Соотношение вероятности дифтерии и сочетания ангины с носительством токсигенных дифтерийных бактерий

Активность ( МЕ/мл ) дифтерийного антитоксина	Соотношение
Меньше 0,03   0,03 -0,5   больше 0,5	12,3 : 1   1 :2,5 1 :5,7

Метод по определению антигенсвязывающих лимфоцитов ( АСЛ) :

Принцип : Этот диагностический подход основан на том, что не позже, чем через 3 суток после контакта с антигеном в крови практически всех людей обнаруживаются лимфоциты, специфически связывающие антиген. Такое определение проводят при исследовании комплекта иммунореагентов для экстренной специфической диагностики дифтерии. Комплект иммунореагентов для экстренной специфической диагностики дифтерии выпускает НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней МЗ РК ( 480002, Алматы, ул. М, Макатаева, 34).

Состав комплекта и необходимое оснащение : Комплект сотоит из 1 флакона ( 6,6 мл ) диагностикума ( Д) и 1 флакона ( 6,6 мл) контрольного диагностикума ( Дк). Д представляет собой взвесь фиксированных эритроцитов кур, сенсибилизированных дифтерийным анатоксином ( Ед), и фиксированных эритроцитов быка, сенсибилизированных столбнячным анатоксином ( Ес), Дк представляет собой взвесь фиксированных эритроцитов кур и быка в тех же концентрациях, в которых они входят в Д, но не сенсибилизированных анатоксинами. Дк применяют для определения уровня спонтанного розеткообразования.

При проведении анализа, кроме иммунореагентов, используют следующие реактивы, препараты и оборудование:

- Гепарин, Московский эндокринный завод;

- Фиколл -400, Pharmacia Fine Chemical ( Швеция) или Serva ( ФРГ), верографин, Spofa ( Чехия), вместо верографина для приготовления градиента можно применить урографин, уротраст, триамбраст Spofa ( Чехия) и тразограф ( Испания).

Фиколл-верографиновый градиент готовят смешением 12 частей 9 % раствора фикола 400, приготовленного на дистиллированной воде, и 5 частей 33,9 % раствора верографина ( или заменяющего его препарата), приготовленного на дистиллированной воде. Правильность приготовления градиента контролируют ареометром:

- 3 % раствор уксусной кислоты;

- 3 % расвор глутарового альдегида,

-0,1% раствор метиленового синего;

-- смесь Никифорова,

- 96 этиловый спирт;

- ареометр, диапозон измеряемых им плотностей должен включать 1,077 – 1, 079 г/См ;

- дозаторы пипеточные на 0,02 и 0,1 мл;

- камера Горяева;

- микроскоп бинокулярный;

- центрифуга с горизонтальным ротором;

- термрстат на 37 с;

- холодильник на 4 С;

- счетчик клеток ( для регистрации лимфоцитов), например, счетчик лабораторный СЛ-I ТУ 64- I - 3031-78, москва;

- пробирки, пипетки градуированные и пастеровские, предметные и покровные стекла, резиновая груша.

Фиколл- 400 может быть приобретен через фирмы, поставляющие в Республику Казахстан препараты и химреактивы, верографин и заменяющие гео препараты – через аптечную сеть.

Получение крови и выделение лимфоцитов, реакцию смешанного розеткообразования, учет результатов проводят в соответствии с Инструкцией по применению

иммунореагентов для экстренной специфической диагностики дифтерии, прилагаемой к комплекту иммунореагентов для экстренной специфической диагностики дифтерии.

Диагностическую оценку результатов анализа проводят на основе статистического определения достоверной разности содержания выявленных розеткообразующих лимфоцитов в мазках с опытным ( Д) и контрольным ( Дк) диагностикумами. Антигенсвязывающие лимфоциты данной специфичности выявлены, если такая разность статистически достоверна.

При клинической интерпретации результатов определенияантигенсвязывающих лимфоцитов исходят из следующего:

Антигенсвязывающие лимфоциты данной специфичности обнаруживаются в результате недавнего контакта с соответствующим антигеном. Таким антигеном может явиться не только токсин дифтерийных бактерий или столбнячных бацилл, но и дифтерийный или столбнячный анатоксин ( компоненты вакцин). Поэтому при обнаружении антигенсвязывающих лимфоцитов дифтерийной специфичности необходимо дифференцировать возможность заболевания и поствакцинальную иммунную реакцию.

Критерии такой дифференсации:

· вакцинальный анамнез: если обследуемый был вакцинирован за 2-3 недели до обследования, выявление антигенсвязывающие лимфоцитов дифтерийной специфичности может расцениваться как результат вакцинальной иммунной реакции:

· поскольку дифтерийная моновакцина практически не используется, при вакцинальной реакции на АКДС, АДС и АДС-М одновременное обнаружение АСЛ дифтерийной и столбнячной специфичности даже при отсутствии анамнестических данных о недавней вакцинации расценивается, как результат недавней вакцинации.

Антигенсвязывающие лимфоциты дифтерийной специфичности могут быть выявлены не только у больного дифтерией, но и у носителя токсигенных дифтерийных бактерий. Поэтому при положительном результате обнаружения АСЛ дифтерийной специфичности необходимо дифференцировать дифтерию и носительство токсигенных дифтерийных бактерий у обследуемого с другим заболеванием ( чаще всего- ангины).

Критерии такой дифференсации:

-клинические, их надежность ограничена,

- серологический, если у обследованного пациента в начале заболевания выявлен защитный уровень дифтерийного антитоксина, вероятность клинически выраженной формы дифтерийной инфекции тем меньше, чем выше активность дифтерийного антитоксина.

Антигенсвязывающие лимфоциты дифтерийной специфичности обнаруживаются в течение всего периода заболевания. Поэтому метод может быть использован не только для ранней диагностикидифтерии. Введение специфической дифтерийной ( лечебной) сыворотки не мешает последующему обнаружению АСЛ.

Метод определения антигенсвязывающих лимфоцитов может быть при необходимости использован для обследования контактных в очагах дифтерии с целью возможно более раннего выявления больных и носителей токсигенных дифтерийных бактерий.

Зав. лабораторией

иммунодиагностики КИЭМИБ Б. В. Каральник