Тактика и методика эпизоотологического обследования
В настоящее время Прикаспийский Северо-Западный природный очаг чумы находится в межэпизоотическом периоде, но, учитывая неблагоприятный эпизоотологический прогноз на его активизацию в начале текущего столетия, связанную с определёнными фазами векового и 11-летнего циклов солнечной активности, явлением не синхронности функционирования 14 и 43 очагов, в последнем из которых наблюдается повышение активности, тактика и методика эпизоотологического обследования будут строиться на основании установленной дифференциации территории по уровню эпидемической опасности.
На территории деятельности Сарпинского эпидотряда имеются: 2 сектора со средним уровнем эпидемической опасности (1433800631 и 01724), 2 сектора – с низким(1433801643,01811) и 113 секторов с очень низким уровнем эпидемической опасности (ЭО).
До выявления эпизоотии чумы будет производиться забор материала для лабораторного исследования в секторах, в первую очередь, с высокими его значениями по методике поиска разлитых эпизоотий. В секторах с очень низким уровнем эпидемической опасности будет производиться только визуально-рекогносцировочное обследование (ВРО) 1 раз в 2-3 года зоолого-паразитологическими и подвижными противоэпидемическими группами, включающее в осенний период визуальный учёт численности мышевидных, сбор трупов и костных останков грызунов, погадок хищных птиц, других объектов внешней среды для лабораторного исследования.
Эпизоотологическое обследование территории будет проводиться в течение 2-х дней в сентябре 21-го дня в октябре и 3-х днейв ноябре 2016г. силами одной зоолого-паразитологической бригады.
Зоологическая работа
Тактика и методика планируемых работ в осеннем сезоне на территории деятельности Сарпинского эпидотряда определяется на основании дифференциации территории по степени потенциальной эпидемической опасности первичных районов.
Эпизоотологическое обследование будет проводиться по методике поиска разлитых эпизоотий чумы в поселениях грызунов. Учетной единицей будет считаться сектор первичного района.
В соответствии с инструктивно-методическими документами, а так же планом работы станции на 2016 г. зоологическая работа заключается в следующем:
1. Комплексная добыча полевого материала для лабораторного исследования (грызуны, погадки, пробы внешней среды и т.д.).
2. Сбор данных, характеризующих динамику численности основных и дополнительных носителей и переносчиков чумы, распределение их в пространстве, в том числе в населенных пунктах.
3. Проведение информационно-разъяснительной работы с населением.
4. Формирование сети санитарных уполномоченных.
Тактика и методика учета грызунов и эктопаразитов
В настоящее время 14 очаг находится в межэпизоотическом периоде. В секторах со средним уровнем эпидемической опасности (2 сектора) - с.с.Садовое, Обильное; и низким уровнем (2 секторов) - п.п.Догзмакин, Аршань-Зельмень - в 2016 г. будут забираться по 1 пробе на каждый сектор. В остальных секторах с очень низкими показателями уровня эпидопасности (113 секторов) выборочно будет произведен забор материала, а также повсеместно проведено визуально-рекогносцировочное обследование.
Список секторов с различными уровнями эпидемической опасности прилагается.
1. Учет численности мышевидных грызунов будет проводиться ловушками «Геро» в совместных поселениях с основным носителем, окрестностях населённых пунктов, жилых домах.
2. Также будет проводиться наблюдение за уровнем и динамикой численности эктопаразитов.
3. Учет блох в закрытых биотопах будет проводиться фланелевыми флажками (при возникновении эпизоотии – клеевыми листами).
4. По всей территории будет проводиться сбор трупов грызунов, погадок хищных птиц.
Работа по туляремии
Эпизоотологическое обследование на туляремию будет проводиться параллельно с обследованием на чуму.
При обследовании территории Сарпинского эпидотряда особое внимание будет уделено участкам, расположенным в северной части Сарпинской низменности — поселки М.Дербеты и Ханата где имеются места «укоренения» туляремийной инфекции (оросительные каналы, берега водоемов).
Кроме того, будут обследоваться берега водоемов и влажные биотопы на Ергенинской возвышенности в районе поселков Аршань-Зельмень, Садовое, где ранее были выделены культуры туляремийного микроба. Кроме грызунов, носителей туляремийной инфекции для исследования будет произведён забор проб внешней среды (вода, солома, зернофураж).
Работа по лептоспирозу
На обследуемой территории имеются влажные биотопы, в которых обитают влаголюбивые грызуны и насекомоядные, являющиеся носителями лептоспироза в природе. На территории Октябрьского, Сарпинского и Малодербетовского районов, в предыдущие годы обнаруживали у грызунов антитела к лептоспирам серогруппы Роmопа.
В осенний период 2013 г. выявлен положительный результат на наличие антител у исследуемой группы животных в секторе 00614 в районе водохранилища Ялмата.
С начала 2013 года по данным Управления ветеринарии Республики Калмыкия (письмо от 23.08.2013 г. № ВС-07-04-2391) на территории Калмыкии было зарегистрировано 4 неблагополучных пункта по лептоспирозу крупного рогатого скота. На обследуемой территории выявлено 2 – неблагополучных пункта: 1 - в Кетченеровском районе в Гашун-Бургустинском сельском муниципальном образовании в крестьянском (фермерском) хозяйстве Багаева Б.Б.; 2 – в Октябрьском районе в Иджилском
(01923) сельском муниципальном образовании в крестьянском (фермерском) хозяйстве Хасыковой В.А.
Вблизи неблагополучных пунктов в различных биотопах будет произведен отлов грызунов для исследования, а также забор проб внешней среды (вода, солома, зернофураж).
Наличие выявленных природных и антропургических очагов на территории, обслуживаемой Сарпинским эпидотрядом, обуславливает необходимость проведения работы по этой инфекции.
Паразитологическая работа
Паразитологическая работа будет проводиться согласно регламенту эпизоотологического обследования участков природных очагов чумы с различным уровнем эпидемической опасности (см. Зоологическую работу).
Методы сбора эктопаразитов в местах их обитания, а также орудия лова носителей будут стандартными. Наиболее полные сборы можно получить при условии достаточно быстрого изъятия животных из орудий лова, пока эктопаразиты не успели покинуть труп хозяина. Поэтому при отлове активных в течение дня животных предпринимается систематический осмотр орудий лова, а при отлове ночных животных орудия лова проверяется на рассвете или при необходимости - в ночное время.
При эпизоотологическом обследовании очага чумы внимание будет уделяться сбору блох с шерсти хозяина. Основной сбор будет проводиться со зверьков при их очесе в лаборатории. Осмотру на наличие эктопаразитов будут подлежать все найденные трупы млекопитающих и птиц.
Целью проводимых в процессе эпизоотологического обследования разового учета численности является получение оперативной информации, позволяющей судить о численности переносчиков в текущем сезоне на всей очаговой территории. Так как, видовая принадлежность эктопаразитов определяться не будет, планируется определение общего индекса обилия переносчиков.
Обследование населенных пунктов на наличие эктопаразитов является необходимым условием профилактики чумы и других зоонозов. Планируется обследовать на зараженность эктопаразитами населенные пункты: Тундутово, Унгун Терячи, Ханата, Зурган, Аршань-Зельмень, Обильное, Коробкин, Садовое, Малые Дербеты.
Показателями численности эктопаразитов в жилье человека служат индексы обилия на 10 м2 пола. Вычисляется также индекс встречаемости - процент строений с эктопаразитами. Сбор и учет численности эктопаразитов будет проведен также при очесе всех грызунов, отлавливаемых в населенных пунктах.
На основании полученных данных будет устанавливаться существование паразитарного контакта между жильем человека и природным очагом, и определяться показатели для проведения поселковой дезинсекции.
Лабораторная работа
Работа по чуме
Тактика и методика лабораторных исследований на чуму будет определяться их информативностью в различные фенологические периоды жизнедеятельности носителей и переносчиков чумы, в зависимости от характера и качества доставленного материала. Объем исследований будет определяться эпидемиологической и эпизоотологической неоднородностью территории.
Исследованию будут подлежать: грызуны, зайцеобразные, насекомоядные, наземные хищники, их эктопаразиты, трупы и костные останки мелких млекопитающих, погадки хищных птиц.
Отношение к полевому материалу будет дифференцированным. Взрослые особи малых сусликов будут исследоваться параллельно серологическим (на наличие специфических антител в РНГА – РНАг) и бактериологическим методами. Молодые малые суслики до периода расселения будут исследоваться только бактериологическим методом, далее - обоими методами.
При бактериологическом исследовании грызунов и других теплокровных будут применяться как групповые, так и индивидуальные посевы. При этом, до обнаружения эпизоотий на данной территории у всех зверьков, подлежащих бактериологическому исследованию, будут забираться печень и селезёнка. В один групповой посев будут объединяться органы 2-х – 10-и зверьков. При исследовании малых сусликов будет забираться 1/3 – 1/2 селезёнки, от песчанок и других мышевидных грызунов селезенка будет использована полностью. Органы будут растираться в ступке с добавлением кварцевого песка, проверенного на отсутствие бактерицидности, разбавляться физиологическим раствором 1:1 и полученная полужидкая масса будет наноситься пестиком на три сектора пластинки агара рН 7,2 с последующим рассевом петлей.
При индивидуальном исследовании на агаровую пластинку методом отпечатков будут производиться посевы печени, селезенки и крови с последующим рассевом петлей.
Посевы будут производиться на пластинку селективного питательного агара рН 7,2, с кристаллвиолетом в качестве ингибитора посторонней микрофлоры. Агар будет готовиться отделом средоварения ЭПЧС из сухой питательной среды. Определение ростовых качеств агара проведено в КЖК станции.
При выделении первой культуры посевы будут дублироваться – отпечатками органов и посевом их суспензий после растирания. Для определения остроты эпизоотии дополнительно планируется производить посев крови из сердца. Бактериологическое исследование будет включать посев органов отпечатками и их суспензий на слабощелочной агар, а суспензии органов и крови – дополнительно в слабощелочной питательный бульон.
У трупов животных, найденных в поле, и у животных с характерными для чумы патолого - анатомическими изменениями будут исследоваться печень, селезенка, кровь, легкие и лимфоузлы (у трупов дополнительно костный или головной мозг).
При наличии биопробных животных будет применяться биологический метод исследования (заражение биопроб).
Исследование суспензии органов на поиск ДНК чумного микроба методом ПЦР будет проводиться на базе центральной баклаборатории.
Обеззараженные суспензии трупов грызунов, теплокровных, экстракты погадок хищных птиц, суспензии головного мозга грызунов будут доставлены в центральную баклабораторию для дальнейшего исследования методом ПЦР.
Эктопаразиты будут исследоваться групповым методом. В один посев будет включаться до 30 блох. Индивидуально будут исследоваться эктопаразиты, собранные с трупов грызунов. Блохи перед исследованием будут усыпляться эфиром, без предварительной промывки ссыпаться в стерильную ступку, куда будет вноситься 0,5 мл 0,9%-го раствора хлористого натрия. После растирания будет произведен высев на пластинки селективного слабощелочного агара с антифаговой сывороткой.
При исследовании полевого материала на чуму будут применяться агар рН 7,2, приготовленный из сухой селективной питательной среды для выделения и культивирования чумного микроба, бульон рН 7,2.
Среды для изучения биохимической активности чумного микроба и постановки идентификационных тестов будут приготовлены отделом средоварения станции.
Антифаговая чумная сыворотка будет применяться, согласно наставлению, при исследовании загнившего материала, грызунов с патолого-анатомическими изменениями, предположительно, инфекционного характера и при посеве эктопаразитов.
В условиях эпидотряда идентификация подозрительных на чуму культур планируется в объеме изучения морфологии колоний на агаре, характера роста на бульоне, морфологии микробных клеток в мазках, отношения к чумным и псевдотуберкулезному фагам, рамнозе, глицерину.
Окончательная идентификация культур и их изучение будут проводиться на базе бактериологической лаборатории станции.
Экстренные исследования клинического и патолого-анатомического материала от людей на чуму с территории деятельности эпидотряда также будут проводиться на базе баклаборатории станции, куда он будет доставляться специальным транспортом.
Серологические исследования будут направлены на поиск антител к специфическому антигену FI в сыворотке крови у основных носителей чумы, наземных хищников, и антигена в тканях и органах зверьков с патолого-анатомическими изменениями, их трупов, в костных останках и мумифицированных трупах мелких млекопитающих, погадках хищных птиц.
Для поиска антител будут исследоваться высушенные на фильтровальных бумажках, пропитанных мертиолятом натрия в разведении 1:1000 (обеззараживание наступает после часовой экспозиции при комнатной экспозиции), образцы крови относительно резистентных к чумному микробу зверьков (малый суслик, мелкие куньи и др.) после экстрагирования физраствором и прогревания при 56°C в течение 30 минут. Для обнаружения антител будут поставлены РНГА с антигенным диагностикумом, а также РНАг с иммуноглобулиновым диагностикумом. При массовых исследованиях реакции будут ставиться в два этапа: вначале, каждая из реакций в двух луночках и только при положительных результатах будут ставиться развернутые реакции для определения их титра. Система однонаправленных реакций весьма информативна, т.к. по соотношению титров двух реакций (превышение титра РНАг) можно судить о давности контакта зверька с микробом, а при достаточно большом количестве исследований – о фазе эпизоотии на данном участке территории.
При получении сомнительных результатов планируется повторять реакции после адсорбции исследуемого материала 50%-й взвесью формалинизированных, но несенсибилизированных эритроцитов, параллельно ставить идентичные реакции с гетерологичными диагностикумами (туляремийным. бруцеллезным, холерным и др.).
Для поиска антигена планируется готовить суспензию из исследуемого материала, добавляя к нему 0,9% - й раствор хлористого натрия: на 1 часть субстрата добавлять 9 частей раствора хлористого натрия; мерно отбирать в пробирку и добавлять формалин до 2% - ной концентрации. После отстаивания в течение не менее 12 ч (лучше 20 - 24 ч) отбирать над осадочную жидкость и ставить серологические реакции: РНГА с иммуноглобулиновым диагностикумом и РНАт с антигенным диагностикумом.
Обеззараживание суспензий внутренних органов животных,суспензий эктопаразитов, бактериальных взвесей, костных останков, субстратов гнезд грызунов, погадок хищных птиц, предназначенных для серологического исследования осуществляется путём добавления формалина до 2 - процентной концентрации с последующей экспозицией не менее 12 часов или до 4-процентной концентрации с экспозицией при комнатной температуре в течение 1 часа.
Работа по туляремии
На территории, обслуживаемой Сарпинским эпидотрядом, имеются 2 типа очагов туляремии: степной (на основной части территории) и поименно - болотный (в увлажнённых биотопах). До 1990 года эпизоотии туляремии на территории Сарпинской низменности регистрировались почти ежегодно: в 1978 году, 1980-84г.г., 1987 году - в Октябрьском (п.п. Шарлджин, Восход, Б.Царын, с/х Калмыцкий), в 1987 году - в Мало-Дербетовском (п.п.Малые-Дербеты, Красносельский) районах, в 1988 году в Сарпинском районе (Аршань-Зельмень). В 1989 году было зарегистрировано 3 случая заболевания людей туляремией в Мало-Дербетовском районе. С 1990 года и по 2000 год эпизоотий туляремии на обслуживаемой территории не зарегистрировано, однако осенью 1992 года были обнаружены серопозитивные погадки хищных птиц в Сарпинском районе. В июле 2001г. была выделена культура туляремийного микроба при исследовании пробы воды из водохранилища Аршань-Зельмень в Сарпинском районе (лаборатория ООИ ЦГСЭН в РК). Осенью того же года Сарпинским э/о были выделены 4 штамма Fr. tularensis: 2 - по адресам 1433808613, Аз. 195°, 11 км от п.Тундутово (Малодербетовский район) и 1433800631, Аз. 200°, 14 км от п.Тундутово (Сарпинский район) соответственно; и 2 из воды водохранилища Аршань - Зельмень.
В апреле 2001 года был зарегистрирован случай заболевания людей в Малодербетовском районе (заболевший охотился на ондатру).
В 2002г – 2015гг. эпизоотий и случаев заболевания людей туляремией зарегистрировано не было.
Эпизоотологическое обследование на туляремию планируется проводить параллельно с обследованием на чуму. Особое внимание будет уделено влажным биотопам, орошаемым участкам, расположенным в северной части Сарпинской низменности - окрестностях п.п. М.Дербеты, Ханата, где имеются благоприятные условия для «укоренения» туляремийной инфекции (оросительные каналы, берега водоемов).
Планируется обследовать берега водоемов и влажные биотопы на Ергенинской возвышенности в окрестностях п.п. Аршань-Зельмень, Садовое, где ранее были выделены культуры туляремийного микроба.
Кроме грызунов и насекомоядных, носителей туляремии, для исследования будут отбираться пробы внешней среды: вода открытых водоёмов, фураж, солома, сено.
В связи с увеличением ареала серой крысы будет проводиться учёт её численности и отлов в открытых биотопах для лабораторного исследования.
Отловленные животные без патолого - анатомических изменений, характерных для туляремии, будут исследоваться бактериологическим методом с использованием FT - агара, обеспечивающего рост единичных клеток туляремийного микроба при посеве взвеси из растёртых тканей органов животного. Для приготовления одной суспензии будут объединяться печень и селезёнка от 8-10-и мелких млекопитающих, более крупные животные будут исследоваться индивидуально. Посевы будут выдерживаться при 37°С в течение 10 суток.
Трупы зверьков и животные, у которых при вскрытии обнаружатся патолого - анатомические изменения, будут исследоваться с применением бактериологического, биологического (при наличии биопробных животных) и серологического методов. При этом будет производиться посев селезёнки, печени и лимфатических узлов. Так как исследование будет проводиться параллельно и на чуму, заражённые суспензией органов биопробные животные (белые мыши, при их наличии), в случае их выживания, будут забиваться на 9-е сутки с последующим высевом на чашки с FT- агаром суспензии селезёнки.
Серологические исследования суспензий органов трупов, грызунов с изменениями внутренних органов, костных останков грызунов, погадок хищных птиц, других объектов внешней среды на наличие антигена туляремийного микроба будут состоять в постановке РНАт с антигенным туляремийным диагностикумом(и исследовании методом ПЦР на наличие ДНК туляремийного микроба на базе станции).
Режим обеззараживания суспензий внутренних органов, смывов с объектов внешней среды, костных останков, субстратов гнезд грызунов, погадок хищных птиц, предназначенных для серологического исследования: кипячение в течение 20 минут с последующим добавлением формалина до 4-процентной концентрации и экспозицией в течение 1 часа при комнатной температуре; для исследования методом ПЦР: добавление мертиолята натрия до конечной концентрации 1:10000 с последующим прогреванием при 37ºС в течение 30-ти минут с последующей экспозицией до 1 часа, при комнатной температуре.
Объём планируемых мероприятий представлен в таблице І.
Работа по конго - крымской геморрагической лихорадке
Эпидемиологическую обстановку по ККГЛ на территории деятельности Сарпинского эпидотряда можно охарактеризовать как неблагополучную.
Начиная с 2002 года, ежегодно отмечаются случаи заболевания людей этой инфекцией, в том числе со смертельным исходом. В 2007 году на территории Сарпинского района зарегистрировано 10 случаев заболевания людей ККГЛ: СПК «Рассвет» - 2 чел., п.Каажахин - 1 чел., п.Салын-Тугтун - 1 чел., с.Садовое - 2 чел., СПК «Кануковский» - 1 чел., 1 чел. - житель пос.Овата Целинного района, 1 чел. - житель пос. Прикумский Черноземельского р-на и 1 чел. - житель республики Дагестан. На территории Малодербетовского р-на зарегистрировано 2 случая заболевания людей ККГЛ. В 2008 году на территории Сарпинского района зарегистрировано 4 случая заболевания людей ККГЛ: с.Садовое – 3 чел., и п.Кировский – 1 чел. В 2011 г. на территории Сарпинского района зарегистрирован 1 случай заболевания людей ККГЛ.
При исследовании методом ИФА иксодовых клещей, собранных на территории Сарпинского э/отряда регулярно выявлялись зараженные вирусом ККГЛ клещи в т.ч. в 2013г. – в 1 пробе от 6-ти иксодовых клещей, снятых с КРС по адресу: 1433800443, п.Шарнуты.
В 2015г. при исследовании в ИФА суспензии клещей H.marginatum, снятых с 5 голов КРС в кол-ве 10 экз. и 20-ти экз. клещей H.scupense в одной пробе, добытых 17.04.15 г. по адресу: 00621 Аз 122º, 8,3 км от с.Малые Дербеты получено 2 положительных результата на наличие антигена вируса ККГЛ. При исследовании в ИФА суспензии клещей H.marginatum, снятых с 4-х голов МРС в кол-ве 10-и экз. в одной пробе, добытых 19.04.15 г. по адресу: 01723 Аз 279º, 5,5 км от с. Обильное и клещей H.marginatum, снятых с 2-х голов КРС в кол-ве 10-ти экз. в одной пробе, добытых 20.04.15г. по адресу: 01814 Аз165º, 8,5 км. от п. Аршань-Зельмень получено 2 положительных результата на наличие антигена вируса ККГЛ.
Таким образом, регистрация случаев заболеваний людей ККГЛ, выявление зараженных клещей добытых на территории деятельности Сарпинского эпидотряда указывает на то, что природный очаг находится в состоянии повышенной активности.
Осенью 2016г. планируется исследование материала от носителей, добытых на территории эпидотряда на наличие антигена вируса ККГЛ, которое будет проводиться на базе баклаборатории станции методом ИФА.
Объём планируемых мероприятий представлен в таблице І.
Работа по лихорадке Западного Нила
В Республике Калмыкия с 2010 года регистрируются единичные случаи заболевания людей лихорадкой Западного Нила.
В 2013 году при исследовании в ПЦР на наличие РНК патогенных видов лептоспир суспензий почек 5-ти землероек, отловленных на территории Малодербетовского района был получен положительный результат. Осенью 2014 г. при исследовании суспензии почек 6-и домовых мышей, добытых по адресу: 1433804123, Аз 298° 6,8 км от п.Овата выявлена 16S РНК патогенных геновидов лептоспир.
В связи с циркуляцией вируса ЛЗН в природном очаге на территории Республики Калмыкия эпизоотологический прогноз на 2016 год по ЛЗН неблагоприятный.
На основании приказа руководителя Роспотребнадзора от 18 апреля 2011г. № 385 «О совершенствовании эпидемиологического надзора и профилактики лихорадки Западного Нила в Российской Федерации» на территории деятельности эпидотряда будет продолжен мониторинг за природным очагом с целью определения эпидемиологической опасности территории.
Осенью 2015г. планируется исследование материала от носителей, добытых на территории эпидотряда на наличие антигена вируса ЛЗН, которое будет проводиться на базе баклаборатории станции методом ИФА.
Объём планируемых мероприятий представлен в таблице І.
Работа по лептоспирозам