Определение активности аспартатаминотрансферазы (АСТ).
Ход работы: 1. Приготовить субстратный раствор: 29,2 мг ά-кетоглутаровой кислоты и 2,66мг аспарагина растворить в 1 н растворе NaOH, добавляя его малыми порциями до pH = 7,4, затем раствор перелить в мерную колбу на 100 мл и довести до метки 0,1 М фосфатным буферным раствором с pH = 7,4 (добавление 1 капли хлороформа позволяет хранить в рефрижераторе). Раствор для работы представлен.
2. 0,1 мл сыворотки крови смешать с 0,5 мл нагретого до 37ºС субстратного раствора, инкубировать 60 мин при 37ºС; прибавить 0,5 мл динитрофенилгидразинового реактива и экспонировать 15 мин при комнатной температуре. Прибавить 5 мл 0,4 н раствора NaOH и через 20 мин колориметрировать против контроля (кювета – 10 мм, фильтр зеленый). Контроль – те же реактивы + 0,1 мл H2O. Определить активность по таблице.
Таблица для вычисления активности АСТ
| Экстинкция | Е по Врублевскому | IE |
| 0,020 0,040 0,060 0,080 0,100 0,120 0,140 0,160 0,180 0,200 0,220 0,240 0,260 |
Выполните следующие задания:
1. Выполните « цепное задание»:
а. Наиболее активно в тканях происходят реакции трансаминирования между (два правильных ответа):
А. Ала + альфа-кетоглутарат
Б. Лиз + альфа-кетоглутарат
В. Сер + альфа-кетоглутарат
Г. Лей + альфа-кетоглутарат
Д. Асп + альфа-кетоглутарат
б. Эти реакции соответственно катализируют ферменты (укажите полное название ферментов и используемые аббревиатуры):
а. Лейцинаминотрансфераза.
б. Треониндегидрогеназа.
в. Аланинаминотрансфераза.
г. Аспартатаминотрасфераза
д. Лизилоксидаза
в. Напишите формулами реакции трансаминирования между выбранными субстратами, назовите кофермент:
г. Эти ферменты присутствуют в большинстве тканей, но преимущественно в:
А. Печень; Б. Почки; В. Нервная; Г. Легкие; Д. Миокард
д. Определение активности указанных ферментов в сыворотке крови проводится для диагностики заболеваний:
а. Печени; б. Почек; в. Нервной системы; г. Легких; д. Миакарда.
е. Причиной повышения активности этих ферментов в крови является:
А. Воспалительный процесс в соответствующем органе;
Б. Некроз ткани соответствующего органа;
В. Появление в крови активаторов ферментов
2. Почему АСТ и АЛТ называют органоспецифичными ферментами?
3. Что характеризует коэффициент де Ритиса? С какой целью используют коэффициент де Ритиса в лечебном деле?
Как изменяется коэффициент де Ритиса при усиленном развитии некроза печени?
4. Выберите правильный ответ:
Снижение активности трансаминаз происходит при гиповитаминозе:
а. В1; б. В6; в. В2; г. Н; д. В5
5. Выберите правильный ответ:
Для дезаминирования большинства аминокислот характерно:
А. Сочетанное действие аминотрансферазы и глутаматдегидрогеназы.
Б. Образование аммиака в результате действия аминотрансферазы.
В. Увеличение общего количества свободных аминокислот
Г. Неокислительное дезаминирование.
Д. Использование этой реакции как для синтеза, так и для катаболизма аминокислот.
6. Дайте аргументированный ответ: Как в условиях голодания человека изменится активность глутаматдегидрогеназы ? Какова роль АДФ?
Аммиак оказывает токсическое действие на организм, так как: 7. Выберите правильные ответы ( аргументируйте ваше решение):
А.Сдвигает рН крови в кислую сторону.
Б. Нарушает синтез нейромедиатора ГАМК.
В. Вызывает гипоэнергетическое состояние.
Г. Вызывает алкалоз.
Д. Ухудшает снабжение головного мозга кислородом.
8. Гиповитаминоз В6 на фоне белкового голодания приводит к развитию гингивита, стоматита и других заболеваний десен и слизистой оболочки полости рта, снижению скорости синтеза белков в клетках. Объясните как изменится азотистый баланс. Для этого:
А. дайте определение азотистого баланса;
Б. перечислите аминокислоты, недостаток которых будет снижать скорость синтеза белка;
В. предположите, скорость каких реакций снизится в организме при гиповитаминозе В6, напишите формулами реакцию с участием аспартата, назовите фермент, кофермент.
9. Гормон кортизол при длительном голодании индуцирует в печени синтез фермента АЛТ.
Объясните биологическое значение ускорения синтеза фермента. Для этого:
А. напишите реакцию, которую катализирует этот фермент;
Б. дайте его полное название, укажите кофермент;
В. укажите, какую функцию выполняют реакции подобного типа в организме человека при голодании;
Г. назовите, при каких заболеваниях в крови человека повышается активность этого фермента при нормальном питании, укажите, соотношение активности каких ферментов определяется для диагностики.
10.Аланин с рационом поступает в организм в трехкратном избытке. Возможные превращения избыточного аланина? Изобразите в виде схемы.
11. Известно, что потребление 1 г белка сопровождается образованием 0,16 г азота в форме мочевины. Энерготраты пациента составляют 3500 ккал в сутки, выделение мочевины - 20 г за сутки. Определить долю белка в энерготратах (калорийность белка - 4,1 ккал/ г).
12. Глутаминовая кислота в процессе окислительного дезаминирования превращается в α-кетоглутаровую. Рассчитать энергетический эффект полного окисления 1 М глутаминовой кислоты (в молях АТФ).
13. В крови повысился уровень глутамина, увеличилось количество аммонийных солей и мочевины в моче, одновременно снизился уровень глутаминовой кислоты в крови. Оцените эти сдвиги.
Задание для самостоятельной работы (выполняется письменно):
1. Продолжите составление словаря терминов и понятий по данной теме.
2. На схеме «Взаимосвязь углеводного и липидного обменов» (подготовленную на предыдущих занятиях) указать метаболические пути аминокислот, проиллюстрировав взаимосвязь всех обменных процессов.
3. Составить дифференциально-диагностическую таблицу: Врожденные нарушения обмена аминокислот:
| Наименование патологии | Энзимдефект | Субстраты, обмен которых нарушен | Метаболиты, уровень которых изменяется |
4. Напишите реферат « Основные аспекты биосинтеза белка». В основу –вопросы №№ 3-10 раздела «вопросы для самоподготовки»