Окраска препаратов гематоксилином-эозином

Вариант 1. Прогрессивное окрашивание

Оснащение: емкости для окраски препаратов*

Реактивы: гематоксилин Эрлиха, 1% водный раствор эозина, дистиллированная вода

Алгоритм действий:

- депарафинированные срезы перенести в дистиллированную воду

- окрасить гематоксилином Эрлиха – 2-5 мин

- промыть дистиллированной водой - 1 мин

- промыть водопроводной водой - 3-5 мин

- окрасить 1% раствором эозина – 0,5-1 мин

- быстро промыть дистиллированной водой

- провести обезвоживание и заключение препаратов

Вариант 2 . Регрессивное окрашивание

Оснащение: емкости для окраски препаратов*

Реактивы: гематоксилин Эрлиха, 1% водный раствор эозина, 1% растворе хлористоводородной кислоты в 70% спирте, дистиллированная вода

Алгоритм действий:

- депарафинированные срезы перенести в дистиллированную воду

- окрасить гематоксилином Эрлиха – 5-10 мин

- ополоснуть дистиллированной водой

- дифференцировать в 1% растворе хлористоводородной кислоты в 70% спирте – 1-2 с

- промыть водопроводной водой - 5-10 мин

- осуществить контроль под микроскопом: если хроматин и ядрышко видны недостаточно четко, то дифференцировку следует повторить

- ополоснуть дистиллированной водой

- окрасить 1% раствором эозина – 0,5-1 мин

- быстро промыть дистиллированной водой

- провести обезвоживание и заключение препаратов

Окраска препаратов пикрофуксином

Оснащение: емкости для окраски препаратов*

Реактивы: железный гематоксилин Вейгерта или гематоксилин Эрлиха, пикрофуксин, дистиллированная вода,

Алгоритм действий:

- депарафинированные срезы перенести в дистиллированную воду

- окрасить железным гематоксилином Вейгерта или гематоксилином Эрлиха – 2-5 мин

- ополоснуть в дистиллированной воде

- окрасить в пикрофуксином - 3-5 мин.

- промыть дистиллированной водой,

- быстро провести обезвоживание в спиртах, начиная с 96%

- провести заключение препаратов

* В качестве емкости для окраски можно использовать различные стеклянные и пластиковые сосуды с горизонтальным и вертикальным расположением стекол

Обезвоживание и просветление препаратов »

Оснащение: бюксы с притертой крышкой, штатив для бюксов,

Реактивы: ксилол, спирты различной концентрации (70%-100%),

Алгоритм действий:

- Поместить стекла с окрашенными срезами в раствор 70% Спирта по 1-2 мин в

- Перенести стека в раствор 96% Спиртакаждом растворе

- Перенести стека в раствор 100% Спирта

- Поместить стекла в раствор КсилолаIна 1-3 мин

- Поместить стекла в раствор КсилолаПна 1-3 мин

- После чего провести заключение препаратов.

Заключение препаратов»

Оснащение: планшет для стекол, препаровальная игла, покровные стекла, бумажные салфетки, стеклянная палочка

Реактивы: среда для заключения*

Алгоритм действий:

- Извлечь стекло со срезом из ксилола

- Удалить салфеткой остатки ксилола по краям стекла и с обратной стороны

- Положить стекло на планшет

- Нанести каплю среды для заключения на край среза
- Поставить у края капли покровное стекло под углом 45°, при этом заключающая среда должна растечься по краю покровного стекла - Придерживая препаровальной иглой свободный край покровного стекла, медленно опустить его на срез
- Оставить стекла в горизонтальном положении до полного высыхания заключающей среды

_____________________________________________________________________________

* В качестве монтирующих сред для заключения гистологических препаратов можно использовать готовые водорастворимые (а) и водонерастворимые (б, в) смеси акриловых смол или приготовить самостоятельно бальзам (пихтовый,канадский) и полистирол (см. тему «Приготовление оптически прозрачных сред для заключения препаратов»).

А Б В

«Приготовление оптически прозрачных сред для заключения препаратов»

Вариант 1 .Приготовление бальзама

Оснащение: банка с широким горлом и притертой крышкой, термостат, стеклянная палочка

Реактивы: сухой бальзам(пихтовый, канадский), ксилол

Алгоритм действий:

- Кусочки сухого бальзама поместить на дно банки

- Залить бальзам ксилолом

- Поставить банку в термостат при температуре 37-40°С.

- Слить в другую банку,растворившуюся до консистенции жидкого меда, часть ксилола.

- Долить в первую банку новую порцию ксилола

- Хранить приготовленный бальзам в плотно закрытой посуде.

Вариант 2 .Приготовление полистирола

Оснащение: банка с широким горлом, термостат, весы, мерная колба, мерная пипетка, стеклянная палочка

Реактивы: полистирол, ксилол, дибутилфталат

Алгоритм действий:

- Приготовить навеску из 100 г полистирола

- Поместить полистирол в банку с широким горлом

- Отмерить и налить в банку 100 мл ксилола

- Добавить 12 мл дибутилфталата

- Поместить в термостат при температуре 37°С на несколько часов, периодически помешивать

- Готовую смолу хранить в плотно закрытой посуде.