Микроскопировать с масляной иммерсией готовые микропрепараты различных видов стрептококков (S.Pyogenes, S.Pneumoniae), описать морфологические и тинкториальные свойства, зарисовать
S.pyogenes в мазках, окрашенных по Граму представлены неподвижными сферическими или слегка вытянутыми кокками размером 0,5-2,0 мкм, располагающиеся парами или короткими цепочками (от греч. streptos — цепочка и kokkos — ягода); грамположительны.
Пневмококки (S.pneumoniae ) представлены неподвижными овальными или ланцетовидными кокками диаметром около 1 мкм. В мазках из клинического материала располагаются парами, окруженными толстой капсулой.
Произвести учёт реакции, поставленной на определение антител к О-стрептолизину в диагностике ревматизма.
Реакция основана на подавлении (нейтрализации) антителами сыворотки крови способности О-стрептолизина вызывать гемолиз. Реакцию ставят со стандартным сухим О-стрептолизином. Компоненты реакции: 1. Исследуемая сыворотка
2. О-стрептолизин
3. 5% взвесь эритроцитов
4. фосфатный буфер
Для постановки реакции исследуемую сыворотку прогревают при 56°С в течение 30 минут и разводят фосфатным буфером 1:50, 1:250, 1:1000. Диагностический препарат О-стрептолизина также разводят буфером и применяют в количестве 0,3 мл, в котором содержится 1 рабочая доза О-стрептолизина. Рабочая доза — это количество О-стрептолизина, которое почти полностью нейтрализуется половиной международной единицы анти-О-стрептолизина стандарта ГИСК. О-стрептолизин в рабочей дозе должен вызывать полный лизис 0,2 мл 5% взвеси эритроцитов. Разведенную сыворотку и другие ингредиенты разливают по пробиркам согласно таблице №5 инкубируют. После инкубации отмечают последнюю пробирку, в которой сыворотка еще нейтрализует рабочую дозу О-стрептолизина (гемолиз отсутствует).
Таблица 5. Схема постановки антистрептолизиновой реакции с О-стрептолизином
| Ингредиент | Количество материала (мл) | |||||||||||
| Номера пробирок | Контроль | |||||||||||
| Исследуемая сыворотка 1:50 | 0,4 | 0,2 | 0,15 | 0,1 | - | - | - | - | - | - | - | -- |
| Исследуемая сыворотка 1:250 | - | - | - | - | 0,4 | 0,3 | 0,25 | 0,2 | 0,1 | - | - | -- |
| Исследуемая сыворотка 1:1000 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,25 | 0,1 | -- |
| Фосфатный буфер, мл | 0,1 | 0,3 | 0,35 | 0,4 | 0,1 | 0,2 | 0,25 | 0,3 | 0,4 | 0,25 | 0,25 | 0,8 0,5 |
| Стрептолизин О, мл | По 1 мл в каждую пробирку, инкубация 45 мин при 37º С | — 0,3 | ||||||||||
| 5% взвесь эритроцитов, мл | По 0,2 мл в каждую пробирку, инкубация 1 ч при 37º С | — - | ||||||||||
| Число АЕ St-О в 1 мл в международных единицах | -- |
Титр сыворотки выражают числом единиц анти-О-стрептолизина (AE St-O) в 1 мл (указаны на демонстрационных пробирках). Титр анти-О-стрептолизина до 250 AE St-O обнаруживается у практически здоровых людей. При ревматическом процессе с первых дней болезни антитела выявляют в высоких титрах — 500 AE St-O и выше.
Решение ситуационных задач
Модуль II «Стафилококковые и стрептококковые инфекции. Инфекции,
вызываемые спорообразующими и неспорообразующими анаэробами»
Занятие № 2
ТЕМА: Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых спорообразующими и неспорообразующими анаэробами
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ знать: классификацию и таксономию, морфологические, тинкториальные, культуральные, антигенные, биохимические свойства, факторы патогенности, особенности культивирования возбудителей газовой гангрены, столбняка; ботулизма; эпидемиологию, патогенез, микробиологическую диагностику и биопрепараты для этиотропного лечения и специфической профилактики газовой гангрены, столбняка, ботулизма; основные биологические свойства бактероидов, порфиромонад, превотелл, фузобактерий, вейлонелл, пептококков, пептострептококков; микробиологическую диагностику; методы профилактики и терапии
уметь: приготавливать мазки из раневого отделяемого, окрашивать их по Граму и Ожешко, микроскопировать с масляной иммерсией, определять морфологические и тинкториальные свойства анаэробов, учитывать реакцию нейтрализации с учётом на белых мышах, идентифицировать чистые культуры неспорообразующих анаэробов с помощью API-систем
Задание на дом
1. Вопросы для самоподготовки:
1) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики газовой анаэробной инфекции
2) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики столбняка
3) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики ботулизма
4) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики инфекций, вызываемых неспорообразующими анаэробами: бактероидами, порфиромонадами, превотеллами, фузобактериями, вейлонеллами, пептококками и пептострептококками