулеза на среде Левенштейна-Йенсена формирует колонии желтовато-кремового цвета, с неровным краем, шероховатой поверхностью, сухой консистенции, крошковатые напоминающие цветную капусту (хлебные крошки, манная крупа). Определите генетический тип колоний:

1. S

2. R

3. M

4. O

Ситуационная задача № 2

Золотистый стафилококк (S.aureus) на плотной питательной среде образует круглые колонии средних размеров бело-кремового цвета, с ровным краем, гладкой поверхностью, влажной консистенции, однородной внутренней структурой. Определите генетический тип колоний:

1. S

2. R

3. M

4. О

Ситуационная задача № 3

В микробиологической лаборатории произвели посев испражнений больного на среду Эндо, после культивирования при температуре 37°С через 24 часа определили наличие колоний ярко-малинового цвета с характерным металлическим блеском. Дайте характеристику выделенных микроорганизмов:

1. лактозоположительные
2. лактозоотрицательные
3. глюкозоположительные
4. глюкозоотрицательные

Среда Эндо относится к дифференциально-диагностическим средам и позволяет выявить ферментацию ______________, поскольку содержит этот углевод в качестве субстрата.

1. глюкозы
2. лактозы
3. сахарозы
4. мальтозы

Ситуационная задача № 4

Назовите условия культивирования для большинства патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, которые вызывают различные инфекционные заболевания:

1. 37°

2. 20°С

3. 18-48 часов

4. 5 часов